{"id":57264,"date":"2018-03-09T22:45:05","date_gmt":"2018-03-09T22:45:05","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/analisis-cuantitativo-de-la-eficacia-reparadora-medular-de-la-glia-olfativa-y-modificacion-genetica-para-evitar-su-senescencia\/"},"modified":"2018-03-09T22:45:05","modified_gmt":"2018-03-09T22:45:05","slug":"analisis-cuantitativo-de-la-eficacia-reparadora-medular-de-la-glia-olfativa-y-modificacion-genetica-para-evitar-su-senescencia","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/neuropatologia\/analisis-cuantitativo-de-la-eficacia-reparadora-medular-de-la-glia-olfativa-y-modificacion-genetica-para-evitar-su-senescencia\/","title":{"rendered":"Analisis cuantitativo de la eficacia reparadora medular de la glia olfativa y modificacion genetica para evitar su senescencia"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> M Beatriz Llamus Trosi <\/strong><\/h2>\n<p>1. Antecedentes y estado actual del tema. el sistema nervioso perif\u00e9rico y el central de los mam\u00edferos adultos no responden por igual a las lesiones. Mientras que los axones da\u00f1ados son capaces de regenerar a trav\u00e9s del ambiente permisivo del snp, la naturaleza inhibitoria del  snc evita el crecimiento de los axones produci\u00e9ndose una desconexi\u00f3n permanente de las  neuronas lesionadas y sus dianas y una p\u00e9rdida irreversible de todas las funciones mediadas por dichas neuronas. una de las primeras iniciativas para intentar la reparaci\u00f3n de lesiones en el sistema nervioso central, fue la propuesta de cajal de que transferir c\u00e9lulas gliales de un \u00e1rea en la que los axones puedan regenerar, podr\u00eda transferir dicha capacidad de regeneraci\u00f3n a otras \u00e1reas en las que este fen\u00f3meno no fuera posible. En los \u00faltimos a\u00f1os, muchos grupos de cient\u00edficos han centrado sus esfuerzos en encontrar la forma de evitar el ambiente no permisivo del sistema nervioso central y proporcionarles a los axones las condiciones apropiadas para su elongaci\u00f3n tras una lesi\u00f3n. As\u00ed, se han ido probando en roedores, una gran variedad de estrategias reparadoras, que han conseguido una recuperaci\u00f3n funcional parcial de los animales lesionados [1-9]. de entre todas estas t\u00e9cnicas, el trasplante de gl\u00eda envolvente de bulbo olfatorio (oeg) ha resultado hasta ahora una de las m\u00e1s prometedoras. La oeg central presenta, m\u00faltiples caracter\u00edsticas que le resultan \u00fatiles para promover la regeneraci\u00f3n axonal ya que no s\u00f3lo es fuente de numerosos factores tr\u00f3ficos [10, 11], si no que es capaz de neutralizar las se\u00f1ales inhibitorias para el crecimiento axonal presentes en el   medio [12-14] y de migrar proporcionando un sustrato f\u00edsico para la regeneraci\u00f3n. las habilidades de la oeg para reparar lesiones medulares han sido ampliamente demostradas utilizando distintos modelos experimentales de (revisado en [15] y [16]). Los experimentos de lesi\u00f3n en ra\u00edces dorsales de la dra. Ram\u00f3n, [17], fueron los primeros en demostrar que los trasplantes de oeg , no s\u00f3lo promov\u00edan el crecimiento axonal, sino tambi\u00e9n la reentrada y elongaci\u00f3n de los mismo por el snc. Estos resultados fueron corroborados por otros grupos [18] que demostraron que estos axones realizaban conexiones funcionales con sus dianas. El uso de trasplante de oeg en fase aguda de lesiones medulares completas en rata adulta acab\u00f3 por confirmar definitivamente la capacidad de este tipo celular para promover la regeneraci\u00f3n axonal de larga distancia[19].  2. Bibliograf\u00eda m\u00e1s relevante. l. Bregman, b.S., Regeneration in the spinal cord. Curr opin neurobiol, 1998. 8(6): p. 800-7. 2.   Reier, p.J., Cellular transplantation strategies for spinal cord injury and translational neurobiology. Neurorx, 2004. 1(4): p. 424-451. 3. Tuszynski, m.H., Et al., New strategies in neural repair. Prog brain res, 2002. 138: p. 401-9. 4. Horner, p.J., F.H. Gage, and 20518951, regenerating the damaged central nervous system. Nature, 2000. 407(6807): p. 963-70. 5. Santos-benito, f.F. And a. Ramon-cueto, olfactory ensheathing glia transplantation: a therapy to promote repair in the mammalian central nervous system. Anat rec, 2003. 27lb(1): p. 77-85. 6. Geller, h.M. And j.W. Fawcett, building a bridge: engineering spinal cord repair. Exp neurol, 2002. 174(2): p. 125-36. 7.  Lopez-vales, r., Et al., Chronic transplantation of olfactory ensheathing cells promotes partial recovery after complete spinal cord transection in the rat. Glia, 2007. 55(3): p. 303-11. 8. Schwab, j.M., Et al., Experimental strategies to promote spinal cord regeneration&#8211; an integrative perspective. Prog neurobiol, 2006. 78(2): p. 91-116. 9. Deumens, r., Et al., Olfactory ensheathing cells, olfactory nerve fibroblasts and biomatrices to promote long-distance axon regrowth and functional recovery in the dorsally hemisected adult rat spinal cord. Exp neurol, 2006. 200(1): p. 89-103. 10. Goldberg, d.L. And b.A. Barres, the relationship between neuronal survival and regeneration. Annu rev neurosci, 2000. 23: p. 579-612, ll. Ramon-cueto, a. And 3. Avila, olfactory ensheathing glia: properties and function. Brain res bull, 1998. 46(3): p. 175-87. 12.  Franceschini, i.A. And s.C. Barnett, low-affinity ngf-receptor and e-n-cam expression define two types of olfactory nerve ensheathing cells that share a common lineage. Dev biol, 1996. 173(1): p. 327-43. 13.     Barnett, s.C, et al., Identification of a human olfactory ensheathing cell that can effect transplant-mediated remyelination of demyelinated cns axons. Brain, 2000. 123(pt 8)(1): p. 1581-8. 14. Doucette, r., Immunohistochemical localization of laminin, fibronectin and collagen type iv in the nerve fiber layer of the olfactory bulb. Int 3 dev neurosci, 1996. 14(7-8): p. 945-59. 15.\tRamon-cueto, a., Olfactory ensheathing glia transplantation into the injured spinal cord. Prog brain res, 2000. 128: p. 265-72. 16.        Mackay-sim, a., Olfactory ensheathing cells and spinal cord repair. Keio 3 med, 2005. 54(1): p. 8-14. 17.        Ramon-cueto, a. And m. Nieto-sampedro, regeneration into the spinal cord of transected dorsal root axons is promoted by ensheathing glia transplants. Exp neurol, 1994. 127(2): p. 232-44. 18.\tNavarro, x., Et al., Ensheathing glia transplants promote dorsal root regeneration and spinal reflex restitution after multiple lumbar rhizotomy. Ann neurol,  1999. 45(2): p. 207-15. 19. Ramon-cueto, a., Et al., Functional recovery of paraplegic rats and motor axon regeneration in their spinal cords by olfactory ensheathing glia. Neuron, 2000. 25(2): p. 425-35.  3. Objetivos de la investigaci\u00f3n. en general, el principal objetivo de esta tesis es ampliar los conocimientos sobre las propiedades de la oeg que la convierten en una terapia prometedora para su uso en lesi\u00f3n medular.  en primer lugar, pretendemos modificar este tipo celular in vitro con el objetivo de aumentar su vida media \u00fatil en cultivo con lo que se favorecerla la disponibilidad de grandes cantidades de oeg tanto para posibles estudios subsiguientes de trasplante o caracterizaci\u00f3n molecular como para la creaci\u00f3n de bancos de c\u00e9lulas.  en segundo lugar, en la parte \u00abin vivo\u00bb de esta tesis pretendemos conocer y cuantificar las capacidades regenerativas del trasplante de oeg en la fase aguda de una lesi\u00f3n medular concretando el tipo de haces que son capaces de regenerar en respuesta a dicho tratamiento. Por otro lado, nos planteamos estudiar en la zona de la lesi\u00f3n los cambios que se producen a consecuencia de la presencia de la oeg cuantificando las diferencias encontradas. adem\u00e1s, nos propusimos probar la eficacia de un m\u00e9todo de estabilizaci\u00f3n vertebral que fue utilizado en nuestros animales operados con el objetivo de estudiar la conveniencia de la estabilizaci\u00f3n vertebral tras una lesi\u00f3n medular y de analizar las modificaciones en nuestro modelo de terapia celular, introducidas por dicha t\u00e9cnica.  4.     Metodolog\u00eda, y plan de trabajo. para alcanzar los objetivos planteados en este trabajo se emplearon diferentes t\u00e9cnicas en funci\u00f3n de la fase abordada. en primer lugar, para cumplir el primer objetivo se llevaron a cabo los cultivos y subcultivos de la oeg de rata adulta que se siguieron en cultivo durante aproximadamente seis meses, as\u00ed como la obtenci\u00f3n del virus, la infecci\u00f3n de la oeg con el mismo y t\u00e9cnicas inmunocitoqu\u00edmicas para la detecci\u00f3n de diversos marcadores. Esta etapa se prolong\u00f3 durante los dos primeros a\u00f1os de la tesis. en segundo lugar, la parte in vivo de este trabajo, exig\u00eda el aprendizaje de las t\u00e9cnicas de cirug\u00eda tanto de lesi\u00f3n completa como incompleta. Para esta \u00faltima, se realiz\u00f3 una estancia en el laboratorio del dr. M\u00ed\u00bcller en la universidad de dusseldorf, y luego se puso a punto la t\u00e9cnica en el laboratorio. Adem\u00e1s, se utiliz\u00f3 la t\u00e9cnica de fijaci\u00f3n con el cemento dental en los animales operados.  por otro lado, una vez lesionados los animales se requirieron t\u00e9cnicas de cuidados y rehabilitaci\u00f3n, as\u00ed como la puesta a punto de los m\u00faltiples test comportamentales que se llevaron a cabo en los distintos casos.    por \u00faltimo, para la obtenci\u00f3n de datos histol\u00f3gicos de estos animales, se realizaron t\u00e9cnicas de trazado neuroanat\u00f3mico tanto anter\u00f3qrado (con biotindextranlisina) como retr\u00f3grado (con peroxidasa). Una vez sacrificadas las ratas por perfusi\u00f3n, se extrajeron tanto la m\u00e9dula como el enc\u00e9falo para su procesado y corte con el criostato y el revelado de los trazadores. Tambi\u00e9n se detectaron por t\u00e9cnicas inmunohistoqu\u00edmicas la expresi\u00f3n de distintas mol\u00e9culas implicadas en procesos de cicatrizaci\u00f3n o respuesta a lesi\u00f3n. para la cuantificaci\u00f3n de las im\u00e1genes obtenidas de las tinciones realizadas se utiliz\u00f3 el programa de an\u00e1lisis de im\u00e1genes metamorph y para el an\u00e1lisis estad\u00edstico de los datos se utiliz\u00f3 el programa spss.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Analisis cuantitativo de la eficacia reparadora medular de la glia olfativa y modificacion genetica para evitar su senescencia<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Analisis cuantitativo de la eficacia reparadora medular de la glia olfativa y modificacion genetica para evitar su senescencia <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 M Beatriz Llamus Trosi <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Miguel hern\u00e1ndez de elche<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 27\/02\/2007<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Almudena Ramon Cueto<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: isabel Fari\u00f1as <\/li>\n<li>enrique Viosca (vocal)<\/li>\n<li>Jos\u00e9 Luis Lanciego perez (vocal)<\/li>\n<li>Jos\u00e9 Luis Venero recio (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de M Beatriz Llamus Trosi 1. 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