{"id":57840,"date":"2018-03-09T22:45:40","date_gmt":"2018-03-09T22:45:40","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-de-la-interaccion-de-la-protea%c2%adna-p6-con-el-dna-del-bactriofago-phi29-de-bacillus-subtilis\/"},"modified":"2018-03-09T22:45:40","modified_gmt":"2018-03-09T22:45:40","slug":"estudio-de-la-interaccion-de-la-protea%c2%adna-p6-con-el-dna-del-bactriofago-phi29-de-bacillus-subtilis","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica-molecular\/estudio-de-la-interaccion-de-la-protea%c2%adna-p6-con-el-dna-del-bactriofago-phi29-de-bacillus-subtilis\/","title":{"rendered":"Estudio de la interacci\u00f3n de la prote\u00edna p6 con el dna del bactri\u00f3fago phi29 de bacillus subtilis."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Martin Alcorlo Pages <\/strong><\/h2>\n<p>Estudio de la interacci\u00f3n de la prote\u00edna p6 con el dna del bactri\u00f3fago phi29 de bacillus subtilis.   la prote\u00edna p6 del bacteri\u00f3fago phi29 de bacillus subtilis es esencial para el desarrollo del fago. Activa la iniciaci\u00f3n de la replicaci\u00f3n del dna y promueve el paso de la transcripci\u00f3n temprana a la tard\u00eda. Estas actividades requieren la formaci\u00f3n de un nucleocomplejo proteico en el cual el dna forma una superh\u00e9lice dextr\u00f3gira alrededor de un n\u00facleo proteico. Sin embargo, no existe evidencia de la uni\u00f3n de la prote\u00edna p6 al dna de phi29 in vivo. En este trabajo, la uni\u00f3n de la prote\u00edna p6 al dna se ha estudiado mediante la t\u00e9cnica de entrecruzamiento e inmunoprecipitaci\u00f3n de cromatina (x-chip) y posterior amplificaci\u00f3n de secuencias espec\u00edficas mediante pcr cuantitativa. Los resultados han indicado que p6 se une a la mayor\u00eda del genoma viral in vivo, aunque con mayor afinidad a los extremos del dna, donde se localizan los or\u00edgenes de replicaci\u00f3n. La uni\u00f3n de p6 a las diferentes regiones del dna de phi29 esta modulada por las propiedades estructurales de las secuencias nucleot\u00eddicas, y la mayor afinidad por ambos extremos esta probablemente relacionada con la presencia de secuencias cuyas propiedades de curvabilidad favorecen la formaci\u00f3n del complejo p6-dna. La uni\u00f3n de p6 a lo largo del genoma de phi29 sugiere fuertemente que las funciones de esta prote\u00edna en replicaci\u00f3n y transcripci\u00f3n pueden ser propiedades integradas en una funci\u00f3n m\u00e1s global, actuando a modo de prote\u00edna tipo histone-like. Adem\u00e1s, la prote\u00edna p6 se une con mayor afinidad al dna de phi29 con respecto al dna plasm\u00eddico. Esta especificidad puede ser debida a la preferencia de p6 por unirse a dna superenrollado menos negativamente. Por lo que la dependencia del estado topol\u00f3gico que presenta la uni\u00f3n de p6 puede explicar su uni\u00f3n preferencial al dna viral con respecto al dna plasm\u00eddico o bacteriano, que presentar\u00edan niveles de superenrollamiento negativo mayores que los encontrados en el dna de phi29. La uni\u00f3n de p6 al dna de phi29 se incrementa enormente en presencia de novobiocina. El hecho de que la girasa celular se requiera para la replicaci\u00f3n viral indica que, aunque el dna de phi29 no se encuentra cerrado covalentemente, si se encuentra topol\u00f3gicamente restringido. Las prote\u00ednas virales p1 y p17 se requieren para el mantenimiento de una correcta topolog\u00eda del dna viral. Tambi\u00e9n se estudiado la uni\u00f3n in vivo de la prote\u00edna p6 del fago ga-1, relacionado con phi29. Esta prote\u00edna ha mostrado una dependencia de superenrollamiento en su interacci\u00f3n con el dna mucho menor que la descrita para la prote\u00edna p6 de phi29. Adem\u00e1s aunque la p6 de ga-1 es capaz de unirse al dna de phi29 in vivo, no es capaz de transcomplementar una mutaci\u00f3n sin sentido en el gen 6 de phi 29. Indicando que el nucleocomplejo formado en el sistema heter\u00f3logo no es funcional. La capacidad de la prote\u00edna p6 para unirse a dna a permitido su empleo como sonda para poder monitorizar el proceso de inyecci\u00f3n del dna viral. Con esta aproximaci\u00f3n, se ha podido comprobar que la prote\u00edna viral de membrana p16.7 se requiere, junto con la prote\u00edna p17, para el desarrollo eficiente de la segunda etapa de la inyecci\u00f3n. Finalmente, se ha caracterizado cuantitativamente in vitro la heteroasociaci\u00f3n p6-dna en soluci\u00f3n, en t\u00e9rminos de estequiometr\u00eda, afinidad y cooperatividad, emple\u00e1ndose para ello la t\u00e9cnica de ultracentrifugaci\u00f3n anal\u00edtica. Este an\u00e1lisis ha mostrado que la formaci\u00f3n del complejo p6-dna puede ser ajustada a la funci\u00f3n emp\u00edrica de hill. Tambi\u00e9n se ha analizado el efecto de la aglomeraci\u00f3n macromolecular en la formaci\u00f3n del complejo p6-dna mediante equilibrio de sedimentaci\u00f3n.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio de la interacci\u00f3n de la prote\u00edna p6 con el dna del bactri\u00f3fago phi29 de bacillus subtilis.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio de la interacci\u00f3n de la prote\u00edna p6 con el dna del bactri\u00f3fago phi29 de bacillus subtilis. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Martin Alcorlo Pages <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Aut\u00f3noma de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 30\/03\/2007<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jos\u00e9 Miguel Hermoso  Nu\u00f1ez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: jose Berenguer <\/li>\n<li>raimundo Freire betancort (vocal)<\/li>\n<li>Manuel Serrano rios (vocal)<\/li>\n<li>gloria Del solar  dongil (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Martin Alcorlo Pages Estudio de la interacci\u00f3n de la prote\u00edna p6 con el dna del bactri\u00f3fago phi29 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