{"id":58910,"date":"2007-08-06T00:00:00","date_gmt":"2007-08-06T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/caracterizacion-estructural-y-funcional-del-regulador-styr-de-la-ruta-de-biodegradacion-de-estireno-en-pseudomonas-sp-y2\/"},"modified":"2007-08-06T00:00:00","modified_gmt":"2007-08-06T00:00:00","slug":"caracterizacion-estructural-y-funcional-del-regulador-styr-de-la-ruta-de-biodegradacion-de-estireno-en-pseudomonas-sp-y2","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/procesos-metabolicos\/caracterizacion-estructural-y-funcional-del-regulador-styr-de-la-ruta-de-biodegradacion-de-estireno-en-pseudomonas-sp-y2\/","title":{"rendered":"Caracterizacion estructural y funcional del regulador styr de la ruta de biodegradacion de estireno en pseudomonas sp y2"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Mar\u00eda  Jose Rodes Martinez <\/strong><\/h2>\n<p>El prop\u00f3sito principal que se ha perseguido en esta tesis es el de profundizar en el conocimiento del regulador de respuesta styr, implicado en la biodegradaci\u00f3n del estireno en pseudomonas sp. Y2, con un objetivo doble: la obtenci\u00f3n de datos que permitan en un futuro el empleo de esta  cepa en procesos de biorremediaci\u00f3n y biotransformaci\u00f3n del estireno, y avanzar en la  comprensi\u00f3n del mecanismo general de actuaci\u00f3n de los sistemas de dos componentes, muchos  de los cuales est\u00e1n implicados en procesos pat\u00f3genos en otros microorganismos.  hemos elaborado dos modelos estructurales te\u00f3ricos de styr, uno en ausencia de dna y otro en presencia de \u00e9ste, bas\u00e1ndonos en otros reguladores de respuesta de estructura conocida. Para comprobar la validez del modelo estructural del mon\u00f3mero que hab\u00edamos elaborado para styr realizamos una serie de experimentos incluyendo determinaci\u00f3n de la estructura secundaria por dicro\u00edsmo circular, proteolisis limitada con trombina, determinaci\u00f3n de puentes disulfuro y expresi\u00f3n y determinaci\u00f3n de la estructura secundaria del dominio n-terminal aislado. Continuando con la caracterizaci\u00f3n estructural hemos obtenido informaci\u00f3n acerca de la estabilidad t\u00e9rmica, qu\u00edmica y termodin\u00e1mica de la prote\u00edna utilizando fundamentalmente t\u00e9cnicas espectrosc\u00f3picas: dicro\u00edsmo circular y fluorescencia. en el apartado de caracterizaci\u00f3n funcional se han analizado las distintas funciones de la  prote\u00edna, tales como fosforilaci\u00f3n, dimerizaci\u00f3n, uni\u00f3n al dna y activaci\u00f3n de la transcripci\u00f3n,  empleando tanto t\u00e9cnicas bioqu\u00edmicas como gen\u00e9ticas. Asimismo, mediante el an\u00e1lisis de mutantes, hemos identificado cada una de las regiones implicadas en las distintas funciones\/interacciones en styr. Los resultados obtenidos nos han permitido elaborar una hip\u00f3tesis sobre su mecanismo funcional.  En base al mecanismo propuesto, la prote\u00edna styr en soluci\u00f3n presentar\u00eda dos dominios (n-terminal o receptor del grupo fosfato y c-terminal o de uni\u00f3n a dna) unidos por un conector. En ausencia de fosforilaci\u00f3n existir\u00eda un i\u00f3n mg2+ coordinado al asp-12, asp-55, arg-57 y al asp-11 a trav\u00e9s de una mol\u00e9cula de agua. El asp-55 es el residuo que acepta el grupo fosfato y seria estabilizado por la lys-105. Para completar la estabilizaci\u00f3n del grupo fosforilo, la cadena lateral de la thr-83 se aproximar\u00eda al sitio de fosforilaci\u00f3n formando un enlace de hidr\u00f3geno. Para mantener a la thr-83 en esta conformaci\u00f3n, la phe-102 adoptar\u00eda una orientaci\u00f3n mas interna ocupando el hueco dejado por la treonina. El reconocimiento del dna por los dominios c-terminales provocar\u00eda, simult\u00e1neamente, el acercamiento de los dominios n-terminales, que dimerizar\u00edan empleando la interfase   4\/?5 estabilizando el complejo formado con el dna. Para la formaci\u00f3n de los d\u00edmeros ser\u00eda imprescindible la flexibilizaci\u00f3n del conector, que podr\u00eda tener lugar tras el primer contacto de los dominios efectores con el dna. por \u00faltimo, a consecuencia de la fosforilaci\u00f3n existir\u00eda una repulsi\u00f3n del grupo fosforilo con el   asp-11 y asp-12 que se deplazar\u00edan hacia el asp-35, que a su vez, y debido tambi\u00e9n a repulsiones electrost\u00e1ticas as\u00ed como est\u00e9ricas, rotar\u00eda alej\u00e1ndose de los dos residuos \u00e1cidos y desplazando a la phe-34, afectando a la regi\u00f3n ?2- 2. Este residuo de fenilalanina, parcialmente expuesto, pasar\u00eda de una localizaci\u00f3n interna a una m\u00e1s externa con una disposici\u00f3n \u00f3ptima para la interacci\u00f3n con alg\u00fan factor a\u00fan por determinar pero esencial para la activaci\u00f3n transcripcional. \u00fanicamente el d\u00edmero fosforilado ser\u00eda capaz de activar la transcripci\u00f3n de los genes responsables de la degradaci\u00f3n de estireno. finalmente, hemos realizado un estudio comparativo de nuestra prote\u00edna con styr de pseudomonas fluorescens st. Nuestros datos experimentales demuestran que los mecanismos funcionales de ambas prote\u00ednas presentan diferencias muy significativas, a pesar de que la similitud entre ellas es superior al 90%.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Caracterizacion estructural y funcional del regulador styr de la ruta de biodegradacion de estireno en pseudomonas sp y2<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Caracterizacion estructural y funcional del regulador styr de la ruta de biodegradacion de estireno en pseudomonas sp y2 <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Mar\u00eda  Jose Rodes Martinez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Miguel hern\u00e1ndez de elche<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 08\/06\/2007<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jes\u00fas Miguel Sanz Morales<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Jos\u00e9 manuel Gonzalez ros <\/li>\n<li>subramanian Padmanabhar lyer (vocal)<\/li>\n<li>Jos\u00e9 Luis Garcia lopez (vocal)<\/li>\n<li>Juli\u00e1n Perera gonzalez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Mar\u00eda Jose Rodes Martinez El prop\u00f3sito principal que se ha perseguido en esta tesis es el de 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