{"id":60285,"date":"2018-03-09T22:48:07","date_gmt":"2018-03-09T22:48:07","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/mecanismos-de-regulacion-transcripcional-del-gen-que-codifica-para-la-kidney-y-androgen-regulated-protein-kap-en-relacion-a-la-seva-especificidad-de-tejido-y-control-hormonal\/"},"modified":"2018-03-09T22:48:07","modified_gmt":"2018-03-09T22:48:07","slug":"mecanismos-de-regulacion-transcripcional-del-gen-que-codifica-para-la-kidney-y-androgen-regulated-protein-kap-en-relacion-a-la-seva-especificidad-de-tejido-y-control-hormonal","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/barcelona\/mecanismos-de-regulacion-transcripcional-del-gen-que-codifica-para-la-kidney-y-androgen-regulated-protein-kap-en-relacion-a-la-seva-especificidad-de-tejido-y-control-hormonal\/","title":{"rendered":"Mecanismos de regulacion transcripcional del gen que codifica para la kidney y androgen regulated protein (kap) en relacion a la seva especificidad de tejido y control hormonal"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Neus Teixido Travesa <\/strong><\/h2>\n<p>Nuestro grupo se ha interesado tradicionalmente por el estudio de los mecanismos de regulaci\u00f3n androg\u00e9nica en el ri\u00f1\u00f3n, tejido que, especialmente en rat\u00f3n, presenta una marcada inducci\u00f3n g\u00e9nica en respuesta a andr\u00f3genos. Entre los genes sometidos a esta regulaci\u00f3n hormonal y con una expresi\u00f3n pr\u00e1cticamente exclusiva en el t\u00fabulo proximal renal se halla el de la kidney-regulated protein (kap).El mrna del gen de la kap es el m\u00e1s abundante del ri\u00f1\u00f3n de rat\u00f3n macho \/toole et al., 1979). En costes histol\u00f3gicos de este \u00f3rgano se observa que la hibridaci\u00f3n in situ del mrna de kap solo se detecta en las c\u00e9lulas epiteliales de los t\u00famulos corticales renales (meseguer et al., 1987). La especificidad tan restringida que presenta la expresi\u00f3n del gen de la kap as\u00ed como el dimorfismo sexual que manifiesta son especialmente sugerentes de una regulaci\u00f3n transcripcional altamente espec\u00edfica e influenciada por el estado hormonal. El estudio detallado del patr\u00f3n de expresi\u00f3n del gen en diversas cepas de ratones deficientes para diferentes combinaciones de efectores hormonales ha permitido profundizar en el papel que cadascuno de ellos juega en la regulaci\u00f3n del gen as\u00ed como distinguir dos patrones diferentes dentro de las c\u00e9lulas s1\/s2 y s3 que integran el t\u00fabulo proximal. Mientras que en las c\u00e9lulas s3 la expresi\u00f3n de kap es dependiente de la hormona tiroidea, en las c\u00e9lulas s1\/s2 la expresi\u00f3n solo observada en machos responde a andr\u00f3genos y es dependiente de la presencia puntual de hormona t3 durante los d\u00edas 13-15 del desarrollo, momento en el cual se produce la maduraci\u00f3n gonadal. Pensando en efectores moleculares que coordinasen esta dependencia de andr\u00f3genos por t3 se pudo correlacionar la expresi\u00f3n del gen de la kap con la presencia de los factores de transcripci\u00f3n c\/ebp. La mutaci\u00f3n selectiva de dos putativas secuencias de uni\u00f3n para factores c\/ebp situadas a -429 y -457 del promotor proximal del gen de la kap suponen en ensayos de transfecci\u00f3n transitoria en la linea celular pct3 derivada de los segmentos s1\/s2 de ri\u00f1\u00f3n con contructos de 638pb del promotor fusionado al gen reportero de la luciferasa una ca\u00edda de la inducci\u00f3n por andr\u00f3genos de 40 veces (teixid\u00f3 et al, 2006).En esta tesis se ha comprobado mediante ensayos emsa que el receptor de andr\u00f3genos (ra) es capaz de unir el elemento de respuesta a andoenos (are) situado a -39pb del inicio de transcripci\u00f3n del gen de la kap. Por ensayos de transfecci\u00f3n transitoria se ha podido comprobar que la mutaci\u00f3n a<g de la primera adenina de la caja tata situada a -28pb y que solapa parcialmente con el are supone una ca\u00edda dram\u00e1tica en la actividad del promotor proximal del gen. Mediante experimentos emsa hemos visto que la uni\u00f3n de ra al are incorporando el cambio de nucleotido en caja tata no se ve afectada por este. Por todo ello hemos podido concluir que el gen de la kap presenta una caja tata funcional necesaria para que se produzca la inducci\u00f3n por andr\u00f3genos que tiene lugar por uni\u00f3n  del ra al are solapado y que el gen no se comporta como un tata-less en los contextos de inducci\u00f3n androg\u00e9nica. Se ha comprobado que la secuencia gc situada a -100pb del promotor es un lugar de uni\u00f3n para el factor sp1 que es capaz de inducir la actividad del constructor que incorpora los primeros 638pb del promotor. La caja gc tambi\u00e9n es unida por el factor sp3 que a su vez no es capaz de inducir la actividad del promotor y compite con sp1 disminuyendo su efecto inductor. Mediante ensayos de transfecci\u00f3n transitoria se ha visto que sp1 sinergiza con el ra en la respuesta a andr\u00f3genos del promotor del gen de la kap. Se ha comprobado tambi\u00e9n ensayos emsa la posible uni\u00f3n de factores c\/ebp a las cajas -429 y -457. Se ha visto as\u00ed que la caja -457 es unida por c\/ebp beta en c\u00e9lulas pct3 y por los factores c\/ebp alfa y beta en ri\u00f1\u00f3n de rat\u00f3n. La caja -429 no es unida por ninguno de los factores c\/ebp testados. Se han realizado predicciones in silico mediante algoritmos de predicci\u00f3n de la identidad del factor que une la caja-429 y se ha considerado la posibilidad que se tratara de un factor gata. Por rt-pcr sothern blot se ha detectado la expresi\u00f3n del factor gata-3 en c\u00e9lulas pct3 como unico miembro gata presente. Los ensayos emsa para la uni\u00f3n de este factor han demostrado que el factor que une la caja  429 puede unir tambi\u00e9n la secuencia consenso para gata pero que no se trata de gata-3. Se han realizado tambi\u00e9n cromatograf\u00edas de afinidad para la caja -429 y se ha aislado en los eluidos la atp-dependant rna helicase ddx20. Esta helicasa se une al factor de transcripci\u00f3n sf-1 el cual ha sido considerado como candidato a regular el gen de la kap. Los ensayos emsa realizados con la caja -429 y la prote\u00edna sf-1 expresada in vitro aunque sugerentes dada la competici\u00f3n selectiva de la banda obtenida por excesos no marcados de la secuencia consenso para sf-1, no han podido ser confirmados a falta de anticuerpo apto. Una predicci\u00f3n in silico alternativa ha indicado la  posibilidad que el factor que une -429 sea el receptor de glucocortocoides (gr). La immunodetecci\u00f3n del mismo en extractos nucleares pct3 ha motivado la realizaci\u00f3n de ensayos de transfecci\u00f3n transitoria los cuales han indicado la inducci\u00f3n del gen de la kap por glucocortocoides y la colaboraci\u00f3n entre gr, ar y sp1 en la inducci\u00f3n m\u00e1xima obtenida hasta el momento ein vitro pare le promotor proximal del gen de la kap. Para poder determinar la dependencia  y interacci\u00f3n que en el promotor de kap ocurre entre los elementos reguladores identificados por el momento se han realizado contructos de este incorporando la mutaci\u00f3n selectiva de la caja gc y se ha utilizado juntamente con constructor previamente dise\u00f1ados (teixid\u00f3 et al., 2006) ensayos de  tranfecci\u00f3n transitoria en c\u00e9lulas pct3. De esta manera se ha visto como la respuesta androg\u00e9nica del promotor proximal del gen de la kap es dependiente de la presencia simult\u00e1nea del are, la caja gc y la caja -429 sugiriendo colaboraci\u00f3n entre ar, sp1 y el factor que une la caja-429. La mutaci\u00f3n de la caja-457 y por extensi\u00f3n c\/ebp beta parece no tener en cambio implicaci\u00f3n el respuesta androg\u00e9nica de i promotor del gen de la kap\n\n\n\n&nbsp;\n\n\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Mecanismos de regulacion transcripcional del gen que codifica para la kidney y androgen regulated protein (kap) en relacion a la seva especificidad de tejido y control hormonal<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Mecanismos de regulacion transcripcional del gen que codifica para la kidney y androgen regulated protein (kap) en relacion a la seva especificidad de tejido y control hormonal <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Neus Teixido Travesa <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Barcelona<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 27\/07\/2007<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Anna Messeguer Navarro<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: daniel Grinberg vaisman <\/li>\n<li>antoni lLuis Andreu periz (vocal)<\/li>\n<li>francina Munell casadesus (vocal)<\/li>\n<li>emili Itarte fresquet (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Neus Teixido Travesa Nuestro grupo se ha interesado tradicionalmente por el estudio de los mecanismos de regulaci\u00f3n 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