{"id":60419,"date":"2018-03-09T22:48:15","date_gmt":"2018-03-09T22:48:15","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/iniciacion-de-la-replicacion-del-plasmido-promiscuo-pmv158-interacciones-macromoleculares-en-el-orden-de-replicacion\/"},"modified":"2018-03-09T22:48:15","modified_gmt":"2018-03-09T22:48:15","slug":"iniciacion-de-la-replicacion-del-plasmido-promiscuo-pmv158-interacciones-macromoleculares-en-el-orden-de-replicacion","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica\/iniciacion-de-la-replicacion-del-plasmido-promiscuo-pmv158-interacciones-macromoleculares-en-el-orden-de-replicacion\/","title":{"rendered":"Iniciaci\u00f3n de la replicaci\u00f3n del pl\u00e1smido promiscuo pmv158: interacciones macromoleculares en el orden de replicaci\u00f3n"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Jos\u00e9 Angel Ruiz Maso <\/strong><\/h2>\n<p>La realizaci\u00f3n de esta tesis doctoral se plante\u00f3 con el objetivo general de esclarecer el mecanismo de la iniciaci\u00f3n de la replicaci\u00f3n por c\u00edrculo rodante del pl\u00e1smido pmv158, mediada por la prote\u00edna repb que codifica el propio pl\u00e1smido. Gracias al trabajo desarrollado previamente en el laboratorio sobre este tema, sab\u00edamos que repb se une en el dso a una secuencia formada por tres repeticiones directas que constituyen el locus bind. Bas\u00e1ndonos en estos antecedentes decidimos continuar el estudio para completar al an\u00e1lisis de la interacci\u00f3n de repb con el dso plasm\u00eddico. Los resultados obtenidos con t\u00e9cnicas de retardo en gel y de \u00abfootprint\u00edng\u00bb de alta resoluci\u00f3n nos permitieron determinar que repb se une al locus bind con una afinidad 500 veces superior que al locus nic. La uni\u00f3n de repb al locus bind en dna superenrollado facilitaria la uni\u00f3n de otra mol\u00e9cula de prote\u00edna en el locus nic, lo que favorecer\u00eda la extrusi\u00f3n del cruciforme ir-i y la exposici\u00f3n de la secuencia de corte en la configuraci\u00f3n monocatenaria apropiada para la actividad nucleolitica de repb. Tambi\u00e9n se desarroll\u00f3 un m\u00e9todo de purificaci\u00f3n de repb a gran escala, con el fin de obtener cantidad suficiente de prote\u00edna para su caracterizaci\u00f3n estructural y bioqu\u00edmica. Aunque la prote\u00edna purificada es un hex\u00e1mero en soluci\u00f3n, este estado de asociaci\u00f3n tambi\u00e9n se identific\u00f3 in vivo. La estructura tridimensional del hex\u00e1mero de prote\u00edna se obtuvo por cristalograf\u00eda de rayos-x. El dominio c-term\u00ednal del hex\u00e1mero presenta simetr\u00eda rotacional senaria, mientras que el dominio n-terminal, que contiene la actividad endonucleasa, presenta simetr\u00eda rotacional binaria. El dominio endonucleasa de repb presenta el mismo plegamiento estructural que el de otras prote\u00ednas de las clases rep y mob, con un n\u00facleo central constituido por una l\u00e1mina b formada por cinco cadenas ant\u00edparalelas. La informaci\u00f3n estructural del complejo entre repb y el dna del locus bind, obtenida por la reconstrucci\u00f3n tridimensional de im\u00e1genes de microscop\u00eda electr\u00f3nica, sugiri\u00f3 que el dominio n-terminal constituye el dominio de uni\u00f3n a dna. El an\u00e1lisis del estado de asociaci\u00f3n de repb in vivo permiti\u00f3 determinar la coexistencia de formas monom\u00e9r\u00edcas, dim\u00e9ricas y hexam\u00e9rica de prote\u00ed\u00afna. Estos resultados podr\u00edan indicar que el mecanismo de inicio de la replicaci\u00f3n de pmv158 podr\u00eda ser un proceso din\u00e1mico similar al propuesto en otros sistemas de replicaci\u00f3n virales, como la replicaci\u00f3n de aav-5. Adem\u00e1s repb podr\u00eda constituir un nexo evolutivo entre prote\u00ednas de replicaci\u00f3n de fagos y de pl\u00e1smidos que replican por c\u00edculo rodante, que no presentan dominio de hexamerizaci\u00f3n, y las de otros virus animales, como papilomavirus o sv40, cuyos dominios c-terminal forman helicasas hexam\u00e9ricas que no tienen actividad endonucleasa en su dominio n-terminal.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Iniciaci\u00f3n de la replicaci\u00f3n del pl\u00e1smido promiscuo pmv158: interacciones macromoleculares en el orden de replicaci\u00f3n<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Iniciaci\u00f3n de la replicaci\u00f3n del pl\u00e1smido promiscuo pmv158: interacciones macromoleculares en el orden de replicaci\u00f3n <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Jos\u00e9 Angel Ruiz Maso <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Complutense de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 13\/09\/2007<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Gloria Del Solar Dongil<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Antonio Puyet catalina <\/li>\n<li>margarita Salas figueras (vocal)<\/li>\n<li>oscar Llorca blanco (vocal)<\/li>\n<li>ramon Diaz orejas (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Jos\u00e9 Angel Ruiz Maso La realizaci\u00f3n de esta tesis doctoral se plante\u00f3 con el objetivo general de 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