{"id":61033,"date":"2018-03-09T22:48:51","date_gmt":"2018-03-09T22:48:51","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/purificacion-y-caracterizacion-bioqua%c2%admica-de-las-fracciones-maoritarias-de-anta%c2%adgenos-de-histocompatibilidad-de-clase-i-solubles-en-humanos\/"},"modified":"2018-03-09T22:48:51","modified_gmt":"2018-03-09T22:48:51","slug":"purificacion-y-caracterizacion-bioqua%c2%admica-de-las-fracciones-maoritarias-de-anta%c2%adgenos-de-histocompatibilidad-de-clase-i-solubles-en-humanos","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/purificacion-y-caracterizacion-bioqua%c2%admica-de-las-fracciones-maoritarias-de-anta%c2%adgenos-de-histocompatibilidad-de-clase-i-solubles-en-humanos\/","title":{"rendered":"Purificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n bioqu\u00edmica de las fracciones maoritarias de ant\u00edgenos de histocompatibilidad de clase i solubles en humanos"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Jos\u00e9 Miguel Escolano Moyano <\/strong><\/h2>\n<p>La presencia de mol\u00e9culas de clase i solubles (shla-i) en suero humano se describi\u00f3 por primera vez en 1968. A pesar de que la naturaleza de estas mol\u00e9culas solubles a\u00fan no se conoce totalmente, se ha asociado la presencia de niveles alterados de las mismas con la progresi\u00f3n de distintos tipos de tumores, algunas enfermedades autoinmunes, embarazo, supervivencia de transplantes y distintas enfermedades infecciosas. Recientemente se ha demostrado que tienen un papel inmunorregulador y son capaces de inducir apoptosis en linfocitos t cd8+ activados, en c\u00e9lulas nk cd8+ y en linfocitos t gamma-delta. los shla-i presentan dos formas mayoritarias con pesos moleculares de 200-800 kd y 50-60 kd respectivamente. En este trabajo, hemos puesto a punto un m\u00e9todo para separar y purificar estas mol\u00e9culas; hemos realizado caracterizaci\u00f3n bioqu\u00edmica, su secuenciaci\u00f3n parcial, su caracterizaci\u00f3n serol\u00f3gica y finalmente hemos investigado los mecanismos por los que se produce su secreci\u00f3n. para la purificaci\u00f3n se utiliz\u00f3 plasma congelado de donantes que tras seis d\u00edas de almacenamiento hab\u00eda caducado para ser usado en transfusiones. Se determin\u00f3 el c\u00f3ctel \u00f3ptimo de inhibidores de proteasas a usar y se realiz\u00f3 un filtrado previo del plasma. A continuaci\u00f3n, se purificaron los ant\u00edgenos de clase i totales mediante cromatograf\u00eda de afinidad sobre sefarosa 4b activada con bromuro de cian\u00f3geno a la que se hab\u00eda unido covalentemente w6\/32 un anticuerpo que reconoce espec\u00edficamente a dichas mol\u00e9culas. Por \u00faltimo, se separaron las dos formas mediante filtraci\u00f3n sobre sephacryl s-200. Las mol\u00e9culas purificantes se caracterizaron mediante sds-page e isoelectroenfoque. Los datos obtenidos demostraron que la fracci\u00f3n de alto peso molecular estaba constitu\u00edda por hla cl\u00e1sico unido a fragmetos de membrana. La fracci\u00f3n de bajo peso molecular presentaba una cadena pesada de unos 39 kd que presentaba un limitado polimorfismo cuando se comparaba con el conjunto de hla-i cl\u00e1sicos. Para continuar su caracterizaci\u00f3n se secuenciaron varios p\u00e9ptidos de dicha cadena pesada y tras analizar las secuencias en la base de datos imgt\/hla obtuvimos que hab\u00eda una alta probabilidad de que estos ant\u00edgenos estuvieran constitu\u00eddos por hla-c. Estos resultados se corroboraron mediante el estudio de la secreci\u00f3n por c1r, una l\u00ednea celular deficitaria en ant\u00edgenos de clase i cl\u00e1sicos, que expresa principalmente hla-cw4 en membrana. Se observ\u00f3 que la secreci\u00f3n de shla-i se conservaba en dicha l\u00ednea. Finalmente, se demostr\u00f3 que estas mol\u00e9culas eran reconocfidas por l-31, un anticuerpo monoclonal espec\u00edfico de hla-c. una vez comprobada la naturaleza de estos ant\u00edgenos se demostr\u00f3 que se pruduc\u00edan mediante procesamiento alternativo del arn mensajero en el que se elimina el ex\u00f3n 5 que codifica el fragmento transmembrana de estas mol\u00e9culas.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Purificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n bioqu\u00edmica de las fracciones maoritarias de ant\u00edgenos de histocompatibilidad de clase i solubles en humanos<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Purificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n bioqu\u00edmica de las fracciones maoritarias de ant\u00edgenos de histocompatibilidad de clase i solubles en humanos <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Jos\u00e9 Miguel Escolano Moyano <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Complutense de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 25\/10\/2007<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Luisa Mar\u00eda Villar Guimerans<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Francisco javier Arroyo <\/li>\n<li>ernesto Roldan Santiago (vocal)<\/li>\n<li>Antonio Ferreira cerd\u00e1n (vocal)<\/li>\n<li>julia Sequi navarro (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Jos\u00e9 Miguel Escolano Moyano La presencia de mol\u00e9culas de clase i solubles (shla-i) en suero humano se 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