{"id":61182,"date":"2018-03-09T22:49:03","date_gmt":"2018-03-09T22:49:03","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/analisis-funcional-de-la-protea%c2%adna-sigd-de-salmonella-e-identificacion-de-nuevos-factores-de-virulencia-en-un-sistema-modelo-de-levadura\/"},"modified":"2018-03-09T22:49:03","modified_gmt":"2018-03-09T22:49:03","slug":"analisis-funcional-de-la-protea%c2%adna-sigd-de-salmonella-e-identificacion-de-nuevos-factores-de-virulencia-en-un-sistema-modelo-de-levadura","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/microbiologia\/analisis-funcional-de-la-protea%c2%adna-sigd-de-salmonella-e-identificacion-de-nuevos-factores-de-virulencia-en-un-sistema-modelo-de-levadura\/","title":{"rendered":"An\u00e1lisis funcional de la prote\u00edna sigd de salmonella e identificaci\u00f3n de nuevos factores de virulencia en un sistema modelo de levadura"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Ainel Alem\u00e1n P\u00e9rez <\/strong><\/h2>\n<p>En los \u00faltimos a\u00f1os, el estudio de la virulencia de un buen n\u00famero de bacterias pat\u00f3genas ha puesto de manifiesto una estrategia de infecci\u00f3n com\u00fan basada en el aprovechamiento de las rutas de transducci\u00f3n de se\u00f1ales de la propia c\u00e9lula hospedadora. En el caso concreto de salmonella, cuando las c\u00e9lulas bacterianas entran en contacto con las c\u00e9lulas del epitelio intestinal dirigen la translocaci\u00f3n de una serie de prote\u00ednas a la c\u00e9lula hospedadora mediante un sistema de secreci\u00f3n especializado, el sistema sip-1 (sst-iii). Esto provoca, en primer lugar, la reorganizaci\u00f3n localizada de actina que promueve la formaci\u00f3n de filopodios (ruffing) y la internalizaci\u00f3n de la bacteria en la vacuola fagocitaria., Mediante la acci\u00f3n de prote\u00ednas de uni\u00f3n a actina (sipa) y prote\u00ednas reguladoras de cdc42 y rac1: sope que es una gef (moduladora positiva) y sigd, que es una inositol fosfatasa. en este trabajo nos hemos centrado en la caracterizaci\u00f3n funcional de este \u00faltimo. La sobreexpresi\u00f3n de sigd fusionada a gfp fue t\u00f3xica para las c\u00e9lulas de mam\u00edferos, alterando el citoesqueleto de actina pero sin causar apoptosis, ni alteraci\u00f3n del ciclo celular. El estudio de varias versiones mutagenizadas de este efecto bacteriano, permiti\u00f3 el hallazgo de un dominio de baja complejidad existente entre los residuos del 118 al 142 de la regi\u00f3n aminoterminal no catal\u00edtica de sigd, responsables de este efecto de toxicidad y alteraci\u00f3n de las fibras de actina. Es la primera evidencia descrita del car\u00e1cter bifuncional de sigd. Un estudio detallado trabajando con varios de estos alelos de sigd arroj\u00f3 que la formaci\u00f3n de ruffles y la vacuolizaci\u00f3n inducida por sigd en c\u00e9lulas hela es dependiente de su actividad fosfatasa, as\u00ed como que la expresi\u00f3n de este efector provoca la asociaci\u00f3n de la gtpasa rac1 a la membrana plasm\u00e1tica de c\u00e9lulas hele y por tanto su activaci\u00f3n. Se ha observado adem\u00e1s, a partir de estudios de inmunofluorescencia con anticuerpos espec\u00edficos que sigd colocaliza con estructuras del tr\u00e1fico endoc\u00edtico, principalmente con endosomas tard\u00edos, siendo para ello importante la presencia del dominio baja complejidad de la regi\u00f3n amino-terminal. Al trabajar con mutantes de salmonella en esta prote\u00edna de virulencia se observ\u00f3 que la expresi\u00f3n de sigd provoca la fosforilaci\u00f3n de las mapks erk1\/2 y est\u00e1 implicada en la secreci\u00f3n de interleuquina 8 durante la infecci\u00f3n por salmonella de c\u00e9lulas epiteliales en cultivo. Otro de los objetivos de este trabajo de tesis fue caracterizar la influencia de sigd en el metabolismo de fosfoinos\u00edtidos en la c\u00e9lula hospedadora. A partir de estudios de infecci\u00f3n con cepas de salmonella silvestre y deficientes en sigd pudimos observar que la desaparici\u00f3n de pi(4,5)p2 y la acumulaci\u00f3n de pi(3,4,5)p3 y pi(3,4)p2 en los ruffles inducidos en c\u00e9lulas hela por el contacto con salmonella es dependiente de sigd e insensible a inhibidores farmacol\u00f3gicos de fosfatidil inositol 3-quinasas (pi3k), lo que indica que pi(4,5)p2 es un sustrato de sigd in vivo. Adem\u00e1s, la formaci\u00f3n de pi(3)p en las scv es tambi\u00e9n dependiente de sigd y a su vez sensible a inhibidores farmacol\u00f3gicos de las pi3k. Hasta ahora se hab\u00eda establecido que la formaci\u00f3n de este \u00faltimo fosfoinos\u00edtido era el resultado de la desfosfatizaci\u00f3n de pi(3,4,5)p3 por sigd. No obstante, en nuestras condiciones, la eliminaci\u00f3n de pi(3,4,5)p3 mediante la expresi\u00f3n de la fosfatasa pten en c\u00e9lulas infectadas con salmonella no impide la formaci\u00f3n de pi(3) en las scv, lo que constituye una evidencia de que la desfosforilaci\u00f3n de pi(3,4,5)p3 no es la v\u00eda utilizada por sigd para la generaci\u00f3n de pi(3)p. Un descubrimiento interesante fue observar que el reclutamiento de la gtpasa humana rab5 en las scv (salmonella-containing vacuoles) es tambi\u00e9n dependiente de esta fosfatasa bacteriana (sigd). La experiencia en nuestro grupo de investigaci\u00f3n trabajando con el modelo celular de la levadura nos permiti\u00f3 adem\u00e1s descubrir potenciales factores de virulencia bacterianos se salmonella a partir de la sobreexpresi\u00f3n de una genoteca de s. Typhimurium. Entre ellos, el efector de funci\u00f3n desconocida stec, y el factor de virulencia conocido de salmonella, ssef de s. Typhimurium, que inhiben el crecimiento de las c\u00e9lulas de levadura.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>An\u00e1lisis funcional de la prote\u00edna sigd de salmonella e identificaci\u00f3n de nuevos factores de virulencia en un sistema modelo de levadura<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 An\u00e1lisis funcional de la prote\u00edna sigd de salmonella e identificaci\u00f3n de nuevos factores de virulencia en un sistema modelo de levadura <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Ainel Alem\u00e1n P\u00e9rez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Complutense de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 31\/10\/2007<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Mar\u00eda Molina Mart\u00edn<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: c\u00e9sar Nombela cano <\/li>\n<li>pedro Antonio Jim\u00e9nez g\u00f3mez (vocal)<\/li>\n<li>Juan Garc\u00eda lobo (vocal)<\/li>\n<li>Jos\u00e9 claudio P\u00e9rez d\u00edaz (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Ainel Alem\u00e1n P\u00e9rez En los \u00faltimos a\u00f1os, el estudio de la virulencia de un buen n\u00famero de 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