{"id":61606,"date":"2018-03-09T22:49:29","date_gmt":"2018-03-09T22:49:29","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/papel-de-las-caveolas-caveolina-1-en-la-fisiologia-del-adipocito\/"},"modified":"2018-03-09T22:49:29","modified_gmt":"2018-03-09T22:49:29","slug":"papel-de-las-caveolas-caveolina-1-en-la-fisiologia-del-adipocito","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica\/papel-de-las-caveolas-caveolina-1-en-la-fisiologia-del-adipocito\/","title":{"rendered":"Papel de las caveolas\/caveolina-1 en la fisiolog\u00eda del adipocito"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Elena Gonzalez Mu\u00f1oz <\/strong><\/h2>\n<p>El tejido adiposo blanco tiene un papel clave en el metabolismo, ya que adem\u00e1s de ser el principal reservorio de triacilglic\u00e9ridos, act\u00faa como \u00f3rgano endocrino secretando a la circulaci\u00f3n diferentes mol\u00e9culas, las llamadas adipoquinas, implicadas en mecanismos de se\u00f1alizaci\u00f3n y en la sensibilidad perif\u00e9rica a la insulina. En este sentido el tejido adiposo es muy importante en el mantenimiento de la homeostasis energ\u00e9tica regulando la secreci\u00f3n de insulina, la acci\u00f3n de la insulina y el metabolismo gluc\u00eddico y lip\u00eddico (mora et al., 2002).  los adipositos son el tipo celular con mayor concentraci\u00f3n de caveolas en la superficie de su membrana plasm\u00e1tica. Observaciones realizadas por microscopia electr\u00f3nica demuestran que las caveolas representan un 30% de la superficie de la membrana de los adipositos (fan et al., 1983). Como se ha explicado en la introducci\u00f3n, las caveolas son dominios especializados de la membrana plasm\u00e1tica, son un subtipo de raft lip\u00eddico, enriquecidos en esfingol\u00edpidos y colesterol y caracterizados por la presencia de caveolina, que es la principal prote\u00edna de la cubierta caveolar (rothberg et al., 1992; anderson, 1998; kurzchalia et al., 1999).  la funci\u00f3n de las caveolas y de la caveolina in vivo ha sido motivo de controversia, de hecho se han implicado en procesos de endocitosis y transcitosis, transporte de colesterol y \u00e1cidos grasos, regulaci\u00f3n de procesos de transducci\u00f3n de se\u00f1ales y tumorig\u00e9nesis (liu et al., 2002 a).  a partir de estos antecedentes, el objetivo general de esta tesis ha sido:  definir la funci\u00f3n de las caveolas\/caveolina-1 en la fisiolog\u00eda del adipocito.  en el momento de iniciar la tesis, en nuestro laboratorio se estaban usando algunos tratamientos que unen y\/o extraen el colesterol de las membranas y que est\u00e1 descrito que alteran la estructura de los rafts lip\u00eddicos\/caveolas (rothberg et al., 1992 schnitzer et al., 1994; orlando et al., 1998).  nos planteamos as\u00ed nuestro primer objetivo:  1.\tComprobar que los tratamientos que unen o extraen colesterol de las membranas (nistatina, filipina, beta ciclodextrina y metil-beta-ciclodextrina) alteran la estructura de los rafts lip\u00eddicos\/caveolas de adipositos 3t3l1, y analizar el efecto que tienen estos tratamientos sobre la acci\u00f3n de la insulina estimulando el transporte de glucosa y sobre la activaci\u00f3n de la via de se\u00f1alizaci\u00f3n de la insulina cbl\/tc10 asociada a caveolas. Adem\u00e1s, estudiamos otras acciones de la insulina que pudieran depender de la v\u00eda de se\u00f1alizaci\u00f3n cbl\/tc10, analizando el efecto de los tratamientos sobre la acci\u00f3n de la insulina activando la lipog\u00e9nesis o inhibiendo la lip\u00f3lisis en adipositos 3t3l1  los tratamientos usados en el objetivo l unen o extraen el colesterol de las membranas y pueden provocar cambios severos en los rafts lip\u00eddicos (no espec\u00edficamente en caveolas) y en la membrana plasm\u00e1tica en general.  nos planteamos, por tanto, alterar espec\u00edficamente las caveolas de los adipositos 3t3l1 disminuyendo la expresi\u00f3n de caveolina-1 en sus membranas. As\u00ed, nuestros siguientes objetivos fueron: 2- obtenci\u00f3n de l\u00edneas 3t3l1 deficientes en caveolina-1 mediante silenciamiento g\u00e9nico postranscripcional. una vez conseguidos estos adipositos 3t3l1 deficientes en caveolina-1  nos planteamos: 3.- Analizar la presencia de caveolas y la distribuci\u00f3n de la caveolina-1 remanente en las membranas de los adipositos y estudiar la estructura y composici\u00f3n de los rafts lip\u00eddicos\/caveolas  en estos adipositos deficientes en caveolina-1  una vez analizado el efecto que tiene la carencia de caveolina-1 sobre los rafts lip\u00eddicos, quisimos estudiar si esta deficiencia afectaba funcionalmente a los adipositos. As\u00ed nos planteamos: 4.-Analizar la diferenciaci\u00f3n adipocitaria de los preadipocitos 3t3l1 deficientes en caveolina-1. Estudiando tanto sus caracter\u00edsticas morfol\u00f3gicas y contenido lip\u00eddico, como la expresi\u00f3n de marcadores prote\u00edcos caracter\u00edsticos de adipositos maduros.  est\u00e1 descrita la importancia de las caveolas\/rafts lip\u00eddicos en la se\u00f1alizaci\u00f3n de insulina estimulando el transporte de glucosa en adipositos (baumann et al., 2000; pessin and saltiel, 2000; omata et al., 2000; chiang et al., 2001; kanzaki and pessin, 2001 a). Por un lado, se ha descrito que para esta acci\u00f3n de la insulina es indispensable la activaci\u00f3n de dos v\u00edas de se\u00f1alizaci\u00f3n: una dependiente de la quinasa pi3k, y otra independiente, asociada a caveolas que se denomina cbl\/tc10. Por otro lado, se hab\u00eda descrito la localizaci\u00f3n del receptor de insulina (ir) en caveolas\/rafts lip\u00eddicos (gustavsson et al., 1999; vainio et al., 2002) y la interacci\u00f3n de ir con caveolina-1 (couet et al., 1997 a; yamamoto et al., 1998; nystrom et at., 1999). As\u00ed como sexto objetivo quisimos.   5.- Analizar la acci\u00f3n de la insulina en los adipositos deficientes en caveolina-1, estudiando, por un lado, tanto la activaci\u00f3n de las rutas de se\u00f1alizaci\u00f3n de la insulina como la estimulaci\u00f3n que provoca en la translocaci\u00f3n del transportador de glucosa glut4 a la membrana plasm\u00e1tica y en el transporte de glucosa. Por otro lado tambi\u00e9n estudiamos la implicaci\u00f3n de la caveolina-1 en otros acciones metab\u00f3licas de la insulina en los adipositos como son la inhibici\u00f3n de la lip\u00f3lisis y la estimulaci\u00f3n de la lipog\u00e9nesis.  existen diversas evidencias descritas en la bibliograf\u00eda que relacionan caveolas y caveolina-1 con la homeostasis lip\u00eddica y obesidad a partir del fenotipo de los ratones ko de caveolina-1 (rasan  et al., 2002 a; brasaemle et al.,2004; cohen et al., 2004 a). As\u00ed , se ha relacionado a caveolina-1 en  la formaci\u00f3n de los lds (cohen et al., 2004b), tambi\u00e9n modulando la lip\u00f3lisis activada por efectores beta-adren\u00e9rgicos (brasaemle et al., 2004; rasan et al., 1999; cohen et al., 2004b), en el balance y tr\u00e1fico de colesterol y l\u00edpidos neutros en los adipositos (pol et al., 2004; pol et al., 2005; mart\u00edn et al., 2005) y en el transporte de \u00e1cidos grasos a trav\u00e9s de la membrana plasm\u00e1tica ( pohl et al.,2002; pohl et al.,2004b; pohl et al., 2005; ring et al., 2006). Teniendo en cuenta estos antecedentes, nuestro \u00faltimo objetivo fue:   6.- Estudiar el papel de caveolina-1 en el metabolismo lip\u00eddico del adipocito, analizando tanto el transporte de \u00e1cidos grasos de cadena larga a trav\u00e9s de la membrana plasm\u00e1tica, como la movilizaci\u00f3n de los triglic\u00e9ridos almacenados ante est\u00edmulos lipol\u00edticos.   a partir de los objetivos planteados conseguimos obtener las siguientes conclusiones en el desarrollo de esta tesis:  1.-Los tratamientos  metil-beta-ciclodextrina y ciclodextrina, que extraen el colesterol de las membranas, alterando la estructura y composici\u00f3n de las caveolas\/rafts lip\u00eddicos. Disminuyen el efecto de la insulina estimulando el transporte de glucosa en adipositos 3t3l1. Esta disminuci\u00f3n se debe al aumento que provocan sobre el transporte de glucosa basal. S\u00f3lo el tratamiento con metil-beta-ciclodextrina afecta la v\u00eda de se\u00f1alizaci\u00f3n de la insulina que lleva ala estimulaci\u00f3n del transporte de glucosa, disminuyendo la fosforilaci\u00f3n de c-cbl y akt un 50%.  los tratamientos metil-beta-ciclodextrina y ciclodextrina, afectan a la lip\u00f3lisis y la lipog\u00e9nesis de los adipositos 3t3l1 de manera independiente al efecto que puedan tener sobre la se\u00f1alizaci\u00f3n de la insulina inhibiendo o estimulando, respectivamente, estas rutas metab\u00f3licas.  2.- Por primera vez en nuestro laboratorio se han generado part\u00edculas lentivirales que permiten la expresi\u00f3n de transgenes y de mol\u00e9culas de sirna.   se ha conseguido la transducci\u00f3n eficiente de adipositos 3tl1 maduros usando estas part\u00edculas lentivirales que expresan transgenes, aunque no se ha logrado transducir los adipositos maduros eficazmente en el caso de los lentivirus que expresan mol\u00e9culas de sirna.  los preadipocitos 3t3l1 son eficientemente transducidos usando las part\u00edculas lentivirales que permiten la expresi\u00f3n tanto de transgenes como de mol\u00e9culas de sirna. Mediante esta t\u00e9cnica hemos generado l\u00edneas estables 3t3l1 que expresan mol\u00e9culas de sirna de caveolina-1 y que presentan una reducci\u00f3n en la expresi\u00f3n de la prote\u00edna caveolina-1 de m\u00e1s del 93%.  3.- La disminuci\u00f3n de la prote\u00edna caveolina-1 en m\u00e1s de un 93% en adipositos 3t3l1 provoca una disminuci\u00f3n  equivalente en el n\u00famero de caveolas en la membrana plasm\u00e1tica.   4.- La diferencia en caveolina-1 en los adipositos 3t3l1 no afecta a la localizaci\u00f3n de los marcadores prote\u00edcos y lip\u00eddicos caracter\u00edsticos de los rafts lip\u00eddicos, que contin\u00faan recuper\u00e1ndose en las fracciones ligeras de los extractos celulares durante el aislamiento bioqu\u00edmica de los rafts lip\u00eddicos.  5.- La deficiencia en caveolina-1 y caveolas no afecta a la diferenciaci\u00f3n de los preadipocitos 3t3l1 a adipositos maduros, ni tampoco a las caracter\u00edsticas morfol\u00f3gicas y el contenido lip\u00eddico \/triacilglic\u00e9ridos y colesterol) de los adipositos maduros.  6.- Los adipositos 3t3l1 con una disminuci\u00f3n del 93% en la expresi\u00f3n de caveolina-1, presentan una reducci\u00f3n del 50% en la expresi\u00f3n de las prote\u00ednas glut4 y del 40% en el caso del receptor de insulina, sin que este hecho responda a una menor cantidad de sus rna mensajeros, sino a una disminuci\u00f3n en la vida media de estas prote\u00ednas. Este dato sugiere que caveolina-1 participe en la estabilidad de estas prote\u00ednas.  7.- El d\u00e9ficit de caveolina-1 en los adipositos 3t3l1 no afecta a las v\u00edas de se\u00f1alizaci\u00f3n de la insulina (dependiente de pi3k y dependiente de cbl-tc10) ni tampoco a la translocaci\u00f3n de glut4 a la membrana plasm\u00e1tica inducida por la insulina ni a la estimulaci\u00f3n del transporte de glucosa.  8.- La presencia de caveolas\/caveolina-1 no es necesaria para la correcta internalizaci\u00f3n de glut4 durante la reversi\u00f3n de la acci\u00f3n  de la insulina.  9.- Las caveolas\/caveolina-1 tampoco son necesarias para la acci\u00f3n de la insulina inhibiendo o activando la lip\u00f3lisis y la lipog\u00e9nesis en los adipositos 3t3l1, respectivamente.  10.- La deficiencia de caveolina-1 y caveolas no altera el transporte de \u00e1cido palm\u00edtico a trav\u00e9s de la membrana plasm\u00e1tica de adipositos 3t3l1.  esta deficiencia tampoco altera la activaci\u00f3n lipol\u00edtica por los efectores beta-adren\u00e9rgicos: isoproterenol 10mm e ibmx 0,5 mm en los adipositos 3t3l1.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Papel de las caveolas\/caveolina-1 en la fisiolog\u00eda del adipocito<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Papel de las caveolas\/caveolina-1 en la fisiolog\u00eda del adipocito <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Elena Gonzalez Mu\u00f1oz <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Barcelona<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 28\/11\/2007<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Marta Campos Camprubi<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Marta Giralt oms <\/li>\n<li>josep antoni Villena delgado (vocal)<\/li>\n<li>albert Pol sorolla (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda  del carmen Carmona orozco (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Elena Gonzalez Mu\u00f1oz El tejido adiposo blanco tiene un papel clave en el metabolismo, ya que adem\u00e1s 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