{"id":62058,"date":"2018-03-09T22:49:55","date_gmt":"2018-03-09T22:49:55","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/receptores-de-nucleotidos-p2x-presentes-en-sistema-nervioso-central-de-raton-caracterizacion-y-funcion\/"},"modified":"2018-03-09T22:49:55","modified_gmt":"2018-03-09T22:49:55","slug":"receptores-de-nucleotidos-p2x-presentes-en-sistema-nervioso-central-de-raton-caracterizacion-y-funcion","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica\/receptores-de-nucleotidos-p2x-presentes-en-sistema-nervioso-central-de-raton-caracterizacion-y-funcion\/","title":{"rendered":"Receptores de nucle\u00f3tidos p2x presentes en sistema nervioso central de rat\u00f3n: caracterizaci\u00f3n y funci\u00f3n"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Patricia Mar\u00edn Garc\u00eda <\/strong><\/h2>\n<p>Introducci\u00f3n. el atp y otros nucle\u00f3tidos act\u00faan como neurotransmisores en el sistema nervioso mediante su interacci\u00f3n con receptores espec\u00edficos de membrana conocidos como receptores de nucle\u00f3tidos o p2. Dentro de \u00e9stos se distinguen dos grupos: receptores ionotr\u00f3picos p2x (p2x1-7) y metabotr\u00f3picos p2y (p2y1, 2, 4, 5, 11, 12, 13, 14, 15) (1;2;3, 4). Los receptores p2x spm canales i\u00f3nicos insertados en la membrana mediante dos h\u00e9lices transmembrana y son selectivos para cationes de peque\u00f1o tama\u00f1o (na+, k+ y ca2+). Los receptores p2y presenta 7 segmentos transmembrana y su se\u00f1alizaci\u00f3n se encuentra acoplada a prote\u00ednas g. muchos de estos nucle\u00f3tidos presentan un gran potencial en numerosas patolog\u00edas, tanto a nivel terap\u00e9utico como de marcador de enfermedad (5). m\u00e9todos. se utilizaron como modelos experimentales cultivos de neuronas granulares de cerebelo de rat\u00f3n as\u00ed como terminales sin\u00e1pticas aisladas de cerebro medio de rat\u00f3n adulto. Para alcanzar nuestros objetivos se utilizaron diferentes t\u00e9cnicas entre las que destacan: rt-pcr siemple y cuantitativa, western blot, ensayos inmunocito- e inmunohistoqu\u00edmicos, experimentos microfluorimetr\u00eda acoplada a videoimagen. esquemas de trabajo 1) identificaci\u00f3n de los receptores p2x presentes en cerebelo y cerebro medio total, as\u00ed como en neuronas granulares de cerebelo en cultivo y terminales sin\u00e1pticas aisladas de cerebro medio de rat\u00f3n mediante ensayos de rt-pcr, western blot e inmunocito- e inmunohistoqu\u00edmicos. 2) caracter\u00edzaci\u00f3n funcional de los receptores p2x en fibras de neuronas granulares a trav\u00e9s de experimentos de microfluorimetr\u00eda acoplada a videimagen. resultados. estudios de rt-pcr simple y cuantitativa, junto con ensayos de western-blot e inmunocitoqu\u00edmicos en cerebelo y cerebro medio de rat\u00f3n mostraron la presencia de las subunidades p2x1, 2, 3, 4 y p2x7, siendo las m\u00e1s abundantes en subunidades p2x4 y p2x7 en ambas regiones. Posteriormente, estos estudios se realizaron en neuronas granulares de cerebelo y en terminales sin\u00e1pticas aisladas de cerebro medio. Por un lado, en neuronas granulares se detect\u00f3 la presencia de las subunidades p2x1, 2, 4, 4, 7, siendo los m\u00e1s abundantes los receptores p2x4, 7. Adem\u00e1s se observ\u00f3 una distribuci\u00f3n celular diferencial para cada uno de los receptores. De esta forma las subunidades p2x2, 4 aparec\u00edan casi exclusivamente a nivel de los somas, mientras que las subunidades p2x1, 3, 7 se detectaron a nivel de soma y fibras axo-dendr\u00edticas. Adem\u00e1s, las subunidades p2x3, 7 mostraron un patr\u00f3n de expresi\u00f3n id\u00e9ntico al de la sinaptofisina (prote\u00edna presente en las ves\u00edculas sin\u00e1pticas), lo que indicaba la presencia sin\u00e1ptica de ambas subunidades. Po otro lado, las terminales nerviosas mostraron la expresi\u00f3n de las subunidades p2x2, 3, 8, siendo las subunidad p2x7 la m\u00e1s abundante y la p2x2 la m\u00e1s escasa. para caracterizar funcionalmente los receptores que se estaban expresando se llevaron a cabo experimentos de microfluorimetr\u00eda que permitieron determinar la concentraci\u00f3n de calcio intracelular resultante tras el tratamiento con agonistas y\/o antagonistas, as\u00ed como de inhibidores selectivos de cada una de las subunidades. primero se comprob\u00f3 la funcionalidad de los receptores p2x1, 3 en las fibras de las neuronas granulares en cultivo. Para ello se realizaron tratamientos con el agonista fisiol\u00f3gico, atp, y el agonista farmacol\u00f3gico alba, beta-beatp, espec\u00edfico para las subunidades p2x1 y p2x3, observ\u00e1ndose respuestas ambos agonistas. Adem\u00e1s, el tratamiento con ip5l 50 nm (inhibidor, en el ranto nanomolar, de las respuestas mediadas por los receptores p2x1), indic\u00f3 que hab\u00eda respuestas a albabeta-meatp que se bloqueaban completamente, y otras que no se ve\u00edan afectadas. Esto demostraba la presencia de receptores funcionales p2x3 que pod\u00edan estar formando homo o heter\u00f3meros entre si. por otro lado se quiso estudiar la funcionalidad p2x7 tanto en fibras de neuronas granulares como en terminales sin\u00e1pticas de animales control (silvestres) y ko para esta subunidad. La generaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n del rat\u00f3n ko utilizado en estos estudios fue realizada por el dr. Gabel (6). En ensayos de western blot llevados a cabo en macr\u00f3fagos y en c\u00e9lulas de las gl\u00e1ndulas sublinguales de rat\u00f3n silvestre y ko, se detect\u00f3 prote\u00edna \u00fanicamente en el silvestre. Cuando los experimentos se realizaron en extractos de cerebelo y cerebro medio, as\u00ed como en neuronas granulares en cultivo y terminales nerviosos cerebrales se detect\u00f3 en dos tipos de ratones. Ensayos de rt-pcr y de secuenciaci\u00f3n en cerebelo y cerebro medio utilizando primers dise\u00f1ados para regiones distintas del cdna del gen de p2x7 mostraron la expresi\u00f3n de secuencias para el arnm de esta subunidad en los dos tipos de ratones. Ensayos de microfluorimetr\u00eda en neuronas granulares y terminales sin\u00e1pticas mostraron activaci\u00f3n del receptor por atp y bzatp tanto en silvestre como en ko, que difer\u00edan en el perfil cin\u00e9tico (7). Adem\u00e1s, tambi\u00e9n se observ\u00f3 un bloqueo de la entrada en calcio en presencia de iones zn2+ t bbg (inhibidor y antagonista selectivo para la subunidad p2x7, respectivamente) as\u00ed, como insensibilidad a la suramina (antagonista de todos los receptores p2x excepto del p2x4, 7) en ambos ratones. Mediante t\u00e9cnicas microfluorim\u00e9tricas utilizando la sonda fluorescente yopro-1 se demostr\u00f3 que ni la activaci\u00f3n por atp ni por bzatp de este receptor produc\u00eda la formaci\u00f3n de un microporo en las c\u00e9lulas, como est\u00e1 descrito en c\u00e9lulas del sistema inmune. en conjunto, estos resultados apuntan a que en cerebelo de rat\u00f3n ko debe existir una prote\u00edna funcional que comparte cierta tecnolog\u00eda de secuencia con el receptor p2x7 genuino, y que podr\u00eda estar asumiendo el papel de esta subunidad en los ratones que carecen de ella.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Receptores de nucle\u00f3tidos p2x presentes en sistema nervioso central de rat\u00f3n: caracterizaci\u00f3n y funci\u00f3n<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Receptores de nucle\u00f3tidos p2x presentes en sistema nervioso central de rat\u00f3n: caracterizaci\u00f3n y funci\u00f3n <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Patricia Mar\u00edn Garc\u00eda <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Complutense de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 17\/12\/2007<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Mar\u00eda  Teresa Miras Portugal<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Jos\u00e9 manuel Bautista santa cruz <\/li>\n<li>Luis Rivera de los arcos (vocal)<\/li>\n<li>dominique jean Guilles aunis (vocal)<\/li>\n<li>Luis Rivas l\u00f3pez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Patricia Mar\u00edn Garc\u00eda Introducci\u00f3n. el atp y otros nucle\u00f3tidos act\u00faan como neurotransmisores en el sistema nervioso mediante 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