{"id":62543,"date":"2018-03-09T22:50:25","date_gmt":"2018-03-09T22:50:25","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/analogos-de-dna-que-incorporan-nucleosidos-con-anillo-de-morfolina-y-grupos-guanidino\/"},"modified":"2018-03-09T22:50:25","modified_gmt":"2018-03-09T22:50:25","slug":"analogos-de-dna-que-incorporan-nucleosidos-con-anillo-de-morfolina-y-grupos-guanidino","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/quimica-organica\/analogos-de-dna-que-incorporan-nucleosidos-con-anillo-de-morfolina-y-grupos-guanidino\/","title":{"rendered":"An\u00e1logos de dna que incorporan nucle\u00f3sidos con anillo de morfolina y grupos guanidino"},"content":{"rendered":"

Tesis doctoral de Sonia Perez Rentero <\/strong><\/h2>\n

En la presente tesis doctoral se han ensayado diferentes metodolog\u00edas para la obtenci\u00f3n de un nuevo an\u00e1logo oligonucleot\u00eddico con unidades cati\u00f3nicas en su esqueleto, formadas por morfolinonucle\u00f3sidos que se unen mediante enlaces guanidino (morfolino-amidinas). Mediante la metodolog\u00eda as\u00ed desarrollada, se han conseguido preparar dos oligonucle\u00f3tidos que contienen una unidad morfolino-amidina en el extremo 3 y en una posici\u00f3n central de la cadena y se han estudiado sus propiedades de hibridaci\u00f3n mediante curvas de fusi\u00f3n. La s\u00edntesis de los oligonucle\u00f3tidos que contienen la unidad morfolino-amidina se ha ensayado mediante dos rutas. La primera consiste en sintetizar la unidad dinucleos\u00eddica morfolino-amidina, para luego, convenientemente funcionalizada como derivado fosforamidito, actuar como sint\u00f3n de la s\u00edntesis de oligonucle\u00f3tidos. La segunda estrategia ensayada se basa en la formaci\u00f3n del enlace guanidino en fase s\u00f3lida por acoplamiento entre el derivado tiourea de un morfolinonucle\u00f3sido y un aminonucle\u00f3sido anclado a resina. por lo que respecta a la primera estrategia, para preparar la subunidad dinucleos\u00eddica morfolino-amidina, se ensayaron diversos m\u00e9todos de formaci\u00f3n de guanidina. La elecci\u00f3n de la metodolog\u00eda se realiz\u00f3 preparando un derivado modelo, por condensaci\u00f3n de un derivado tiourea de morfolina y 5-amino-2,5-didesoxitimidina. Los ensayos concluyeron que la mejor opci\u00f3n consist\u00eda en preparar un intermedio activado de la tiourea por reacci\u00f3n con el reactivo de sanger, que por reacci\u00f3n con el aminonucle\u00f3sido daba lugar a la formaci\u00f3n de la guanidina. En estos ensayos, tambi\u00e9n se estudiaron diversos grupos para proteger el grupo guanidino, resultando ser la mejor opci\u00f3n el grupo aliloxicarbonilo, ya que se pod\u00eda eliminar cuantitativamente en condiciones compatibles con la estabilidad de los oligonucl\u00e9otidos mediante la cat\u00e1lisis de paladio. concluidos los ensayos, esta metodolog\u00eda se emple\u00f3 en la s\u00edntesis de un d\u00edmero guanidino de morfolinouridina y aminodesoxitimidina, que convenientemente funcionalizo como derivado fosforamidito, se emple\u00f3 para preparar el pent\u00e1mero 5t(mug(alloc)t)tc, con rendimientos de incorporaci\u00f3n que no superaban el 78%, valor bastante inferior a lo considerado \u00f3ptimo para llevar a cabo una s\u00edntesis habitual. La baja incorporaci\u00f3n del dinucle\u00f3sido se puede atribuir a efectos est\u00e9ricos del propio dinucle\u00f3sido que dificultan la reacci\u00f3n de formaci\u00f3n del enlace fosfito, que a la vez facilita la reacci\u00f3n de hidr\u00f3lisis que compite con la de acoplamiento. Por tanto, se opt\u00f3 por evaluar una metodolog\u00eda sint\u00e9tica alternativa que no precisara de la preparaci\u00f3n previa de la unidad dinucleos\u00eddica. Tambi\u00e9n se observ\u00f3 que en la etapa de eliminaci\u00f3n del grupo aliloxicarbonilo, que se realizaba sobre fase s\u00f3lida, daba lugar, adem\u00e1s del producto deseado, a una reacci\u00f3n secundaria de n-alilaci\u00f3n de guanidina. Por lo que respecta a la segunda ruta, para llevar a cabo la s\u00edntesis de guanidinas en fase s\u00f3lida, se ensayaron nuevamente diversos procedimientos. Inicialmente se ensay\u00f3 la metodolog\u00eda ya ensayada en disoluci\u00f3n, pero la pre-activaci\u00f3n de la tiourea derivada de morfolinouridina con el reactivo de sanger, para luego llevar a cabo el anclaje sobre 5-amino-2,5-didesoxitimidina anclada a la resina, en ninguno de los casos logr\u00f3 superar el 40% de incorporaci\u00f3n. Como alternativa se decidi\u00f3 ensayar la activaci\u00f3n in situ del derivado tiourea. Se obtuvieron los mejores resultados empleando el reactivo de mukaiyama, obteni\u00e9ndose un porcentaje de incorporaci\u00f3n alrededor del 70%. El an\u00e1lisis de los crudos de reacci\u00f3n indicaba que en todos los casos se formaba el producto esperado y un producto secundario de la reacci\u00f3n entre el reactivo de mukaiyama y el 5-aminonucle\u00f3sido anclado al soporte. Posteriormente, se comprob\u00f3 que esta reacci\u00f3n secundaria pod\u00eda ser minimizada mezclando previamente el derivado tiourea y el reactivo de mukaiyama, para luego tratar la resina con esta soluci\u00f3n. posteriormente, se ensay\u00f3 la eliminaci\u00f3n del grupo alloc en fase s\u00f3lida sobre mug(alloc)t-succinilsarcosinil-resina. Se ensayaron diferentes tratamientos para conseguir una eliminaci\u00f3n cuantitativa y minimizar la reacci\u00f3n secundaria de alilaci\u00f3n del grupo guanidino. Por los ensayos realizados, se comprob\u00f3 que se minimizaba la reacci\u00f3n secundaria empleando una concentraci\u00f3n elevada de capturador. mediante la metodolog\u00eda as\u00ed desarrollada, se sintetizaron dos oligonucle\u00f3tidos polipirimid\u00ednicos 14mer, que conten\u00edan una unidad morfolino-amidina (mug(alloc)t), el primero en el extremo 3 de la cadena (14e1), y el segundo en una posici\u00f3n central (14e2). En estos casos se observ\u00f3 que para poder eliminar el grupo alloc era necesario realizar m\u00e1s de un tratamiento con paladio para conseguir una eliminaci\u00f3n cuantitativa. los oligonucle\u00f3tidos as\u00ed sintetizados se emplearon en los experimentos de formaci\u00f3n de dobles y triples h\u00e9lices, con el fin de explorar de forma preliminar las propiedades de hibridaci\u00f3n de los oligonucle\u00f3tidos que contienen unidades de morfolino-amidina. Los resultados obtenidos en los experimentos de hibridaci\u00f3n, aunque preliminares, permiten deducir algunas pautas sobre el efecto de introducir subunidades morfolino-amidina (mugt) en la estabilidad de dobles y triples h\u00e9lices. Se concluye que una sola guanidina no es suficiente para estabilizar una doble h\u00e9lice de dna. Si la modificaci\u00f3n se sit\u00faa en un extremo de una de las cadenas hibridadas, la estabilidad es pr\u00e1cticamente id\u00e9ntica a la no modificada pero el efecto es claramente desestabilizante si se modifica una posici\u00f3n central. No obstante, la introducci\u00f3n de las subunidades guanidino aumenta la estabilidad qu\u00edmica y enzim\u00e1tica de las cadenas oligonucleot\u00eddicas. Con una sola subunidad guanidino, se observa la formaci\u00f3n de triples h\u00e9lices estables a ph neutro, condiciones en que la triple h\u00e9lice no modificada no se forma. No obstante, el efecto de estabilizaci\u00f3n depende del ph (disminuye con el aumento de ph) y de la posici\u00f3n modificada en la secuencia oligonucleot\u00eddica. A la vista de algunos de los resultados, la subunidad morfolino-amidina puede producir una cierta distorsi\u00f3n estructural en las dobles y triples h\u00e9lices, ya que la mayor estabilizaci\u00f3n se consigue modificando el extremo de unas de las cadenas.<\/p>\n

 <\/p>\n

Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00abAn\u00e1logos de dna que incorporan nucle\u00f3sidos con anillo de morfolina y grupos guanidino<\/strong>\u00ab<\/h3>\n
    \n
  • T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 An\u00e1logos de dna que incorporan nucle\u00f3sidos con anillo de morfolina y grupos guanidino <\/li>\n
  • Autor:<\/strong>\u00a0 Sonia Perez Rentero <\/li>\n
  • Universidad:<\/strong>\u00a0 Barcelona<\/li>\n
  • Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 23\/01\/2008<\/li>\n<\/ul>\n

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    Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n
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    • Director de la tesis<\/strong>\n
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      • Jordi Robles Brau<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n
      • Tribunal<\/strong>\n
          \n
        • Presidente del tribunal: ramon Eritja casadell\u00ed\u00a0 <\/li>\n
        • beatriz Garc\u00eda de la torre (vocal)<\/li>\n
        • jaume Farr?s soler (vocal)<\/li>\n
        • raimon Gargallo g\u00f3mez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n

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