{"id":62634,"date":"2018-03-09T22:50:32","date_gmt":"2018-03-09T22:50:32","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/regulacion-de-la-expresion-genica-de-somatostatina-por-desporalizacion-con-potasio-y-el-factor-neurotrofico-derivado-de-cerebro-bdnf-en-cerebro-de-rata-durante-el-desarrollo\/"},"modified":"2018-03-09T22:50:32","modified_gmt":"2018-03-09T22:50:32","slug":"regulacion-de-la-expresion-genica-de-somatostatina-por-desporalizacion-con-potasio-y-el-factor-neurotrofico-derivado-de-cerebro-bdnf-en-cerebro-de-rata-durante-el-desarrollo","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica-molecular\/regulacion-de-la-expresion-genica-de-somatostatina-por-desporalizacion-con-potasio-y-el-factor-neurotrofico-derivado-de-cerebro-bdnf-en-cerebro-de-rata-durante-el-desarrollo\/","title":{"rendered":"Regulacion de la expresion genica de somatostatina por desporalizacion con potasio y el factor neurotrofico derivado de cerebro (bdnf) en cerebro de rata durante el desarrollo"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> M\u00aa Isabel Sanchez Mu\u00f1oz <\/strong><\/h2>\n<p>La primera parte de este trabajo era estudiar la expresi\u00f3n del gen ss durante el envejecimiento e investigar si el tratamiento con gh pod\u00eda estimular la expresi\u00f3n e ss en el cerebro de rata vieja y si \u00e9ste ocurr\u00eda por igual en las diferentes \u00e1reas cerebrales. hemos confirmado que ss disminuye en cerebro durante el envejecimiento, observ\u00e1ndose la disminuci\u00f3n en diversas capas de la corteza cerebral, n\u00facleo estriado e hipocampo; y que el tratamiento sustitutivo con gh en administraci\u00f3n perif\u00e9rica revierte la disminuci\u00f3n de ss. dado que bdnf es un factor neurotr\u00f3pico implicado en la regulaci\u00f3n de ss, analizamos su expresi\u00f3n observando una disminuci\u00f3n de su expresi\u00f3n particularmente en hipocampo y corteza cerebral, cuya disminuci\u00f3n revierte tras el tratamiento con gh. Por lo tanto, confirmamos que ss y bdnf cerebral disminuye con la edad y \u00e9ste disminuci\u00f3n est\u00e1 \u00edntimamente relacionada con el d\u00e9ficit de gh observado en el envejecimiento. para esclarecer el mecanismo mediante el cual gh estimula la expresi\u00f3n de ss y la posible implicaci\u00f3n de bdnf en esta regulaci\u00f3n [ya que estudios previos de nuestro laboratorio (villuendas y cols) se demostr\u00f3 de bdnf aumentaba la expresi\u00f3n de ss e interven\u00eda en la inducci\u00f3n del arnm de ss por despolarizaci\u00f3n de k+], realizamos estudios de transfixiones transitorias con el promotor de ss unido al gen reportero cat con el fin de conocer si exist\u00eda una regulaci\u00f3n transcripcional de ss por bdnf. Estos estudios los realizamos en la l\u00ednea celular pc12trkb y posteriormente en cultivos primarios de c\u00e9lulas cerebrocorticales con el fin de acercarnos m\u00e1s al modelo \u00c2\u00bfin vitro\u00c2\u00bf, observando que las c\u00e9lulas transfectadas con el promotor ss65 (que contienen el elemento cre), tanto la actividad cat como luciferasa resultan ser de mayor intensidad que aquellas c\u00e9lulas transfectadas con el promotor carente del cre, tras hacer sido tratados ambos grupos con bdnf (50 ng\/ml). Estos resultados demuestran por primera vez que existe una regulaci\u00f3n transcripcional de ss por bdnf a trav\u00e9s del cre presente en el promotor de ss. puesto que bdnf ejerce un control transcripcional en la inducci\u00f3n de ss, quisimos estudiar los mecanismos intracelulares que participan en esta activaci\u00f3n. Dado que creb es crucial en la inducci\u00f3n g\u00e9nica de ss, estudiamos su activaci\u00f3n por bdnf comprobando la existencia de un pico m\u00e1ximo de activaci\u00f3n a los 10 minutos. Mediante el empleo de los inhibidores espec\u00edficos de cada v\u00eda, llevamos a cabo el estudio de las v\u00edas que activaban creb por bdnf. As\u00ed para la v\u00eda ampc\/pka utilizamos rp-camps (20 y 50 \u00c2\u00b5m) y h89 (10, 20 y 40 \u00c2\u00b5m); la v\u00eda mapk, pd098059 (20 y 30 \u00c2\u00b5m); la v\u00eda camks, kn62 (10 y 30 \u00c2\u00b5m) y kn93 (10 y 30 \u00c2\u00b5m); y la v\u00eda p13\u00c2\u00bf-kinasa\/akt, ly294002 (5, 10, 20 y 40 \u00c2\u00b5m). Observamos que las v\u00edas que activan creb por bdnf son la v\u00eda mapk, ampc\/pka y p13\u00c2\u00bf-kinasa\/akt. Para estudiar cuales de estas v\u00edas estaban implicadas en la inducci\u00f3n del arnm de ss utilizamos los mismos inhibidores espec\u00edficos de cada v\u00eda, h89 (5, 10 y 20 \u00c2\u00b5m), rp-camps (20 y 50 \u00c2\u00b5m), pd098059 (20 y 30 \u00c2\u00b5m), kn62 (10 y 30 \u00c2\u00b5m) y ly294002 (5, 10, 20 y 40\u00c2\u00b5m); observando que las v\u00eda que participan en dicha inducci\u00f3n son las v\u00edas mapk, ampc\/pka,  camks y p13\u00c2\u00bf-kinasa\/akt; con la consecuente activaci\u00f3n de creb. bdnf adem\u00e1s de aumentar los niveles del arnm de ss, media la inducci\u00f3n del gen ss por despolarizaci\u00f3n de la membrana con potasio. Por ello, nos planteamos tambi\u00e9n estudiar los mecanismos intracelulares que median esta inducci\u00f3n de ss por potasio. Estudiamos la activaci\u00f3n de creb por k+, observando una activaci\u00f3n con dos picos  de m\u00e1xima activaci\u00f3n, a los 5 (activaci\u00f3n temprana) y 30 minutos (activaci\u00f3n tard\u00eda). Para estudiar las v\u00edas que participaban en su activaci\u00f3n, utilizamos los inhibidores espec\u00edficos de cada v\u00eda ras\/mapk pd098059 (1, 10 y 100 \u00c2\u00b5m), ampc\/pka h-89 (5, 10, 20 y 40 \u00c2\u00b5m) y rp-camps (2,5 , 10 y 20 \u00c2\u00b5m) y de camks kn62 (10, 30 y 45 \u00c2\u00b5m) y kn93 (10 y 30 \u00c2\u00b5m); observando que las v\u00edas responsables de la activaci\u00f3n temprana de creb son las v\u00edas ampc\/pka y camks; y de la activaci\u00f3n tard\u00eda, la v\u00eda ras\/mapk. Para identificar cuales de estas v\u00edas estaban implicadas en la inducci\u00f3n del arnm de ss por k+, utilizamos los mismos inhibidores espec\u00edficos de cada v\u00eda, h89 (5, 10 y 20 \u00c2\u00b5m), rp-camps(2,5 \u00c2\u00b5m), pd098059 (10\u00c2\u00b5m), kn62 (10, 30 y 45 \u00c2\u00b5m), kn93 (10 \u00c2\u00b5m); confirmando que las v\u00edas que participan en la inducci\u00f3n del arnm de ss por k+ son las v\u00edas ampc\/pka y camks, que son las mismas que participan en la activaci\u00f3n temprana de crb, confirmando por tanto la implicaci\u00f3n del creb activado tempranamente en la inducci\u00f3n del arnm de ss por k+.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Regulacion de la expresion genica de somatostatina por desporalizacion con potasio y el factor neurotrofico derivado de cerebro (bdnf) en cerebro de rata durante el desarrollo<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Regulacion de la expresion genica de somatostatina por desporalizacion con potasio y el factor neurotrofico derivado de cerebro (bdnf) en cerebro de rata durante el desarrollo <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 M\u00aa Isabel Sanchez Mu\u00f1oz <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Alcal\u00e1<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 29\/01\/2008<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Lucinda Cacicedo Egues<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: eladio Montoya melgar <\/li>\n<li>rosa Mar\u00eda Tol\u00f3n rafael (vocal)<\/li>\n<li>miriam Fernandez fernandez (vocal)<\/li>\n<li>mario Vallejo fern\u00e1ndez de la reguera (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de M\u00aa Isabel Sanchez Mu\u00f1oz La primera parte de este trabajo era estudiar la 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