{"id":63060,"date":"2018-03-09T22:50:59","date_gmt":"2018-03-09T22:50:59","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/analisis-genetico-y-molecular-del-sindrome-de-meroteaux-lamy\/"},"modified":"2018-03-09T22:50:59","modified_gmt":"2018-03-09T22:50:59","slug":"analisis-genetico-y-molecular-del-sindrome-de-meroteaux-lamy","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/barcelona\/analisis-genetico-y-molecular-del-sindrome-de-meroteaux-lamy\/","title":{"rendered":"Analisis genetico y molecular del sindrome de meroteaux-lamy"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Elena Garrido Fernandez <\/strong><\/h2>\n<p>Esta tesis es una contribuci\u00f3n al conocimiento del s\u00edndrome de maroteux-lamy en el terreno de la gen\u00e9tica molecular. El s\u00edndrome de maroteux-lamy o mucopolisacaridosis del tipo vi (mps vi) es una grave enfermedad  hereditaria  muy poco frecuente en humanos, provocada por la deficiencia de un \u00fanico gen, que codifica la hidrolasa lisos\u00f3mica n-acetilgalactosamino-4-sulfatasa o arilsulfatasa b (arsb). la primera publicaci\u00f3n incluida en la tesis engloba los resultados del an\u00e1lisis de las mutaciones encontradas en el gen arsb de pacientes espa\u00f1oles y argentinos con mps vi. Se ha identificado todos los alelos responsables de la enfermedad, de los cuales 9 no  han sido publicados anteriormente. Mediante estudios de rt-pcr se han obtenido evidencias de que algunas de las mutaciones pod\u00edan provocar la destrucci\u00f3n del correspondiente transcrito mutado mediante el mecanismo de nonsense-mediated rna decay. El estudio tambi\u00e9n ofrece datos relativos a la cl\u00ednica de los pacientes analizados, incluyendo la edad de diagn\u00f3stico, los principales s\u00edntomas fenot\u00edpicos y la concentraci\u00f3n de glicosaminoglicanos totales excretados en orina, que constituyen datos importantes a la hora de intentar establecer relaciones fenotipo-fenotipo. Cumpliendo con otro de los objetivos de la tesis, se realiz\u00f3 el an\u00e1lisis haplot\u00edpico de cuatro mutaciones comunes identificadas en pacientes espa\u00f1oles y argentinos con mmps vi y se apunt\u00f3 a un posible origen \u00fanico para dichos cambios.  la segunda publicaci\u00f3n presenta los estudios de expresi\u00f3n y caracterizaci\u00f3n bioqu\u00edmica de la mayor parte de las prote\u00ednas mutadas que no hab\u00edan sido descritas con anterioridad por otros autores. Por primera vez en la bibliograf\u00eda, se explicit\u00f3 que el cdna mutado se hab\u00eda expresado en el mismo contexto haplot\u00edpico que en el paciente en relaci\u00f3n con los dos cambios ex\u00f3nicos presentes en las bases de datos de snps, p.V358m y p.S384n. Ambas . Variantes se expresaron tambi\u00e9n de forma individual, siendo de especial inter\u00e9s los resultados obtenidos para el cambio p.S384n, que tradicionalmente se ha considerado como mutaci\u00f3n patog\u00e9nica sin que se hayan realizado estudios de expresi\u00f3n. El an\u00e1lisis bioqu\u00edmica de la actividad enzim\u00e1tica in vitro de las prote\u00ednas mutadas se complet\u00f3 mediante an\u00e1lisis de western blot. Tambi\u00e9n se realizaron estudios de inmunofluorescencia indirecta para valorar el grado de localizaci\u00f3n de la prote\u00edna arsb mutada en los lisosomas de fibroblastos de pacientes. Finalmente se realizaron estudios a nivel de rna para las mutaciones que introducen codones de parada prematuros en la secuencia codificante (sin sentido, de splicing). Mediante el tratamiento de cultivos de fibroblastos de pacientes con el inhibidor de la s\u00edntesis proteica cicloheximida, se puso de manifiesto que el mecanismo de nonsense- mediated rna decay era responsable de la degradaci\u00f3n de los transcritos portadores de cuatro de las mutaciones. el trabajo que ocupa el tercer art\u00edculo es una aproximaci\u00f3n a una forma de terapia complementaria a la de sustituci\u00f3n enzim\u00e1tica ya establecida para los pacientes de mps vi, que se podr\u00eda aplicar a los pacientes portadores de mutaciones sin sentido. Se trata del primer intento en esta enfermedad de intentar suprimir los codones de terminaci\u00f3n prematura mediante el uso de antibi\u00f3ticos aminoglic\u00f3sidos. Los ensayos se realizaron tanto en c\u00e9lulas transfectadas como en una l\u00ednea de fibroblastos humanos. Las mutaciones escogidas permitieron ensayar la influencia del contexto nubleot\u00eddico del cod\u00f3n de parada en la determinaci\u00f3n de la eficacia de la supresi\u00f3n de terminaci\u00f3n. Las c\u00e9lulas se incubaron en presencia de gentamicina y se compararon los niveles de mrna y de actividad enzim\u00e1tica con los obtenidos en c\u00e9lulas sin tratar. Los resultados evidenciaron que, en l\u00edneas generales, el tratamiento con gentamicina para la supresi\u00f3n de codones sin sentido incrementa, aunque poco, la capacidad catal\u00edtica de la arsb, y que la eficacia del proceso parece depender del contexto nucleot\u00eddico.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Analisis genetico y molecular del sindrome de meroteaux-lamy<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Analisis genetico y molecular del sindrome de meroteaux-lamy <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Elena Garrido Fernandez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Barcelona<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 22\/02\/2008<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Daniel Grinberg Vaisman<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: susana Balcells comas <\/li>\n<li>pia Gallano petit (vocal)<\/li>\n<li>laura Gort mas (vocal)<\/li>\n<li>loreto Martorell sampol (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Elena Garrido Fernandez Esta tesis es una contribuci\u00f3n al conocimiento del s\u00edndrome de maroteux-lamy en el terreno 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