{"id":63227,"date":"2018-03-09T22:51:10","date_gmt":"2018-03-09T22:51:10","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/desarrollo-de-nuevas-herramientas-y-protocolos-de-seleccion-de-enzimas-termoestables-en-thermus-thermophilus\/"},"modified":"2018-03-09T22:51:10","modified_gmt":"2018-03-09T22:51:10","slug":"desarrollo-de-nuevas-herramientas-y-protocolos-de-seleccion-de-enzimas-termoestables-en-thermus-thermophilus","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/ciencias-de-la-vida\/desarrollo-de-nuevas-herramientas-y-protocolos-de-seleccion-de-enzimas-termoestables-en-thermus-thermophilus\/","title":{"rendered":"Desarrollo de nuevas herramientas y protocolos de selecci\u00f3n de enzimas termoestables en thermus thermophilus"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Emilio Blas Galindo <\/strong><\/h2>\n<p>El g\u00e9nero thermus se ha convertido en uno de los modelos m\u00e1s utilizados entre las bacterias term\u00f3filas debido a su f\u00e1cil manejo, en el laboratorio, debido a que los cultivos de este microorganismo crecen bajo condiciones aer\u00f3bicas y gracias a su competencia natural. Estas propiedades y la habilidad der sus enzimas term\u00f3filas y complejos supramoleculares de cristalizar a temperatura ambiente, se encuentran entre los mayores logros en los \u00faltimos a\u00f1os en el campo de la biolog\u00eda estructural, con ejemplos tan relevantes como las estructuras de alta resoluci\u00f3n del ribosoma 70s, la rna polimerasa bacteriana y el complejo respiratorio i. para establecer un v\u00ednculo claro entre estructura y funci\u00f3n se requieren herramientas gen\u00e9ticas bien desarrolladas, y en esta tesis doctoral tratamos de incluir algunos de los m\u00e1s recientes intentos de proporcionar nuevas herramientas para el an\u00e1lisis gen\u00e9tico de thermus. Cuando comenzamos este trabajo, s\u00f3lo pod\u00eda utilizarse una \u00fanica resistencia a antibi\u00f3tico (kanamicina) como marcador de selecci\u00f3n a altas temperaturas, y cualquier manipulaci\u00f3n posterior de las cepas requerir\u00eda la deleci\u00f3n del marcador para poder ser utilizada de nuevo en la misma cepa. Para sobreponernos a ello, tratamos de utilizar marcadores de selecci\u00f3n alternativos. para ello, seguimos dos estrategias. Por un lado, a partir del desarrollo de una forma termoestable de la higromicina b fosfotransferasa por parte de un grupo japon\u00e9s (nakamura, 2005), generamos nuevos pl\u00e1smidos compatibles con la resistencia a kanamicina, lo que permite los ensayos de expresi\u00f3n y complementaci\u00f3n en fondos resistentes a kanamicina. por otro lado, describimos el desarrollo de un nuevo marcador basado en un alelo mutante espont\u00e1neo del gen rpsl que codifica una prote\u00edna mutante s12, que confiere dependencia de estreptomicina. As\u00ed, este marcador, permiti\u00f3 su uso no solo para la construcci\u00f3n de nuevos vectores, sino tambi\u00e9n para llevar a cabo la deleci\u00f3n dirigidas de genes utilizando su selecci\u00f3n negativa. otro objetivo est\u00e1 dedicado al uso de una forma mutante de la gfp (\u00abgreen fluorescent protein\u00bb, prote\u00edna verde fluorescente) de aequorea victoria como marcador de localizaci\u00f3n en t. Thermophilus. Demostramos que una forma mutante de esta prote\u00edna puede ser expresada y procesada en t. Thermophilius a 70\u00c2\u00ba c para dar una prote\u00edna fluorescente, cuya utilidad queda demostrada expresando prote\u00ednas citopl\u00e1smicas y peripl\u00e1smicas como fusiones en n-terminal de esta variante de gfp. por \u00faltimo, desarrollamos un m\u00e9todo nuevo y general de estabilizaci\u00f3n de prote\u00ednas a trav\u00e9s de un protocolo de selecci\u00f3n en thermus thermophilus, en colaboraci\u00f3n con una compa\u00f1\u00eda de biotecnolog\u00eda especializada en evoluci\u00f3n de prote\u00ednas. El m\u00e9todo est\u00e1 basado en la interferencia en el plegamiento que la zona n-terminal de una prote\u00edna tiene sobre el extremo c-terminal. Para ello, desarrollamos pl\u00e1smidos desde los cuales se pudieran expresar fusiones entre prote\u00ednas de inter\u00e9s y un reportero en t. Thermophilus a temperaturas term\u00f3filas. Con esta estrategia pudimos demostrar este principio y seleccionamos formas termoestables del interfer\u00f3n gamma humano, una prote\u00edna que no tiene actividad enzim\u00e1tica, con un protocolo muy r\u00e1pido y eficiente. La aplicaci\u00f3n general de este m\u00e9todo a otras prote\u00ednas y enzimas ha sido demostrado m\u00e1s adelante en la compa\u00f1\u00eda de biotecnolog\u00eda con la que colaboramos.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Desarrollo de nuevas herramientas y protocolos de selecci\u00f3n de enzimas termoestables en thermus thermophilus<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Desarrollo de nuevas herramientas y protocolos de selecci\u00f3n de enzimas termoestables en thermus thermophilus <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Emilio Blas Galindo <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Aut\u00f3noma de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 29\/02\/2008<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jos\u00e9 Berenguer Carlos<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: ricardo Amils pibernat <\/li>\n<li>Mar\u00eda Jos\u00e9 Bonete  p\u00e9rez (vocal)<\/li>\n<li>emilia Quesada arroquia (vocal)<\/li>\n<li>Jos\u00e9 Manuel Guis\u00e1n seijas (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Emilio Blas Galindo El g\u00e9nero thermus se ha convertido en uno de los modelos m\u00e1s utilizados entre 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