{"id":63426,"date":"2008-10-03T00:00:00","date_gmt":"2008-10-03T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-del-metabolismo-del-hibridoma-55-6-productor-de-anticuerpos-monoclonales-contra-la-proteina-gp-120-del-vih\/"},"modified":"2008-10-03T00:00:00","modified_gmt":"2008-10-03T00:00:00","slug":"estudio-del-metabolismo-del-hibridoma-55-6-productor-de-anticuerpos-monoclonales-contra-la-proteina-gp-120-del-vih","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/almeria\/estudio-del-metabolismo-del-hibridoma-55-6-productor-de-anticuerpos-monoclonales-contra-la-proteina-gp-120-del-vih\/","title":{"rendered":"Estudio del metabolismo del hibridoma 55-6, productor de anticuerpos monoclonales contra la proteina gp-120 del vih"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Mar\u00eda  Lourdes Acosta Lopez <\/strong><\/h2>\n<p>En la tecnolog\u00eda del cultivo de c\u00e9lulas animales, uno de los intereses mayoritarios es incrementar el rendimiento del producto mediante mejoras del proceso de producci\u00f3n desde sus inicios. En este sentido, la caracterizaci\u00f3n del crecimiento y el metabolismo de cualquier l\u00ednea celular es esencial antes de llevar a cabo procesos a gran escala.  el objetivo de este trabajo es el estudio del efecto de la concentraci\u00f3n de diferentes nutrientes y metabolitos secundarios presentes en el medio de cultivo, as\u00ed como del cultivo conjunto con linfocitos t, sobre el metabolismo y los par\u00e1metros cin\u00e9ticos del hibridoma de linfocito b murino 55-6, productor de un anticuerpo monoclonal dirigido frente a la prote\u00edna gp-120 de la superficie del vih-i.  con este fin, se han realizado cultivos en discontinuo en frascos t bajo diferentes condiciones, determin\u00e1ndose en todos ellos la concentraci\u00f3n de c\u00e9lulas totales, xt, y viables, xv, las concentraciones de los metabolitos m\u00e1s importantes (glucosa, glutamina, lactato y amoniaco), y la de anticuerpo monoclonal, acmo, as\u00ed como la fracci\u00f3n activa del acmo obtenido.  para la obtenci\u00f3n de los par\u00e1metros cin\u00e9ticos se necesit\u00f3 el empleo de ecuaciones emp\u00edricas que ajustasen los datos primarios o experimentales con la mayor precisi\u00f3n posible. De esta forma, para ajustar la variaci\u00f3n de la concentraci\u00f3n de c\u00e9lulas totales y viables frente al tiempo de cultivo, se seleccion\u00f3 una ecuaci\u00f3n log\u00edstica asim\u00e9trica; mientras que para ajustar los datos experimentales de concentraci\u00f3n de glucosa, glutamina, lactato, amoniaco y acmo, se emple\u00f3 una ecuaci\u00f3n sigmoidal asim\u00e9trica. Gracias a estas ecuaciones, se pudieron calcular la velocidad espec\u00edfica de crecimiento celular, ?, Y las velocidad espec\u00edfica de consumo de nutrientes (glucosa, qglc, y glutamina, qgin), de producci\u00f3n de metabolitos secundarios (lactato, qlac, y amoniaco, qam) y la de producci\u00f3n de acmo, qacmo, as\u00ed como sus coeficientes de rendimiento aparentes.  en primer lugar, en esta memoria se ha estudiado el efecto de la concentraci\u00f3n de glucosa y glutamina en el medio de cultivo sobre el metabolismo del hibridoma 55-6. En estos ensayos se encuentra que para [glc]0>1,0mm y [gln]0>0,2mm, la limitaci\u00f3n cin\u00e9tica desaparece, observ\u00e1ndose un patr\u00f3n de limitaci\u00f3n del crecimiento puramente estequiom\u00e9trico. Adem\u00e1s, se ha demostrado que cuando la glutamina comienza a ser limitante, el consumo de glucosa por las c\u00e9lulas se reduce, debido a que la falta de glutamina en el medio no puede ser compensada totalmente por la glucosa, mientras que el metabolismo de la glutamina es m\u00e1s eficiente. En cuanto a la producci\u00f3n de acmo en estos ensayos, se demuestra que la formaci\u00f3n de acmo es fundamentalmente no asociada al crecimiento, por lo que es independiente de las concentraciones de glucosa o glutamina ensayadas. Sin embargo, la fracci\u00f3n activa del acmo generado depende de la [glc]0, observ\u00e1ndose que aumenta a medida que lo hace la concentraci\u00f3n de glucosa.  el transporte de la glucosa y la glutamina al interior de las c\u00e9lulas, as\u00ed como las rutas de la gluc\u00f3lisis y la glutaminolisis, ocurren a velocidades elevadas, que dan lugar a grandes cantidades de metabolitos que act\u00faan como inhibidores, como es el caso del lactato y el amoniaco. En esta memoria se estudia el efecto de diferentes concentraciones iniciales de amoniaco, [am]0, y de lactato, [lacjo, encontr\u00e1ndose que, mientras que el amoniaco reduce marcadamente el crecimiento celular por encima de concentraciones de 4,0mm, para observar un efecto inhibitorio del lactato, se deben alcanzar concentraciones diez veces superiores a las encontradas para la inhibici\u00f3n por el amoniaco.  el efecto de la concentraci\u00f3n de amoniaco sobre la producci\u00f3n de acmo est\u00e1 relacionado con la inhibici\u00f3n del crecimiento celular, de forma que la qacmo disminuye con el aumento en la [am]0. Por el contrario, cuando aumenta la [lacjo, se observa un aumento de la qacmo. Para ninguna de las concentraciones de amoniaco y de lactato ensayadas se ha encontrado efecto alguno sobre la fracci\u00f3n activa del acmo generado por las c\u00e9lulas.  el piruvato constituye un punto central de ramificaci\u00f3n metab\u00f3l\u00edca, siendo adem\u00e1s clave en el metabolismo del carbono. Es por esto que se estudia el efecto de la presencia de piruvato en cultivos realizados con diferentes concentraciones iniciales de glucosa y glutamina. En ninguno de los ensayos realizados en este bloque se ha observado efecto de la concentraci\u00f3n de piruvato sobre la ?. Cuando la concentraci\u00f3n de glutamina en el medio es limitante, se observa que el piruvato es capaz de suplir la falta de glutamina que no es capaz de compensar la glucosa, haciendo, adem\u00e1s, el metabolismo de la glucosa m\u00e1s eficiente. el suero fetal bovino, fbs, es el suplemento est\u00e1ndar mayoritariamente empleado en los medios de cultivo. Ayuda a mantener el crecimiento celular y la producci\u00f3n de anticuerpo gracias al aporte de prote\u00ednas, factores de crecimiento y otro gran n\u00famero de macromol\u00e9culas. En esta memoria se ha estudiado el efecto del empleo de diferentes concentraciones de fbs, encontr\u00e1ndose una extraordinaria dependencia de la ? Con la proporci\u00f3n de fbs y un metabolismo de la glutamina y la glucosa mucho m\u00e1s eficiente cuando se emplean elevadas concentraciones de fbs en el medio (15%). Sin embargo, no se ha encontrado efecto alguno de la concentraci\u00f3n de fbs ni sobre la qacmo ni sobre el yacmo\/xt, as\u00ed como tampoco sobre la fracci\u00f3n activa del acmo producido.   la relaci\u00f3n existente entre las c\u00e9lulas del sistema inmune est\u00e1 m\u00e1s que establecida. Tanto in vivo como in vitro, los linfocitos b necesitan ser activados por los linfocitos t, que, a su vez, han de estar activados previamente, para que se desencadene la respuesta inmune. Esta colaboraci\u00f3n se obtiene a trav\u00e9s de la interacci\u00f3n de diferentes mol\u00e9culas efectoras, tanto unidas a la membrana (como la interacci\u00f3n cd4q-cd40l) como secretadas (como las interleucinas).   estos fundamentos nos han servido para estudiar el efecto sobre el metabolismo del hibridoma 55-6 en cultivos conjuntos con linfocitos t el-4, encontr\u00e1ndose que existe cierta interacci\u00f3n entre ambas poblaciones celulares de manera que la ? Para las c\u00e9lulas de hibridoma es mayor cuando la relaci\u00f3n 55-6:el-4 inicial es de 4:1, disminuyendo despu\u00e9s a medida que aumenta la relaci\u00f3n en linfocitos t, mientras que la ? Para los linfocitos el-4 es siempre mayor en los co-cultivos que en el cultivo control.  en cuanto a la producci\u00f3n de acmo, se observa que qacmo aumenta en los co-cultivos con respecto al control de c\u00e9lulas 55-6, y a medida que aumenta la relaci\u00f3n inicial de linfocitos t. Adem\u00e1s, mientras que para los cultivos con relaciones iniciales 4:1 y 3:1 qacmo se mantiene pr\u00e1cticamente constante con el descenso de ? A lo largo del tiempo de cultivo, para los realizados con relaciones iniciales de 2:1 y 1:1, se observa un aumento en la qacmo cuando las c\u00e9lulas dejan de crecer sin embargo, no se observa ning\u00fan efecto sobre la fracci\u00f3n activa del acmo debido al cultivo conjunto de ambas l\u00edneas celulares.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio del metabolismo del hibridoma 55-6, productor de anticuerpos monoclonales contra la proteina gp-120 del vih<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio del metabolismo del hibridoma 55-6, productor de anticuerpos monoclonales contra la proteina gp-120 del vih <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Mar\u00eda  Lourdes Acosta Lopez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Almer\u00eda<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 10\/03\/2008<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Antonio Contreras Gomez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Fernando Camacho rubio <\/li>\n<li>sergio Mart\u00ednez escobar (vocal)<\/li>\n<li>Emilio Molina grima (vocal)<\/li>\n<li>mario Diaz fernandez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Mar\u00eda Lourdes Acosta Lopez En la tecnolog\u00eda del cultivo de c\u00e9lulas animales, uno de los intereses mayoritarios 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