{"id":63959,"date":"2018-03-09T22:51:57","date_gmt":"2018-03-09T22:51:57","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/investigacion-en-terapias-especa%c2%adficas-de-mutacion-en-enfermedades-metabolicas-hereditarias-respuesta-a-cofactores-y-terapia-antisentido\/"},"modified":"2018-03-09T22:51:57","modified_gmt":"2018-03-09T22:51:57","slug":"investigacion-en-terapias-especa%c2%adficas-de-mutacion-en-enfermedades-metabolicas-hereditarias-respuesta-a-cofactores-y-terapia-antisentido","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/genetica-bioquimica\/investigacion-en-terapias-especa%c2%adficas-de-mutacion-en-enfermedades-metabolicas-hereditarias-respuesta-a-cofactores-y-terapia-antisentido\/","title":{"rendered":"Investigaci\u00f3n en terapias espec\u00edficas de mutaci\u00f3n en enfermedades metab\u00f3licas hereditarias. respuesta a cofactores y terapia antisentido"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Cristina Aguado Esteban <\/strong><\/h2>\n<p>Existen m\u00e1s de 500 enfermedades metab\u00f3licas hereditarias (emh) con una frecuencia individual baja pero que en su conjunto afectan a un grupo significativo de la poblaci\u00f3n. Solamente el 12% de estas patolog\u00edas presenta un tratamiento eficaz por lo que se hace necesaria la b\u00fasqueda de nuevas terapias, entre ellas se encuentran aquellas basadas en el efecto que cada mutaci\u00f3n produce a nivel de prote\u00edna, adn \u00f3 arn. En el presente trabajo hemos analizado varias de estas nuevas terapias, en concreto hemos investigado los mecanismos responsables de la respuesta a cofactores en fenilcetonuria (pku), acidemia propi\u00f3nica (ap), metilcrotonilglicinuria (mcg) y acidemia metilmal\u00f3nica (am) y hemos ensayado terapias moduladoras de splicing en ap. la fenilcetonuria est\u00e1 causada por defectos en la enzima fenilalanina hidroxilasa que cataliza la hidroxilaci\u00f3n de la l-phe, en esta reacci\u00f3n interviene la tetrahidrobiopterina (bh4) como cofactor, el tratamiento cl\u00e1sico de la enfermedad es la restricci\u00f3n prot\u00e9ica, pero desde hace 9 a\u00f1os se han descrito pacientes con una respuesta favorable a la suplementaci\u00f3n oral con bh4. En este trabajo hemos genotipado 31 pacientes pku espa\u00f1oles sometidos a test de sobrecarga con bh4 y hemos seleccionado 14 mutaciones missense para analizar sus propiedades cin\u00e9ticas o de estabilidad utilizando diferentes sistemas de expresi\u00f3n, procariotas (e. Colli), eucariotas(hep3b) y libres de c\u00e9lulas (tnt). Los resultados nos han permitido identificar actividad residual en las prote\u00ednas analizadas cin\u00e9ticamente, un mutante de km por bh4 (d129g), tres prote\u00ednas estabilizadas por niveles elevados de bh4 (a309v, v388m e y414c) y un aumento en la vida media de la pah end\u00f3gena en hep3b al aumentar la bh4 pero sin ning\u00fan efecto a nivel transcripcional. La base molecular de la respuesta a bh4 es multifactorial y dependiente de mutaci\u00f3n, apuntando a un efecto estabilizante de la bh4, como mecanismo mayoritario. la acidemia metilmal\u00f3nica est\u00e1 causada por un defecto en el paso de metilmalonil coa a succinil coa catalizado por la enzima metilmalonil coa mutasa (mcm) que utiliza como cofactor la adocbl. Una de las enzimas responsables de la activaci\u00f3n de la adocbles la atp: cobalamina adenosil transferasa (atr), algunos pacientes con defectos en atr responden positivamente a la suplementaci\u00f3n con cobalamina. Para analizar los mecanismos moleculares responsables de esta respuesta se expres\u00f3 en un sistema procariota la atr y se midieron las propiedades cin\u00e9ticas y la distribuci\u00f3n oligom\u00e9rica de mutaciones presentes en pacientes respondedores. Los resultados sugieren un defecto en la estabilidad de una de las prote\u00ednas mutante con una actividad enzim\u00e1tica reducida pero sin defectos en la afinidad por los sustratos. la acidemia pori\u00f3nica y la metilcrotonilglicinuria son dos emh causadas por defectos en carboxilasas mitocondriales y biotina dependientes (pcc y mcc respectivamente), no existe consenso en la literatura sobre el efecto de la biotina a nivel de arnm de las carboxilasas, por ello analizamos el efecto de niveles farmacol\u00f3gicos y deficientes de biotina sobre estas dos carboxilasas en un modelo eucariota celular (hep3b), observ\u00e1ndose que la biotina no afecta la expresi\u00f3n de estas enzimas pero si favorece la conversi\u00f3n de apocarboxilasa a holocarboxilasa. finalmente analizamos el efecto de drogas y de oligonicle\u00f3tidos antisentido tipo morfolinos (amos) sobre mutaciones de splicing en pacientes con ap. El uso de tres drogas, valproico, bhutirato s\u00f3dico y kinetina sobre fibroblastos de pacientes con mutacionesw que producen skipping ex\u00f3nico pero con niveles detectables de arnm normal no produjo un aumento de los niveles de transcrito normal. se usaron amos sobre dos pacientes con ap que portaban defectos intr\u00f3nicos que generaban inserci\u00f3n de secuencias aberrantes, en estas secuencias insertadas se produc\u00eda un incremento en los scores de splicing o una generaci\u00f3n de motivos de uni\u00f3n por factores de splicing. Los amos fueron dise\u00f1ados contra las secuencias de splicing cr\u00edpticas de los pseudoexones para bloquear el acceso de la maquinaria de splicing. usando la terapia antisentido sobre fibroblastos de los dos pacientes hemos obtenido el splicing correcto del arnm y recuperaci\u00f3n total de la actividad pcc. La inclusi\u00f3n de secuencias aberrantes es la causa de la enfermedad en estos pacientes y el uso de amos es una estrategia efectiva para este tipo de mutaciones.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Investigaci\u00f3n en terapias espec\u00edficas de mutaci\u00f3n en enfermedades metab\u00f3licas hereditarias. respuesta a cofactores y terapia antisentido<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Investigaci\u00f3n en terapias espec\u00edficas de mutaci\u00f3n en enfermedades metab\u00f3licas hereditarias. respuesta a cofactores y terapia antisentido <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Cristina Aguado Esteban <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Aut\u00f3noma de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 14\/04\/2008<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Lourdes Ru\u00edz Desviat<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: fernando Valdivieso amate <\/li>\n<li>aurora Mart\u00ednez ru\u00edz (vocal)<\/li>\n<li>jorgina Satr\u00fastegui gil-delgado (vocal)<\/li>\n<li>Jos\u00e9 Fernandez piqueras (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Cristina Aguado Esteban Existen m\u00e1s de 500 enfermedades metab\u00f3licas hereditarias (emh) con una frecuencia individual baja pero [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[940],"tags":[141174,141172,14429,6755,14602,141173],"class_list":["post-63959","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-genetica-bioquimica","tag-aurora-Martinez-ruiz","tag-cristina-aguado-esteban","tag-fernando-valdivieso-amate","tag-jorgina-satrustegui-gil-delgado","tag-jose-fernandez-piqueras","tag-lourdes-ruiz-desviat"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/63959","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=63959"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/63959\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=63959"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=63959"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=63959"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}