{"id":64199,"date":"2018-03-09T22:52:11","date_gmt":"2018-03-09T22:52:11","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/lactococcus-lactis-productores-de-pediocina-pa-1-y-enterococos-aislados-de-leche-materna-como-agentes-bioconservantes-en-quesos\/"},"modified":"2018-03-09T22:52:11","modified_gmt":"2018-03-09T22:52:11","slug":"lactococcus-lactis-productores-de-pediocina-pa-1-y-enterococos-aislados-de-leche-materna-como-agentes-bioconservantes-en-quesos","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/ginecologia\/lactococcus-lactis-productores-de-pediocina-pa-1-y-enterococos-aislados-de-leche-materna-como-agentes-bioconservantes-en-quesos\/","title":{"rendered":"Lactococcus lactis productores de pediocina pa-1 y enterococos aislados de leche materna como agentes bioconservantes en quesos"},"content":{"rendered":"

Tesis doctoral de Carlota Reviriego Herraez <\/strong><\/h2>\n

En esta tesis se han desarrollado diversos sistemas para la producci\u00f3n heter\u00f3loga de pediocina pa-1 en cepas de lactococcus lactis previamente seleccionadas para la elaboraci\u00f3n de quesos debido a sus buenas propiedades tecnol\u00f3gicas. Inicialmente, el plasmido pf12160, que contiene el gen h\u00edbrido l-peda (codifica la fusi\u00f3n entre el lider la lactococina a y la propedici\u00f3n pa-1) y los genes icnc y icnd (codifican el sistema de secreci\u00f3n de la lactococina a) se introdujo en l. Lactis esi 153 y l. Lactis esi 515 (nis+). El nivel de producci\u00f3n de pediocina de los respectivos transformantes (l. Lactis cl1 y cl2) fue de aproximadamente 600 y 400 ng\/ml, respectivamente, lo que representa un 30 y un 20% de la cantidad producida por pediococcus acidilactici 347, una cepa que produce dicha bacteriocina de forma natural. La transformaci\u00f3n de l. Lactis esi 515 con pf2160 no afect\u00f3 a su capacidad para producir nisina. Posteriormente, se intent\u00f3 mejorar la producci\u00f3n de pediocina en los mismos hospedadores mediante la introducci\u00f3n de los pl\u00e1smidos pmc117, prk119 y pcnc16, que contienen el oper\u00f3n completo de la pediocina bajo control del promotor p32. En este caso, el nivel de producci\u00f3n de pediocina de todos los transformantes fue mayor que el obtenido en el estudio anterior basado en el intercambio del l\u00edder y sistema de transporte de la lactococina a. Con relaci\u00f3n a las cepas recombinantes derivadas de l. Lactis esi 153, la concentraci\u00f3n de pediocina en los sobrenadantes de l. Lactis rk1 (prk119) y cnc1 (pcnc16) fue notablemente superior (163-165 %) que la obtenida en los de p. Acidilactici 347. La transformaci\u00f3n de l. Lactis esi 515 con cualquiera de estos tres pl\u00e1smidos tampoco afect\u00f3 a su capacidad para producir nisina. La producci\u00f3n de pediocina por l. Lactis rk2 (prk119) y cnc2 (pcnc16) fue similar (95-100%) a la de p. Acidilactici 347. En consecuencia, se obtuvieron cepas de l. Lactis con la capacidad de coproducir pediocina pa-1 y nisina a niveles comparables a los de las respectivas cepas parentales. Finalmente, se construy\u00f3 otro pl\u00e1smido (pga1) para intentar la producci\u00f3n de pediocina pa-1 en los mismos hospedadores mediante un sistema de grado alimentario. El pl\u00e1smido pga1 tambi\u00e9n porta el oper\u00f3n completo de la pediocina bajo control del promotor p32 pero presenta la particularidad de carecer de genes que confieren resistencia a antibi\u00f3ticos. Una vez obtenidos los transformantes de l. Lactis esi 153 y l. Lactis esi 515 (l. Lactis ga1 y ga2, respectivamente), se evalu\u00f3 su eficacia para inhibir el crecimiento de listeria innocua sa1 durante la elaboraci\u00f3n de quesos. Los quesos se manufacturaron a partir de leche inoculada con un 1% de un cultivo l\u00e1ctico (l. Lactis esi 153, esi 515, ga1 \u00f3 ga2) con o sin la presencia de l. Innocua sa1 (~4 log ifc\/ml). Al final del per\u00edodo de maduraci\u00f3n, los recuentos de l. Innocua fueron inferiores a 50 ufc\/g en los quesos que conten\u00edan l. Lactis ga1 e inferiores a 25 ufc\/g en aquellos con l. Lactis ga2. En consecuencia, las cepas desarrolladas pueden resultar \u00fatiles como cultivos bioprotectores para controlar el crecimiento de listeria en quesos. por otra parte se investig\u00f3 si la leche materna conten\u00eda bacterias (bal) y, de hecho, se pudieron aislar de leche de ocho madres sanas y de heces de sus respectivos hijos. A continuaci\u00f3n, se seleccionaron al azar algunos aislados (178 de cada oveja madre-hijo) y se sometieron a una an\u00e1lisis de sus perfiles gen\u00e9ticos mediante la t\u00e9cnica rapd. De esta manera, se observ\u00f3 que ciertas cepas de lactobacillus gassen y enterococcus faecium se podr\u00edan aislar simult\u00e1neamente de las muestras de leche, areola mamaria, cavidad oral infantil y heces proporcionadas por una misma pareja madre-hijo. El siguiente objetivo fue la evaluaci\u00f3n de la seguridad de las cepas de e. Faecium aisladas de leche humana. Para ello, se investig\u00f3 la presencia de posibles factores determinantes de virulencia mediante las t\u00e9cnicas de pcr y de hibridaci\u00f3n dna-dna. El potencial de las cepas para adquirir pl\u00e1smidos mediante conjugaci\u00f3n se determin\u00f3 mediante el an\u00e1lisis de genes implicados en los procesos conjugativos de los enterococos. Paralelamente, se realizaron diversos ensayos fenot\u00edpicos de propiedades relacionadas con la seguridad de las cepas. La presencia de genes que confieren resistencia a la vancomicina se determin\u00f3 mediante pcr. Los resultados obtenidos revelaron que todas las cepas estaban libres de determinantes de virulencia. Ninguna de las cepas mostr\u00f3 actividad gelatinasa, producci\u00f3n de hemolisinas o capacidad de agregaci\u00f3n. Ninguna portaba los genes vana or vanb genes. Por lo tanto, la leche de mujeres sanas parece ser una fuente de cepas apat\u00f3genas de e. Faecium para el intestino del lactante. Finalmente, se investig\u00f3 las propiedades tecnol\u00f3gicas de estas cepas de e. Faecium aisladas de leche materna y se evalu\u00f3 su capacidad para inhibir el crecimiento de listeria durante la elaboraci\u00f3n de quesos. Su presencia condujo a unos niveles de listeria muy inferiores a los existentes en los quesos controles. En consecuencia, la leche humana es una fuente de enterococos con un gran potencial para ser empleados como cultivos bioprotectores por las empresas del sector l\u00e1cteo.<\/p>\n

 <\/p>\n

Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00abLactococcus lactis productores de pediocina pa-1 y enterococos aislados de leche materna como agentes bioconservantes en quesos<\/strong>\u00ab<\/h3>\n
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  • T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Lactococcus lactis productores de pediocina pa-1 y enterococos aislados de leche materna como agentes bioconservantes en quesos <\/li>\n
  • Autor:<\/strong>\u00a0 Carlota Reviriego Herraez <\/li>\n
  • Universidad:<\/strong>\u00a0 Complutense de Madrid<\/li>\n
  • Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 25\/04\/2008<\/li>\n<\/ul>\n

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    Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n
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    • Director de la tesis<\/strong>\n
        \n
      • Juan Miguel Rodr\u00edguez G\u00f3mez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n
      • Tribunal<\/strong>\n
          \n
        • Presidente del tribunal: lorenzo De la hoz perales <\/li>\n
        • margarita Medina fernandez-regatillo (vocal)<\/li>\n
        • gert n Moll (vocal)<\/li>\n
        • teresa Requena rolan\u00eda (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n

           <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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