{"id":64210,"date":"2018-03-09T22:52:11","date_gmt":"2018-03-09T22:52:11","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/cambios-epigeneticos-inducidos-por-el-envejecimiento-en-el-oocito-de-raton\/"},"modified":"2018-03-09T22:52:11","modified_gmt":"2018-03-09T22:52:11","slug":"cambios-epigeneticos-inducidos-por-el-envejecimiento-en-el-oocito-de-raton","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/genetica-animal\/cambios-epigeneticos-inducidos-por-el-envejecimiento-en-el-oocito-de-raton\/","title":{"rendered":"Cambios epigen\u00e9ticos inducidos por el envejecimiento en el oocito de rat\u00f3n"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Iris Mercedes Manosalva Pe\u00f1a <\/strong><\/h2>\n<p>En esta tesis se han estudiado algunas de las alteraciones causadas por la vejez en el gameto femenino de mam\u00edferos. La mayor\u00eda de los estudios sobre envejecimiento en oocitos se han realizado en condiciones in vitro, por ello aqu\u00ed se ha estudiado principalmente el efecto de la vejez natural. Se emple\u00f3 el rat\u00f3n como un modelo y se estudiaron los oocitos en los estadios de ves\u00edcula germinativa (vg) y metafase ii (mii), los cuales se  colectaron tanto de hembras j\u00f3venes (3-4 meses de edad) como de viejas (13-17 meses de edad). Los resultados mostraron que ocurren una serie de alteraciones en el patr\u00f3n de metilaci\u00f3n y acetilaci\u00f3n de las historias presentes en la comatina del oocito envejecido. Se observ\u00f3 una marcaci\u00f3n positiva en vg y mii de hembras j\u00f3venes cuando se emplearon anticuerpos que reconoc\u00edan metilaci\u00f3n de la historia h3 en la lys9 (h3k9me2, h3k9me3), lys4 (h3k4me2), lys36 (h3k36me2), lys79 (h3k79me2) y de la historia h4 en la lys20 (h4k20me). Sin embargo, vg viejas mostraron alteraciones en la metilaci\u00f3n de histonas. Estas alteraciones correspond\u00edan a una disminuci\u00f3n del porcentaje de vg metiladas en h3k9me3, h4k20me2, h3k36me2 y h3k79me2. Asimismo, se apreci\u00f3 una disminuci\u00f3n en los niveles de la metilaci\u00f3n en h3k9me2 y h3k4me2. Oocitos en mii viejos tambi\u00e9n mostraron una disminuci\u00f3n en el porcentaje de metilaci\u00f3n de las histonas h3k9me2, h3k9me3, h3k4me2, h4k20me2, h3k36me2  y h3k79me2. Por otra parte, vg j\u00f3venes la acetilaci\u00f3n de la histona h4 en la lys8 (h4k8ac), lys5(h4k5ac), lys12 (h4k12ac) y lys16 (h4k16ac) se observ\u00f3 en vg pero no apareci\u00f3 en mii. Mientras que vg viejas mostraron diferencias con respecto a las j\u00f3venes en los niveles de h4k8ac, h4k5ac, h4k12ac, h4k16ac y una ausencia en la acetilaci\u00f3n en h4k12ac y h4k16ac, mii viejos no mostraron mayores diferencias con los j\u00f3venes a excepci\u00f3n de la acetilaci\u00f3n en h4k12ac. En ves\u00edculas germinativas la cromatina presenta dos configuraciones (nsn y sn) que est\u00e1n relacionadas con una escasa o alta actividad g\u00e9nica. El an\u00e1lisis de los patrones epigen\u00e9ticos en estas dos configuraciones ha mostrado que entre ellas tambi\u00e9n aparecen diferencias. Debido a que detectemos alteraciones en las modificaciones de historias quisimos observar si estos cambios estaban relacionados con algunas prote\u00ednas espec\u00edficas. Para ello se eligi\u00f3 la sir2 relacionada con h4k16ac y la hp1 prote\u00edna relacionada con la  metilaci\u00f3n de histona h3 en la histona 9. En oocitos de hembras viejas se observ\u00f3 una disminuci\u00f3n de estas prote\u00ednas. Teniendo en cuenta que la acetilaci\u00f3n de la histona h4k12ac est\u00e1 asociada con la expresi\u00f3n de cdc2a durante la maduraci\u00f3n del oocito, analizamos la presencia de dicha prote\u00edna en los diferentes casos estudiados. Cdc2a es una prote\u00edna importante que participa en el reinicio de la meiosis. Empleando rt-pcr se observ\u00f3 que exist\u00eda un aumento en la expresi\u00f3n de cdc2a en vg viejas. Sin embargo, mediante inmunofluorescencia se observ\u00f3 que exist\u00eda una disminuci\u00f3n en los niveles de esta prote\u00edna, y una disminuci\u00f3n de la actividad kinasa de esta prote\u00edna. Dado que las condiciones de cultivo empleadas para los oocitos producen diversos cambios en el fameto, analizamos la incidencia de dicha condici\u00f3n. Se observ\u00f3 que oocitos viejos en cultivo presentaban un aumento de la acetilaci\u00f3n en mii y una disminuci\u00f3n de la prote\u00edna cdc2a. Teniendo en cuenta que la maquinaria de acetilaci\u00f3n est\u00e1 controlada por las deacetilasas, y ya que en vg de hembras viejas esta maquinaria se encuentra alterada, se inhibi\u00f3 la actividad de estas enzimas para conocer su participaci\u00f3n en esta alteraci\u00f3n. Los resultados mostraron que despu\u00e9s de la inhibici\u00f3n de deacetilasas, aparec\u00eda una acetilaci\u00f3n de h4k12ac tanto en oocitos j\u00f3venes como viejos. Adem\u00e1s, la prote\u00edna cdc2a aparec\u00eda aumentada en oocitos viejos. Empleando la inhibici\u00f3n de deacetilasas se pretendi\u00f3 revertir el efecto que tiene la vejez sobre la acetilaci\u00f3n de la historia h4 en la lisina 12 y sobre la presencia de  la prote\u00edna cdc2a. Al inhibir la deacetilaci\u00f3n por un per\u00edodo corto (1h), aparecieron oocitos viejos en mii deacetilados y con un incremento del porcentaje de cdc2a, al igual que ocurre normalmente en los oocitos j\u00f3venes. Esto mostr\u00f3 que, al menos en estos aspectos, se pod\u00eda revertir el envejecimiento. Teniendo en cuenta el papel importante que poseen las c\u00e9lulas del cumulus oophorus sobre la maduraci\u00f3n del oocito, se estudi\u00f3 el grado de apoptosis ocurrido en estas c\u00e9lulas en el caso de hembras viejas. Los resultados obtenidos mediante las t\u00e9cnicas empleadas mostraron que la vejez caus\u00f3 un mayor porcentaje (40%) de c\u00e9lulas del c\u00famulus en apoptosis. Los resultados obtenidos permiten concluir que el envejecimiento provoca una serie de alteraciones en algunos factores epigen\u00e9ticos de la cromatina del oocito en estadios de vg y mii. Adem\u00e1s, provoca una disminuci\u00f3n de la expresi\u00f3n de algunos genes, como el cdc2a que est\u00e1 relacionado con la acetilaci\u00f3n de h4k12ac. Por otro lado, se demostr\u00f3 que una inhibici\u00f3n de las deacetilasas puede revertir el efecto provocado por el envejecimiento. Las modificaciones observadas en la metilaci\u00f3n\/acetilaci\u00f3n de histonas sugieren probables modificaciones en la remodelaci\u00f3n de la cromatina por efecto del envejecimiento, lo cual podr\u00eda alterar ciertos genes que controlan la meiosis y podr\u00eda causar alteraciones en el estad\u00edo de mii.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Cambios epigen\u00e9ticos inducidos por el envejecimiento en el oocito de rat\u00f3n<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Cambios epigen\u00e9ticos inducidos por el envejecimiento en el oocito de rat\u00f3n <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Iris Mercedes Manosalva Pe\u00f1a <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Aut\u00f3noma de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 25\/04\/2008<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Pedro Esponda Fern\u00e1ndez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: jose Fernandez piqueras <\/li>\n<li>isabel Arenas jimenez (vocal)<\/li>\n<li>Francisco Javier Medina d\u00edaz (vocal)<\/li>\n<li>benito Fraile laiz (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Iris Mercedes Manosalva Pe\u00f1a En esta tesis se han estudiado algunas de las alteraciones causadas por la 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