{"id":64301,"date":"2018-03-09T22:52:19","date_gmt":"2018-03-09T22:52:19","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/analisis-del-sistema-de-glicosilacion-de-protea%c2%adnas-en-la-levadura-pichia-anomala\/"},"modified":"2018-03-09T22:52:19","modified_gmt":"2018-03-09T22:52:19","slug":"analisis-del-sistema-de-glicosilacion-de-protea%c2%adnas-en-la-levadura-pichia-anomala","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/la-laguna\/analisis-del-sistema-de-glicosilacion-de-protea%c2%adnas-en-la-levadura-pichia-anomala\/","title":{"rendered":"An\u00e1lisis del sistema de glicosilaci\u00f3n de prote\u00ednas en la levadura pichia anomala"},"content":{"rendered":"

Tesis doctoral de Fernando Guti\u00e9rrez Nicol\u00e1s <\/strong><\/h2>\n

El objetivo general de este trabajo consist\u00eda en obtener datos que permitieran avanzar en el conocimiento de los factores que determinan el patr\u00f3n de glicosilaci\u00f3n de las glicoprote\u00ednas sintetizadas y secretadas por levaduras, especialmente en lo referente al grado de elongaci\u00f3n de las cadenas externas de los oligosac\u00e1ridos unidos a prote\u00ednas por enlaces n-glicos\u00eddicos. B\u00e1sicamente se trataba de obtener informaci\u00f3n que ayudara a comprender las razones por las que algunas prote\u00ednas producidas por levaduras, (en particular, las sintetizadas por s. Cerevisiae) se hiperglicosilan, con oligosac\u00e1ridos formados por m\u00e1s de 50 unidades de az\u00facar, mientras que otras (sobre todo, las producidas por especies pertenecientes a otros g\u00e9neros) s\u00f3lo reciben oligosac\u00e1ridos de cadena corta, y por qu\u00e9 otras razones, dentro de una misma prote\u00edna, en algunos oligosac\u00e1ridos se produce la elongaci\u00f3n de la cadena externa mientras que en otros no tiene lugar esta modificaci\u00f3n. Esta cuesti\u00f3n resulta de gran relevancia, no s\u00f3lo desde el punto de vista biol\u00f3gico b\u00e1sico sino, especialmente, en lo que se refiere al empleo de las levaduras como sistema para la producci\u00f3n de glicoprote\u00ednas combinantes, dados los inconvenientes que para su empleo como f\u00e1rmacos de uso humano tienen las prote\u00ednas hiperglicosiladas. trabajos realizados previamente sobre la invertasa de p. Anomala y sobre el gen painv1 que la codifica, y en particular los dedicados a la caracterizaci\u00f3n de la enzima heter\u00f3loga producida a partir de este gen cuando es introducido por transformaci\u00f3n en s. Cerevisiae llevaron a considerar que p. Anomala, y su invertasa, podr\u00edan constituir un buen modelo para el estudio de las cuestiones antes referidas. el hecho de que la expresi\u00f3n del gen painv1 en un mutante suc2 de s. Cerevisiae diera lugar a la producci\u00f3n por los transformantes de dos formas activas de invertasa hipoglicosiladas, con un grado de glicosilaci\u00f3n incluso menor que el que presenta la enzima producida en su ambiente natural, en las c\u00e9lulas p. Anomala, junto a la tendencia de s. Cerevisiae para hiperglicosilar las prote\u00ednas que en ella se expresas a partir de genes heter\u00f3logos llev\u00f3 a pensar en la posibilidad de que, al menos en el caso de la invertasa de p. Anomala, el patr\u00f3n de glicosilaci\u00f3n estuviera determinado por la estructura primaria de la prote\u00edna, de tal modo que esta secuencia contendr\u00eda una informaci\u00f3n que s\u00f3lo permitir\u00eda construir oligosac\u00e1ridos de cadena corta al sistema enzim\u00e1tico encargado de la n-glicosilaci\u00f3n. cuando se comparan las secuencias de amino\u00e1cidos de inv1p y suc2p se encuentra que uno de los secuones que sufren hiperglicosilaci\u00f3n en suc2p se encuentra conservado en inv1p, este hecho junto con el alto grado de homolog\u00eda de ambas prote\u00ednas hacen plantearse. \u00c2\u00bfpor qu\u00e9 la maquinaria de glicosilaci\u00f3n de s. Cerevisiae no consigue tambi\u00e9n a\u00f1adir un oligosac\u00e1rido de cadena larga en este secu\u00f3n equivalente. Se consider\u00f3 la posibilidad de que la configuraci\u00f3n del secu\u00f3n en la invertasa de p. Anomala fuera el factor que determinase una accesibilidad limitada para las enzimas que forman el sistema de glicosilaci\u00f3n de s. Cerevisiae y, para comprobarlo, se modific\u00f3, mediante mutag\u00e9nesis dirigida, la secuencia del secu\u00f3n de la asn1 43 y la de su entorno inmediato, en el gen painv1, hasta hacerla id\u00e9ntica a la secuencia equivalente en el gen suc2. Con estos cambios no se consigui\u00f3 modificar sustancialmente el tama\u00f1o del oligosac\u00e1rido que se une a este secu\u00f3n en la invertasa heter\u00f3loga, producida por los transformantes de s. Cerevisiae portadores de la versi\u00f3n modificada del gen painv1. Sin embargo, cuando se modific\u00f3 la ser144 (un amino\u00e1cido polar sin carga), situado en posici\u00f3n +2 del secu\u00f3n de n-glicosilaci\u00f3n, por un amino\u00e1cido con carga positiva, tal como la lisina o la histidina se produjo un alargamiento del oligosac\u00e1rido unido a la esparragina adyacente en un n\u00famero de manosas suficiente para considerar a este secu\u00f3n como hiperglicosilado, mientras que su sustituci\u00f3n por un residuo ani\u00f3nico (\u00e1cido glut\u00e1mico) o por uno apolar arom\u00e1tico (fenilalanina) no favorece la hiperglicosilaci\u00f3n. La conclusi\u00f3n general que se obtiene de estos resultados es que el alargamiento de la cadena externa de manosas probablemente est\u00e1 sujeto a limitaciones esf\u00e9ricas impuestas por la orientaci\u00f3n del n\u00facleo interno del oligosac\u00e1rido. Sin embargo que los miembros del g\u00e9nero pichia, no sean capaces de hiperglicosilar prote\u00ednas, no puede explicarse con esta hip\u00f3tesis. La explicaci\u00f3n a este fen\u00f3meno no s\u00f3lo podr\u00e1 comprobarse cuando se haya logrado llevar a cabo la caracterizaci\u00f3n de los componentes de la maquinaria enzim\u00e1tica encargada de completar la etapa del proceso de glicosilaci\u00f3n que tiene lugar en el aparato de golgi. En la presente tesis se ha iniciado el estudio del sistema enzim\u00e1tico que realiza esta funci\u00f3n en p. Anomala comprob\u00e1ndose que, en esta levadura, existen los ort\u00f3logos de los genes och1, mnn9 y van1. Los resultados han permitido comprobar que el gen pamnn9 es capaz de complementar eficazmente una mutaci\u00f3n que inactiva el gen ort\u00f3logo de s. Cerevisiae y que su deleci\u00f3n en p. Anomala hace que esta levadura adquiera un fenotipo similar al de los mutantes mnn9 de s. Cerevisiae y que a\u00f1ada oligosac\u00e1ridos a\u00fan m\u00e1s cortos de lo normal a su propia invertasa, todo lo cual parece indicar que la enzima pamnn9p puede funcionar de igual modo que su hom\u00f3loga en s. Cerevisiae (ballou et al., 1991; dean, 1995). Resultados similares se han obtenido respecto al gen paavn1, del que tambi\u00e9n se ha comprobado que es capaz de complementar de modo eficiente el fenotipo pleiotr\u00f3pico producido por una mutaci\u00f3n van1 en s. Cerevisiae y que el silenciamiento de su expresi\u00f3n en p. Anomala (mediante un rna de interferencia) tambi\u00e9n provoca en esta levadura un fenotipo similar. Estos datos parecen indicar que las actividades de las manosiltransferasas de la parte cis del golgi son similares a las de s. Cerevisiae, con lo que habr\u00e1 que continuar con el an\u00e1lisis de todas las prote\u00ednas que participan en este proceso.<\/p>\n

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Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00abAn\u00e1lisis del sistema de glicosilaci\u00f3n de prote\u00ednas en la levadura pichia anomala<\/strong>\u00ab<\/h3>\n
    \n
  • T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 An\u00e1lisis del sistema de glicosilaci\u00f3n de prote\u00ednas en la levadura pichia anomala <\/li>\n
  • Autor:<\/strong>\u00a0 Fernando Guti\u00e9rrez Nicol\u00e1s <\/li>\n
  • Universidad:<\/strong>\u00a0 La laguna<\/li>\n
  • Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 29\/04\/2008<\/li>\n<\/ul>\n

     <\/p>\n

    Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n
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    • Director de la tesis<\/strong>\n
        \n
      • Luis Rodr\u00edguez Dom\u00ednguez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n
      • Tribunal<\/strong>\n
          \n
        • Presidente del tribunal: tom\u00e1s Gonz\u00e1lez villa <\/li>\n
        • encarnaci\u00f3n Andaluz l\u00f3pez (vocal)<\/li>\n
        • Jos\u00e9 m. Siverio exp\u00f3sito (vocal)<\/li>\n
        • f\u00e9lix Claverie mart\u00edn (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n

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