{"id":64434,"date":"2008-09-05T00:00:00","date_gmt":"2008-09-05T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/expresion-en-sistemas-heterologos-de-una-rhbmp-2-modificada-con-un-dominio-de-afinidad-por-el-colageno-tipo-i-para-su-posible-uso-en-medicina-regenerativa\/"},"modified":"2008-09-05T00:00:00","modified_gmt":"2008-09-05T00:00:00","slug":"expresion-en-sistemas-heterologos-de-una-rhbmp-2-modificada-con-un-dominio-de-afinidad-por-el-colageno-tipo-i-para-su-posible-uso-en-medicina-regenerativa","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica\/expresion-en-sistemas-heterologos-de-una-rhbmp-2-modificada-con-un-dominio-de-afinidad-por-el-colageno-tipo-i-para-su-posible-uso-en-medicina-regenerativa\/","title":{"rendered":"Expresion en sistemas heterologos de una rhbmp-2 modificada con un dominio de afinidad por el colageno tipo i para su posible uso en medicina regenerativa"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Pilar Mar\u00eda Arrabal Garcia <\/strong><\/h2>\n<p>En la presente tesis se han utilizado dos sistemas de expresi\u00f3n de prote\u00ednas para realizar la producci\u00f3n de una de las llamadas \u00abprote\u00ednas morfog\u00e9nicas del organismo\u00bb. Se trata de factores de crecimientos que ejercen m\u00faltiples funciones en el organismo desde el desarrollo del embri\u00f3n hasta procesos regenerativos en el adulto. La importancia de estas prote\u00ednas se debe a su potencial uso terap\u00e9utico en la cl\u00ednica humana para favorecer fen\u00f3menos de regeneraci\u00f3n. Dado que se trata de prote\u00ednas homodim\u00e9ricas que contienen varios puentes disulfuro y cadenas gluc\u00eddicas, para obtener las prote\u00ednas en condiciones m\u00e1s parecidas a la prote\u00edna humana hemos utilizado el sistema de expresi\u00f3n de c\u00e9lulas de insecto sf9 transfectadas con baculovirus. El gran inter\u00e9s que ha despertado el uso de los baculovirus como vectores para la expresi\u00f3n de prote\u00ednas recombinantes en c\u00e9lulas de insecto, se debe a que estas c\u00e9lulas proveen de un ambiente eucariota propicio para que ocurra un plegamiento correcto de la prote\u00edna, realizando modificaciones post-traduccionales tales como fosforilaciones, n- y o-glucosilaciones, formaci\u00f3n de puentes disulfuro, etc., De manera muy parecida a las c\u00e9lulas de mam\u00edfero. Por todo ello la obtenci\u00f3n de mol\u00e9culas biol\u00f3gicamente activas implica menor manipulaci\u00f3n que los sistemas de expresi\u00f3n en bacterias o levaduras y las cantidades que se obtienen, por lo general, son mayores que las obtenidas en sistemas de expresi\u00f3n de mam\u00edferos. A pesar de todas estas ventajas y de la obtenci\u00f3n de una forma dim\u00e9rica de la prote\u00edna cuyo peso molecular coincide con el esperado la primera conclusi\u00f3n obtenida es que \u00abla expresi\u00f3n heter\u00f3loga de estas prote\u00ednas mediante el sistema de expresi\u00f3n de c\u00e9lulas de insecto sf9 transfectadas con baculovirus, no parece ser viable bajo las condiciones utilizadas en este trabajo; el pl\u00e1smido que aporta el p\u00e9ptido se\u00f1al o el uso del promotor tard\u00edo de la poliedrina provocan cambios en la estructura proteica de tal importancia, que el producto resultante carece de la actividad biol\u00f3gica esperada\u00bb. a tenor de lo poco efectiva que result\u00f3 la expresi\u00f3n de las prote\u00ednas de inter\u00e9s en el sistema eucari\u00f3tico de c\u00e9lulas de insecto decidimos producir las prote\u00ednas recombinantes en un sistema de expresi\u00f3n procariota m\u00e1s simple que no realiza modificaciones post-traduccionales como es el de e. Coli, aunque ello implicara mayor manipulaci\u00f3n de las prote\u00ednas in vitro para conseguir su correcto plegamiento y lograr que sean activas biol\u00f3gicamente; en este caso podemos concluir que \u00abel sistema de expresi\u00f3n de e. Coli, produce de forma eficiente las prote\u00ednas objeto de nuestro inter\u00e9s. El m\u00e9todo de replegamiento y purificaci\u00f3n descritos por otros autores para otras prote\u00ednas de semejante naturaleza, es igualmente efectivo para la producci\u00f3n de nuestras prote\u00ednas\u00bb. por \u00faltimo se realizaron ensayos de actividad biol\u00f3gica in vitro e in vivo para comprobar la actividad morf\u00f3gena de estas prote\u00ednas permiti\u00e9ndonos concluir que \u00ablas prote\u00ednas producidas en el sistema de expresi\u00f3n de e. Coli, presentan actividad biol\u00f3gica comparable, in vitro, a las prote\u00ednas producidas en c\u00e9lulas de mam\u00edferos cho; y la actividad biol\u00f3gica in vivo se ve sensiblemente aumentada, por lo que se trata de un buen candidato para su uso terap\u00e9utico\u00bb.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Expresion en sistemas heterologos de una rhbmp-2 modificada con un dominio de afinidad por el colageno tipo i para su posible uso en medicina regenerativa<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Expresion en sistemas heterologos de una rhbmp-2 modificada con un dominio de afinidad por el colageno tipo i para su posible uso en medicina regenerativa <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Pilar Mar\u00eda Arrabal Garcia <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 M\u00e1laga<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 09\/05\/2008<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Manuel Cifuentes Rueda<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Jos\u00e9 manuel Fernandez-figares perez <\/li>\n<li>Jos\u00e9 Luis Peris serra (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda  aranzazu Diaz cuenca (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda  angeles Del brio leon (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Pilar Mar\u00eda Arrabal Garcia En la presente tesis se han utilizado dos sistemas de expresi\u00f3n de prote\u00ednas 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