{"id":64697,"date":"2018-03-09T22:52:44","date_gmt":"2018-03-09T22:52:44","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-de-la-respuesta-celular-a-sok-1-y-mecanismos-de-regulacion\/"},"modified":"2018-03-09T22:52:44","modified_gmt":"2018-03-09T22:52:44","slug":"estudio-de-la-respuesta-celular-a-sok-1-y-mecanismos-de-regulacion","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/fisiologia-humana\/estudio-de-la-respuesta-celular-a-sok-1-y-mecanismos-de-regulacion\/","title":{"rendered":"Estudio de la respuesta celular a sok 1 y mecanismos de regulacion"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Emilio Jose Nogueira Paz <\/strong><\/h2>\n<p>Sok1 (ste20\/oxidant stress response kinase) es una proteina kinasa que fue descrita por primera vez por dos grupos de investigaci\u00f3n independientes (pombo et al, 1996 y osada et al, 1997). Forma parte del grupo de prote\u00ednas ste20 de mam\u00edferos, que se caracterizan por ser hom\u00f3logas a ste20p de levaduras. Tras su descripci\u00f3n de comprob\u00f3 que no activa ninguna de las rutas de las mapk hasta ahora descritas, caracter\u00edstica que si presenta ste20p, y que tambi\u00e9n conservan algunos de los hom\u00f3logas de mam\u00edferos. Las quinasas ste20 se dividen en dos familias, la familia pak y la familia gck. Los miembros de la subfamilias gck-ii (mst1 y mst2) y gck-iii (mst3, mst4 y sok1) presentan una alta homolog\u00eda, y parece que comparten determinadas funciones, por eso a veces se re\u00fanen bajo el t\u00e9rmino de quinasas mst. Est\u00e1 constituida por 426 amino\u00e1cidos, que le otorgan un peso de 48kda y estructuralmente se diferencian en ella un dominio regulador c-terminal y un dominio catal\u00edtica n-terminal. Fue la primera ste20 cuya activaci\u00f3n se comprob\u00f3 que se produce en respuesta a estr\u00e9s celular espec\u00edfico, concretamente en respuesta a estr\u00e9s oxidativo. Este hecho, junto con algunos estudios preliminares, que parec\u00edan indicar que su sobreexpresi\u00f3n provocaba la muerte en la l\u00ednea celular nih3t3 hizo pensar que pod\u00eda estar implicada en alguna ruta que regule la supervivencia de la c\u00e9lula en respuesta a este tipo de estr\u00e9s. \testudios posteriores (preisinger et al, 2004) otorgan a sok1 un papel en el mantenimiento de la estructura del aparato de golgi, org\u00e1nulo en el que se localiza, y en procesos relacionados con la migraci\u00f3n celular, funciones en las que tambi\u00e9n est\u00e1n implicadas las prote\u00ednas gm-130 y 14-3-3\u00c2\u00bf. \ten este trabajo de investigaci\u00f3n, se demuestra que sok1 est\u00e1 implicada o participa en la regulaci\u00f3n de procesos relacionados con la viabilidad celular. Demostramos que su sobreexpresi\u00f3n en diferentes l\u00edneas celulares provoca un aumento de la muerte en todas las l\u00edneas estudiadas (hek293, hela, saos2 y cos7). Esta muerte es directamente proporcional tanto a la cantidad de prote\u00edna sobreexpresada como al tiempo transcurrido posterior a la sobreexpresi\u00f3n. Aunque ser\u00e1n necesarios m\u00e1s estudios para discernir completamente la ruta que conduce a la muerte de las c\u00e9lulas, despu\u00e9s de estudiar algunos aspectos tanto morfol\u00f3gicos como bioqu\u00edmicos de las c\u00e9lulas en las que se sobreexpresa sok1, podemos decir que esta muerte se parece m\u00e1s a la apoptosis que a la necrosis. Esto lo ponen de manifiesto hechos como la formaci\u00f3n de yemas en la membrana celular, la condensaci\u00f3n de la cromatina, el aumento de la cantidad de citocromo c presente en el citoplasma, la necesidad de la actividad de las caspasas para que la muerte pueda producirse, la inactivaci\u00f3n por proteolisis de la prote\u00edna parp y el hecho de que sok1 traducida in vitro es un sustrato de la caspasa 3. \tverificamos en este trabajo que tanto la sobreexpresi\u00f3n del dominio regulador c-terminal como del dominio catal\u00edtico n-terminal por separado provocan muerte en ambos casos, aunque en menor medida en el caso del dominio c-terminal. Determinamos tambi\u00e9n en este estudio que la capacidad de activaci\u00f3n de la prote\u00edna sobreexpresada es independiente de su capacidad para inducir muerte celular. Para esto construimos varios mutantes de sok1 utilizando t\u00e9cnicas de mutag\u00e9nesis dirigida. Utilizando la misma t\u00e9cnica, determinamos que s\u00ed que es necesario para que la sobreexpresi\u00f3n de sok1 induzca muerte celular que se encuentre intacta una secuencia de amino\u00e1cidos hom\u00f3loga a la que se ha caracterizado como se\u00f1al de localizaci\u00f3n nuclear en mst1. \ten este trabajo demostramos que la implicaci\u00f3n de sok1 en procesos que regulan la viabilidad celular es un efecto fisiol\u00f3gico de la quinasa y no una consecuencia inespec\u00edfica de su sobreexpresi\u00f3n. Esto lo verifica con el hecho de que c\u00e9lulas donde los niveles de sok1 se reducen mediante sharn son m\u00e1s resistentes a la muerte celular. Estas c\u00e9lulas son m\u00e1s resistentes al tipo de est\u00edmulo que activa a sok1, concretamente a anoxia qu\u00edmica, un modelo reproducido in vitro mediante tratamiento de las c\u00e9lulas con cianuro y 2-deoxiglucosa, y que es equivalente a la isquemia que sufren los tejidos de un determinado organismo cuando se ven privados de aporte sangu\u00edneo. \tdemostramos tambi\u00e9n que sok1 se activa en respuesta a tratamientos largos con estr\u00e9s osm\u00f3tico, y que la disminuci\u00f3n de los niveles end\u00f3gemos de la quinasa tambi\u00e9n disminuye la muerte celular en respuesta a este tipo de estr\u00e9s. \testudios previos a este trabajo, utilizaron un sistema de doble h\u00edbrido para intentar encontrar prote\u00ednas que interaccionen con sok1. De todos las que en principio parec\u00edan hacerlo, hab\u00eda una, que denominamos sint-5 (mettl2a), que guarda alta homolog\u00eda con metiltransferasas. \ten este trabajo clonamos la orf de esa prote\u00edna en un vector de expresi\u00f3n de eucariotas y demostramos que interacciona con sok1, concretamente con su dominio catal\u00edtico n-terminal. Demostramos adem\u00e1s que esta interacci\u00f3n disminuye la actividad quinasa de sok1. Por otro lado, tambi\u00e9n comprobamos que la sobreexpresi\u00f3n de sint-5 provoca alg\u00fan tipo de modificaci\u00f3n en sok1 que retrasa su migraci\u00f3n en geles de poliacrilamida. Aunque ser\u00e1n necesarios m\u00e1s estudios, los experimentos realizados en este trabajo, parecen indicar que la sobreexpresi\u00f3n de sint-5 en la c\u00e9lula reduce la muerte celular inducida por sok1. \tpodemos por lo tanto decir, que en este trabajo de investigaci\u00f3n se demuestra la implicaci\u00f3n de sok1 en la regulaci\u00f3n de aspectos relacionados con la muerte celular con caracter\u00edsticas apopt\u00f3ticas en respuesta a estr\u00e9s oxidativo y radicales libres, aunque ser\u00e1n necesarios m\u00e1s estudios para establecer concretamente la ruta bioqu\u00edmica responsable es este proceso. Una funci\u00f3n similar se ha descrito para otras prote\u00ednas mst, muy pr\u00f3ximas filogen\u00e9ticamente a sok1. Est\u00e1 demostrado para algunos casos, aunque ser\u00e1n necesarios m\u00e1s estudios para verificar que esta posible redundancia funcional se justifica en base a los diferentes niveles de expresi\u00f3n de cada una de las prote\u00ednas en diferentes \u00f3rganos o tejidos y en los diferentes niveles de expresi\u00f3n a lo largo del desarrollo de un organismo. Otra diferencia que parece ser fundamental entre las distintas prote\u00ednas del grupo es el tipo de est\u00edmulo fisiol\u00f3gico que provoca su activaci\u00f3n. \tpor otro lado, demostramos la interacci\u00f3n de sok1 con sint-5, una prote\u00edna hom\u00f3loga a metiltransferasas, y cuya sobreexpresi\u00f3n parece disminuir la capacidad de sok1 para inducir muerte. Ser\u00e1n necesarios m\u00e1s estudios para poner de manifiesto si existen formas de modulaci\u00f3n de la actividad o la funci\u00f3n de este tipo de quinasas mediante interacci\u00f3n con metiltransferasas.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio de la respuesta celular a sok 1 y mecanismos de regulacion<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio de la respuesta celular a sok 1 y mecanismos de regulacion <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Emilio Jose Nogueira Paz <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Santiago de compostela<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 23\/05\/2008<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Celia Mar\u00eda Pombo Ramos<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Jes\u00fas Antonio Casabiell pintos <\/li>\n<li>Elena Hidalgo hernando (vocal)<\/li>\n<li>pedro Crespo baraja (vocal)<\/li>\n<li>m. luz Barreiro arca (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Emilio Jose Nogueira Paz Sok1 (ste20\/oxidant stress response kinase) es una proteina kinasa que fue descrita por [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center 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