{"id":66532,"date":"2018-03-09T22:54:52","date_gmt":"2018-03-09T22:54:52","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-de-la-capacitacion-in-vitro-de-espermatozoides-epididimarios-y-eyaculados-en-la-especie-porcina\/"},"modified":"2018-03-09T22:54:52","modified_gmt":"2018-03-09T22:54:52","slug":"estudio-de-la-capacitacion-in-vitro-de-espermatozoides-epididimarios-y-eyaculados-en-la-especie-porcina","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/fisiologia-de-la-reproduccion\/estudio-de-la-capacitacion-in-vitro-de-espermatozoides-epididimarios-y-eyaculados-en-la-especie-porcina\/","title":{"rendered":"Estudio de la capacitaci\u00f3n in vitro de espermatozoides epididimarios y eyaculados en la especie porcina"},"content":{"rendered":"

Tesis doctoral de Manuel Sansegundo Gonzalez <\/strong><\/h2>\n

La capacitaci\u00f3n esperm\u00e1tica puede ser mimetizada in vitro eliminando el plasma seminal por distintos sistemas de lavado y\/o incubando a los espermatozoides en medios de composici\u00f3n comparable a la del fluido oviductal. Entre los tratamientos esperm\u00e1ticos empleados habitualmente en los laboratorios para capacitar a los espermatozoides se encuentran los lavados que se realizan con medios enriquecidos con alb\u00famina o a trav\u00e9s de gradientes de percoll . No obstante, los resultados de fecundaci\u00f3n in vitro entre laboratorios son muy heterog\u00e9neos. La explicaci\u00f3n a esta variabilidad la podr\u00edamos encontrar en el sistema de capacitaci\u00f3n empleado o bien el tipo de espermatozoide con el que se trabaja. aunque en la mayor\u00eda de los casos, el medio de capacitaci\u00f3n contiene sustratos energ\u00e9ticos (piruvato, lactato, glucosa), un aceptor de colesterol (alb\u00famina), hco3- y ca2+, adem\u00e1s de determinados electrolitos; el mecanismo por el cual estos componentes promueven la capacitaci\u00f3n sigue siendo motivo de estudio y su efecto sobre los espermatozoides tambi\u00e9n var\u00eda seg\u00fan el origen de \u00e9stos o seg\u00fan el tratamiento al que se les somete para capacitarlos previamente. Parte del proceso de capacitaci\u00f3n ha podido ser ya identificado, as\u00ed, se ha determinado una correlaci\u00f3n entre la capacitaci\u00f3n y la salida de colesterol de la membrana plasm\u00e1tica, lo que conlleva un incremento en la fluidez de la membrana, una modificaci\u00f3n en la concentraci\u00f3n de iones y una hiperpolarizaci\u00f3n de la membrana. Todo ello es necesario para que se produzca la hiperactivaci\u00f3n y finalmente la reacci\u00f3n acros\u00f3mica. el objetivo de este trabajo ha sido determinar los cambios que acontecen en los espermatozoides (procedentes de epid\u00eddimo y eyaculados) sometidos a tres sistemas de capacitaci\u00f3n in vitro evaluados mediante una bater\u00eda de t\u00e9cnicas que determinan distintos estadios de la capacitaci\u00f3n esperm\u00e1tica. los espermatozoides de epid\u00eddimo proced\u00edan de test\u00edculos de animales sacrificados en matadero, solamente se utilizaron los espermatozoides procedentes de la cola del epid\u00eddimo. Los espermatozoides eyaculados se obtuvieron a partir de verracos de fertilidad probada. Se realizaron tres tratamientos de capacitaci\u00f3n: 1) espermatozoides no lavados (nl). 2) espermatozoides lavados en medio pbs con un 0.3% de bsa (pbs-bsa). 3) espermatozoides lavados a trav\u00e9s de un gradiente de percoll , 45\/75% y 45\/90% v\/v para espermatozoides epididimarios y eyaculados, respectivamente (percoll). posteriormente, los espermatozoides de los tres grupos experimentales se resuspendieron en el medio de fecundaci\u00f3n talp. para la determinaci\u00f3n de la capacitaci\u00f3n esperm\u00e1tica utilizamos la medici\u00f3n de los siguientes par\u00e1metros: – par\u00e1metros de motilidad esperm\u00e1tica determinada por an\u00e1lisis computerizado de im\u00e1genes (casa). – incremento de los niveles de ca2+ evaluado mediante espectrofluorometr\u00eda, utilizando el fluorocromo fura2-am. – producci\u00f3n de especies reactivas de ox\u00edgeno (ros) en espermatozoides marcados con h2dcfda y evaluados mediante citometr\u00eda de flujo. – desorden lip\u00eddico de membrana plasm\u00e1tica evaluado mediante citometr\u00eda de flujo con merocianina 540 (m540) y yo-pro1. – reacci\u00f3n acros\u00f3mica, evaluada mediante citometr\u00eda de flujo utilizando ioduro de propidio (ip) y lectina pna. – penetraci\u00f3n in vitro hom\u00f3loga con ovocitos madurados in vitro cocultivados durante 2 y 4 horas. en lo referente a la motilidad, encontramos que el tratamiento de los espermatozoides y la incubaci\u00f3n de los mismos en el medio talp inducen un incremento significativo en todos los par\u00e1metros de motilidad estudiados comparados con el grupo control. En cuanto al efecto que tuvo sobre ellos el tratamiento esperm\u00e1tico, se observ\u00f3 que el grupo nl mostr\u00f3 un porcentaje de motilidad superior al grupo pbs-bsa. Esta diferencia en la motilidad total no fue determinada en el porcentaje de motilidad progresiva. Por otra parte, se observaron diferencias en el patr\u00f3n de movimiento. El grupo percoll\u00c2\u00bf present\u00f3 un patr\u00f3n distinto a los otros dos tratamientos, con menor velocidad curvilinea (vcl) y menor amplitud lateral de cabeza (alh) pero mayor linealidad (lin) y rectitud (str). Al evaluar el efecto del tratamiento esperm\u00e1tico sobre los espermatozoides epididimarios y eyaculados sobre los distintos par\u00e1metros de motilidad, observamos que en t\u00e9rminos generales los espermatozoides epididimarios mostraron mayor motilidad (total y progresiva), mayores velocidades (vcl, vsl y vap) y menor alh que los eyaculados. el nivel de ca2+ intracelular se increment\u00f3 en todos los grupos durante el tiempo de incubaci\u00f3n del estudio. En t\u00e9rminos generales, la concentraci\u00f3n media en espermatozoides eyaculados fue superior a la de espermatozoides de epid\u00eddimo (472.27 nm vs. 101.84 nm), y los espermatozoides lavados con pbs-bsa o bien con percoll fueron los que presentaron los niveles m\u00e1s altos de ca2+ (660.42 nm vs. 604.12 nm). La cin\u00e9tica de entrada de ca2+ a lo largo del tiempo fue similar para todos los verracos y para los espermatozoides procedentes de los diferentes epid\u00eddimos utilizados en el estudio. la producci\u00f3n de ros fue increment\u00e1ndose a lo largo del tiempo de incubaci\u00f3n y estuvo afectada por el tratamiento esperm\u00e1tico y por el origen de los espermatozoides. Los espermatozoides eyaculados produjeron la mayor cantidad de ros, y dentro de \u00e9stos, los lavados con percoll . el desorden lip\u00eddico de la membrana plasm\u00e1tica de los espermatozoides estudiados estuvo afectado tanto por el origen de los espermatozoides como por el tratamiento de capacitaci\u00f3n empleado. Los espermatozoides eyaculados presentaron un mayor porcentaje de c\u00e9lulas viables y mayor desorden lip\u00eddico al inicio de la medici\u00f3n (tiempo = 0). Al finalizar el estudio (135 min) observamos que los espermatozoides de epid\u00eddimo presentaban menor desorden lip\u00eddico y mayor viabilidad que los espermatozoides eyaculados. El tratamiento con pbs-bsa supuso una reducci\u00f3n de la viabilidad esperm\u00e1tica en comparaci\u00f3n con el resto de grupos. la reacci\u00f3n acros\u00f3mica se vio influenciada tanto por el tratamiento como por el origen de los espermatozoides, de manera que el mayor porcentaje de reaccionados se obtuvo en espermatozoides eyaculados, y dentro de \u00e9stos, en los que hab\u00edan sido lavados con bsa. los resultados de penetraci\u00f3n in vitro se vieron afectados tanto por el origen esperm\u00e1tico como por el tratamiento al que fueron sometidos los espermatozoides. A las 2 horas de cocultivo la penetraci\u00f3n esperm\u00e1tica fue significativamente superior cuando los espermatozoides eyaculados hab\u00edan sido lavados a trav\u00e9s de un gradiente de percoll , siendo similar para el resto de grupos. Cuando se dejaron transcurrir 4 horas de cocultivo, los resultados de penetraci\u00f3n de espermatozoides epididimarios fueron muy superiores a los eyaculados, salvo para el caso del tratamiento percoll . Adem\u00e1s, el mayor n\u00famero de espermatozoides por ovocito se obtuvo con espermatozoides eyaculados lavados a trav\u00e9s de un gradiente de percoll . de los resultados obtenidos se desprende que tanto la procedencia de los espermatozoides (epid\u00eddimo o eyaculado) como el tratamiento de capacitaci\u00f3n al que se les somete afecta en gran medida a los resultados de la penetraci\u00f3n in vitro y por lo tanto, la capacitaci\u00f3n se produce de manera diferente entre estos grupos, como se ve reflejado en los distintos par\u00e1metros estudiados. No obstante, todos estos par\u00e1metros a pesar de que han sido descritos como herramientas para evaluar la capacitaci\u00f3n, realmente no son capaces de discriminar o indicar el grado de capacitaci\u00f3n en el que se encuentran los espermatozoides, por lo que no los consideramos realmente \u00fatiles para estandarizar o predecir los resultados de fiv. Sin embargo, si que podemos afirmar que los espermatozoides eyaculados y lavados a trav\u00e9s de un gradiente de percoll presentan un mayor grado de capacitaci\u00f3n que el resto de grupos, hecho que se ve avalado por la rapidez con que estos espermatozoides son capaces de penetrar a los ovocitos.<\/p>\n

 <\/p>\n

Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00abEstudio de la capacitaci\u00f3n in vitro de espermatozoides epididimarios y eyaculados en la especie porcina<\/strong>\u00ab<\/h3>\n
    \n
  • T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio de la capacitaci\u00f3n in vitro de espermatozoides epididimarios y eyaculados en la especie porcina <\/li>\n
  • Autor:<\/strong>\u00a0 Manuel Sansegundo Gonzalez <\/li>\n
  • Universidad:<\/strong>\u00a0 Murcia<\/li>\n
  • Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 21\/07\/2008<\/li>\n<\/ul>\n

     <\/p>\n

    Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n
      \n
    • Director de la tesis<\/strong>\n
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      • Carmen Matas Parra<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n
      • Tribunal<\/strong>\n
          \n
        • Presidente del tribunal: gin\u00e9s Salido ruiz <\/li>\n
        • noemi teresa Marin atucha (vocal)<\/li>\n
        • Antonio Gonz\u00e1lez mateos (vocal)<\/li>\n
        • ra\u00fal S\u00e1nchez s\u00e1nchez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n

           <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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