{"id":67015,"date":"2018-03-09T22:55:22","date_gmt":"2018-03-09T22:55:22","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-de-las-bases-estructurales-y-enzimaticas-del-mecanismo-de-transduccion-de-senal-mediado-por-sistemas-de-dos-componentes\/"},"modified":"2018-03-09T22:55:22","modified_gmt":"2018-03-09T22:55:22","slug":"estudio-de-las-bases-estructurales-y-enzimaticas-del-mecanismo-de-transduccion-de-senal-mediado-por-sistemas-de-dos-componentes","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-de-las-bases-estructurales-y-enzimaticas-del-mecanismo-de-transduccion-de-senal-mediado-por-sistemas-de-dos-componentes\/","title":{"rendered":"Estudio de las bases estructurales y enzim\u00e1ticas del mecanismo de transducci\u00f3n de se\u00f1al mediado por sistemas de dos componentes"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Patricia Casino Ferrando <\/strong><\/h2>\n<p>El objetivo de este trabajo es el estudio de las bases bioqu\u00edmicas y estructurales de la transducci\u00f3n de la se\u00f1al mediada por los sistemas de dos componentes (tcs). En la \u00faltima mitad de los a\u00f1os ochenta emergi\u00f3 el t\u00e9rmino dos componentes para describir una nueva clase de sistemas de transducci\u00f3n de se\u00f1al encontrados en bacterias. En la actualidad, cientos de estos sistemas han sido descritos en eubacterias, arqueobacterias y en menor medida en eucariotas (plantas y levaduras) (nixon et al., 1986). Los sistemas de dos componentes (tcs) responden a m\u00faltiples est\u00edmulos, controlando a su vez una amplia variedad de procesos esenciales para la c\u00e9lula como quimostasis, ciclo celular, esporulaci\u00f3n, relacionados con la virulencia, y la resistencia a antibi\u00f3ticos. El sistema prototipo consta de dos componentes centrales: una prote\u00edna histidina quinasa (hk) y una prote\u00edna reguladora de la respuesta (rr). En general, la qu\u00edmica de la transducci\u00f3n de se\u00f1al en un sistema b\u00e1sico de dos componentes incluye tres reacciones: la llegada de un est\u00edmulo modula la autofosforilaci\u00f3n en un residuo de histidina espec\u00edfico de una hk d\u00edmerica, posteriormente este mismo grupo fosforilo es transferido a un aspartato del correspondiente rr, y finalmente el rr se defosforila, bien por un actividad fosfatasa intr\u00ednseca o bien inducido por la hk. El nivel de fosforilaci\u00f3n del rr altera sus propiedades transcripcionales, enzim\u00e1ticas o mecan\u00edsticas esenciales para la c\u00e9lula. en esta tesis se presenta el siguiente trabajo: &#8211; identificaci\u00f3n del rr que trabaja con tm0853. Tm0853 es una hk hu\u00e9rfana y mediante ensayos de fosfotransferencia con varios rrs hu\u00e9rfanos (tm0143, tm0468, tm0842) de t. Mar\u00edtima demostramos que tm0468 es el rr que forma sistema con ella.  &#8211; caracterizaci\u00f3n de la estabilidad de tm0468 fosforilado.  Mediante electroforesis nativa-page y utilizando el fosfodonador acetilfosfato estudiamos la vida media del rr fosforilado. Tambi\u00e9n se ha  estudiado de la actividad fosfatasa de tm0853 sobre tm0468.  &#8211; caracterizaci\u00f3n estequiom\u00e9trica del complejo formado por tm0853 y tm0468 mediante electroforesis (nativa-page y sds-page) as\u00ed como mediante ultracentrifugaci\u00f3n anal\u00edtica.  &#8211; cristalizaci\u00f3n y resoluci\u00f3n de la estructura por difracci\u00f3n de rayos x del complejo formado por tm0853 y tm0468 utilizando la t\u00e9cnica de dispersi\u00f3n an\u00f3mala a diferentes longitudes de onda (mad). Hasta el momento, es la primera estructura tridimensional de un tcs completo formado por una hk y su correspondiente rr. Esta estructura ha permitido observar los cambios conformacionales entre tm0853 en solitario y formando complejo con su correspondiente rr. &#8211; cristalizaci\u00f3n de tm0468 en solitario as\u00ed como la resoluci\u00f3n de su estructura tridimensional  mediante difracci\u00f3n de rayos x a 2 \u00ed\u00a5 de resoluci\u00f3n, utilizando la t\u00e9cnica de reemplazo molecular. Esto nos ha permitido observar los cambios conformacionales entre tm0468 en solitario y unido a tm0853.  -ambas estructuras nos han permitido definir las bases estructurales del reconocimiento entre una hk y su correspondiente rr. Tambi\u00e9n nos ha permitido proponer un mecanismo para la transducci\u00f3n de la se\u00f1al. &#8211; caracterizaci\u00f3n bioqu\u00edmica de la reacci\u00f3n de autofosforilaci\u00f3n de tm0853. Hemos podido comprobar que dicha reacci\u00f3n se realizaba de forma cis en contraste con el modo trans que se cre\u00eda universal para todas las hks.  &#8211; realizaci\u00f3n de ensayos de entrecruzamiento entre tm0853 y tm0468 para estudiar la reacci\u00f3n de autofosforilaci\u00f3n y fosfotransferencia. La estructura del complejo nos indicaba que las conformaciones que deb\u00eda adoptar la hk para realizar ambas reacciones pod\u00edan ser muy similares.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio de las bases estructurales y enzim\u00e1ticas del mecanismo de transducci\u00f3n de se\u00f1al mediado por sistemas de dos componentes<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio de las bases estructurales y enzim\u00e1ticas del mecanismo de transducci\u00f3n de se\u00f1al mediado por sistemas de dos componentes <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Patricia Casino Ferrando <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Universitat de val\u00e9ncia (estudi general)<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 22\/09\/2008<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Alberto Marina Moreno<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: vicente Rubio zamora <\/li>\n<li>Francisco Garcia del portillo (vocal)<\/li>\n<li>ignacio Fita rodriguez (vocal)<\/li>\n<li>asunci\u00f3n Contreras de vera (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Patricia Casino Ferrando El objetivo de este trabajo es el estudio de las bases bioqu\u00edmicas y estructurales 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