{"id":67016,"date":"2018-03-09T22:55:22","date_gmt":"2018-03-09T22:55:22","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/isoformas-de-la-protea%c2%adna-quinasa-dependiente-de-ampc-en-el-molusco-bivalvo-mytilus-galloprovincialis-purificacion-caracterizacion-funcional-y-distribucion-tisular\/"},"modified":"2018-03-09T22:55:22","modified_gmt":"2018-03-09T22:55:22","slug":"isoformas-de-la-protea%c2%adna-quinasa-dependiente-de-ampc-en-el-molusco-bivalvo-mytilus-galloprovincialis-purificacion-caracterizacion-funcional-y-distribucion-tisular","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/enzimologia\/isoformas-de-la-protea%c2%adna-quinasa-dependiente-de-ampc-en-el-molusco-bivalvo-mytilus-galloprovincialis-purificacion-caracterizacion-funcional-y-distribucion-tisular\/","title":{"rendered":"Isoformas de la prote\u00edna quinasa dependiente de ampc en el molusco bivalvo mytilus galloprovincialis. purificaci\u00f3n, caracterizaci\u00f3n funcional y distribuci\u00f3n tisular"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Jos\u00e9 Ricardo Bardales Aza\u00f1ero <\/strong><\/h2>\n<p>La prote\u00edna quinasa dependiente de ampc (pka) es una prote\u00edna quinasa implicada en la regulaci\u00f3n de varios procesos fisiol\u00f3gicos que ocurren de forma espec\u00edfica en moluscos bivalvos, como la adaptaci\u00f3n a hipoxia o la contracci\u00f3n de m\u00fasculos catch. La holoenzima pka consta de un d\u00edmero de subunidades reguladoras (r) y dos subunidades catal\u00edticas (c), es decir tiene una estructura r22c. En este trabajo de tesis doctoral se han obtenido los siguientes resultados: 1. Se ha demostrado que las isoformas de subunidad r denominadas rmyt1 y rmyt2, identificadas previamente en mejill\u00f3n, son hom\u00f3logas, respectivamente, de las subunidades tipo i y tipo ii de mam\u00edferos.  2. La isoforma rmyt2 puede ser fosforilada in vitro por la case\u00edna quinasa 2 (ck2) utilizando gtp como dador de fosfato. Esta fosforilaci\u00f3n disminuye significativamente la capacidad de rmyt2 para inhibir la subunidad c. Por tanto, la fosforilaci\u00f3n de rmyt2 mediada por ck2 podr\u00eda constituir un mecanismo de activaci\u00f3n de la pka, complementario a la activaci\u00f3n alost\u00e9rica por ampc. 3. Las isoformas rmyt1 y rmyt2 muestran una diferente distribuci\u00f3n tisular y\/o celular. As\u00ed, existen c\u00e9lulas en las cuales s\u00f3lo se expres\u00f3 una de las dos prote\u00ednas. En otras poblaciones celulares, en cambio, se detectaron ambas isoformas, pero con una diferente distribuci\u00f3n dentro de la c\u00e9lula. En general, rmyt 1 se observ\u00f3 en todo el citoplasma celular, mientras que rmyt2 se detect\u00f3 asociada a la membrana celular o a determinadas estructuras como microvellosidades, cilios o flagelos. 4. Se purificaron parcialmente las dos isoformas de pka que contienen rmyt1 y rmyt2 como subunidad r (es decir, pkamyt1 y pkamyt2) y se estudi\u00f3 su activaci\u00f3n por nucle\u00f3tidos c\u00edclicos. Ambas holoenzimas son completamente activadas tanto por ampc como por gmpc, aunque la afinidad por ampc es 100 veces superior. Por otra parte, la actividad de pkamyt2, a diferencia de pkamyt1, fue especialmente sensible a los cambios de temperatura, especialmente a temperaturas superiores a 15\u00c2\u00bac. Dado que esta isoforma se localiza, entre otras c\u00e9lulas, en los flagelos de los espermatozoides, desempe\u00f1ando un papel clave en la regulaci\u00f3n de su motilidad, es probable que la temperatura del agua de mar pueda jugar un papel importante en el proceso de fecundaci\u00f3n afectando a la motilidad de los espermatozoides, una vez que \u00e9stos y los ovocitos son liberados al agua de mar en el desove del mejill\u00f3n. 5. Se identificaron y purificaron varias isoformas de la subunidad c de la pka, a partir de varios tejidos de mejill\u00f3n. El an\u00e1lisis mediante espectrometr\u00eda de masas muestra que existen peque\u00f1as diferencias estructurales entre ellas, y sugiere que todas se generan a partir del mismo gen por procesos de corte y empalme alternativo de diferentes exones. No se observaron diferencias significativas entre las diferentes isoformas de subunidad c en cuanto a los par\u00e1metros cin\u00e9ticos obtenidos utilizando un p\u00e9ptido sint\u00e9tico como sustrato, aunque s\u00ed se observaron peque\u00f1as diferencias entre algunas isoformas en cuanto a su capacidad para fosforilar in vitro algunas prote\u00ednas presentes en un extracto de manto. Finalmente se identific\u00f3 una prote\u00edna de 230 kda que co-purifica de forma sistem\u00e1tica con una de las isoformas de subunidad c procedente de m\u00fasculos catch (isoforma c2). Se trata de una prote\u00edna hom\u00f3loga a la filamina de mam\u00edferos.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Isoformas de la prote\u00edna quinasa dependiente de ampc en el molusco bivalvo mytilus galloprovincialis. purificaci\u00f3n, caracterizaci\u00f3n funcional y distribuci\u00f3n tisular<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Isoformas de la prote\u00edna quinasa dependiente de ampc en el molusco bivalvo mytilus galloprovincialis. purificaci\u00f3n, caracterizaci\u00f3n funcional y distribuci\u00f3n tisular <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Jos\u00e9 Ricardo Bardales Aza\u00f1ero <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Santiago de compostela<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 22\/09\/2008<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jos\u00e9 Antonio Villamar\u00edn Cid<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Juan  ignacio Ramos Martinez <\/li>\n<li>felix victor Vega lisi (vocal)<\/li>\n<li>fuencisla San Juan  serrano (vocal)<\/li>\n<li>eugenia Rodriguez moscoso (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Jos\u00e9 Ricardo Bardales Aza\u00f1ero La prote\u00edna quinasa dependiente de ampc (pka) es una prote\u00edna quinasa implicada en 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