{"id":67608,"date":"2018-03-09T22:56:03","date_gmt":"2018-03-09T22:56:03","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/identificacion-de-bacterias-del-genero-vibrio-asociadas-al-cultivo-de-la-almeja-caracterizacion-y-patogenesis\/"},"modified":"2018-03-09T22:56:03","modified_gmt":"2018-03-09T22:56:03","slug":"identificacion-de-bacterias-del-genero-vibrio-asociadas-al-cultivo-de-la-almeja-caracterizacion-y-patogenesis","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/patologia-veterinaria\/identificacion-de-bacterias-del-genero-vibrio-asociadas-al-cultivo-de-la-almeja-caracterizacion-y-patogenesis\/","title":{"rendered":"Identificaci\u00f3n de bacterias del g\u00e9nero vibrio asociadas al cultivo de la almeja. caracterizaci\u00f3n y patog\u00e9nesis."},"content":{"rendered":"

Tesis doctoral de Mar\u00eda Roxana Beaz Hidalgo <\/strong><\/h2>\n

Algunas especies del g\u00e9nero vibrio son importantes pat\u00f3genos bacterianos que afectan al cultivo de moluscos bivalvos. Las patolog\u00edas causadas por vibrios en moluscos se conocen desde los a\u00f1os 60, sin embargo son escasos los estudios sistem\u00e1ticos y en profundidad en especies de bivalvos distintos de la ostra plana (ostrea edulis) o americana (crassostrea virginica). Debido a los sucesivos episodios de altas mortalidades en poblaciones de almeja cultivada registrados en los \u00faltimos a\u00f1os en galicia se hace necesario el estudio de la microbiota asociada con el fin de detectar posibles nuevos pat\u00f3genos limitantes para el cultivo de este molusco bivalvo. los muestreos realizados a lo largo de 18 meses en 4 zonas geogr\u00e1ficas distintas de galicia demostraron una variaci\u00f3n estacional en la carga bacteriana de las poblaciones de almeja cultivada (ruditapes philippinarum y ruditapes decussatus). Como era de esperar se observ\u00f3 un claro incremento en los niveles de bacterias totales y de vibrios en los meses m\u00e1s c\u00e1lidos, ya que la temperatura aumenta el metabolismo y por tanto el crecimiento de estos microorganismos. Se aislaron un total de 768 vibrios. La caracterizaci\u00f3n bioqu\u00edmica y fisiol\u00f3gica permiti\u00f3 una identificaci\u00f3n preliminar de los aislados, agrupados en diversos fenones seg\u00fan sus perfiles. Los datos fenot\u00edpicos revelaron una gran diversidad de especies dentro del g\u00e9nero, aunque hubo una clara dominancia de aislados del grupo v. Splendidus constituyendo el 54% del total de las cepas. Otras especies abundantes fueron v. Lentus, v. Alginolyticus, v. Diazotrophicus y v. Aestuarianus. se seleccionaron 145 aislados representativos de los grupos fenot\u00edpicos para obtener una identificaci\u00f3n m\u00e1s exacta mediante caracterizaci\u00f3n molecular. La t\u00e9cnica de polimorfismos de amplificaci\u00f3n del dna (aflp) revel\u00f3 la presencia de diversidad espec\u00edfica y permiti\u00f3 esclarecer la identificaci\u00f3n de muchos aislados que estaban enmascarados en el grupo de v. Splendidus por la identificaci\u00f3n fenot\u00edpica. Se observ\u00f3 que los datos de la identificaci\u00f3n fenot\u00edpica y gen\u00e9tica tan solo coincidieron en un 29,82% demostrando que los m\u00e9todos bioqu\u00edmicos en muchos casos no son fiables debido a la gran variabilidad intraespec\u00edfica en muchas pruebas y a la falta de pruebas claras para diferenciar entre especies. Hoy se considera necesario recurrir a un sistema de clasificaci\u00f3n e identificaci\u00f3n bacteriana basado en datos gen\u00e9ticos. el 60,7% de los vibrios analizados por aflp no lograron ser identificados a nivel de especie lo que apuntaba a la posible existencia de nuevas especies en el g\u00e9nero. Se seleccionaron los 8 clusters no identificados de aflp con mayor n\u00famero de aislados, y se procedi\u00f3 a un estudio filogen\u00e9tico basado en la amplificaci\u00f3n del gen 16s rrna y cuatro genes housekeeping: reca, rpoa, pyrh y atpa. los datos de la t\u00e9cnica de an\u00e1lisis de secuencias multilocus (mlsa) revelaron la existencia de 8 posibles nuevas especies dentro de la familia vibrionaceae, 6 en la rama filogen\u00e9tica de v. Splendidus, 1 en la rama de v. Halioticoli y 1 en la rama de aliivibrio fischeri. una completa descripci\u00f3n bioqu\u00edmica, los an\u00e1lisis filogen\u00e9ticos de los 5 genes y los datos aportados por hibridaci\u00f3n dna-dna permitieron la definici\u00f3n de tres nuevas especies dentro de la familia vibrionaceae: vibrio breoganii sp. Nov., Vibrio gallaecicus sp. Nov. Y aliivibrio finisterrae sp. Nov. los an\u00e1lisis filogen\u00e9ticos situaron a la especie v. Breoganii en el grupo de v. Halioticoli, siendo las especies m\u00e1s cercanas v. Comitans, v. Rarus y v. Inusitatus. Las c\u00e9lulas son peque\u00f1os bacilos inm\u00f3viles que carecen de flagelo. Est\u00e1 compuesta por 7 aislados fenot\u00edpicamente homog\u00e9neos con diferencias principalmente en la fermentaci\u00f3n de az\u00facares. Los genes atpa y pyrh demostraron ser los mejores candidatos para diferenciar v. Breoganii de las especies m\u00e1s cercanas. Se observ\u00f3 una variabilidad intraespec\u00edfica en los perfiles de eric-pcr, sin embargo los perfiles de rep-pcr presentaron altos porcentajes de similitud. La cepa tipo de v. Breoganii es rd 15.11t (= cect 7222t = lmg 23858t) aislada de almeja fina (r. Decussatus). los datos del mlsa situaron a la nueva especie v. Gallaecicus dentro del grupo polifil\u00e9tico v. Splendidus. La especie est\u00e1 compuesta por tres aislados fenot\u00edpicamente homog\u00e9neos. Todos los genes secuenciados menos el atpa situaron a los aislados de v. Gallaecicus en una rama independiente del resto de las especies del grupo. Las secuencias concatenadas de los genes situaron a v. Gallaecicus cerca de v. Chagasii, la especie m\u00e1s distante del grupo. Los porcentajes de similitud en el gen 16s rrna con las especies cercanas fueron inferiores al 97,3%. El gen reca es el m\u00e1s discriminativo para diferenciar la nueva especie de sus cong\u00e9neres filogen\u00e9ticos. Los tres aislados presentaron variabilidad intraespec\u00edfica en los perfiles obtenidos mediante eric y rep-pcr. La cepa tipo de v. Gallaecicus es vb 8.9t (=cect 7244t= lmg 24045t) aislada de almeja japonesa (r. Philippinarum). el grupo de a. Finisterrae sp. Nov est\u00e1 compuesto por 4 cepas de las cuales una se diferencia claramente desde el punto de vista fenot\u00edpico, como la prueba de la urea que es negativa para esta cepa. El cong\u00e9nere filogen\u00e9tico m\u00e1s cercano es aliivibrio wodanis con un 98.1% de similitud en el gen 16s rrna, aunque los genes reca y atpa sit\u00faan la especie m\u00e1s de cerca de aliivibrio fischeri y aliivibrio salmonicida respectivamente. En este caso el gen m\u00e1s discriminativo es el reca. La cepa tipo de a. Finisterrae es cmj 11.1t (= cect 7228t = lmg 23869t) aislada de almeja japonesa (r. Philippinarum). en todos los casos, la t\u00e9cnica de mlsa y secuencias concatenadas de varios genes ofreci\u00f3 una mayor fiabilidad y solidez que la utilizaci\u00f3n de un solo gen para la determinaci\u00f3n de la posici\u00f3n filogen\u00e9tica de las especies descritas. el estudio de los productos extracelulares (ecp) de 57 cepas previamente caracterizadas por aflp demostr\u00f3, en general, una baja actividad enzim\u00e1tica y alta variabilidad en los perfiles que no se pudieron relacionar con los clusters de aflp. La mayor citotoxicidad en l\u00edneas celulares correspondi\u00f3 a cepas con ecps con mayor actividad enzim\u00e1tica y concretamente proteol\u00edtica. Las cepas identificadas que mostraron mayor citotoxicidad fueron v. Crassostreae, v. Chagasii, v. Cyclitrophicus y v. Diabolicus. en la cepa rd 8.15 (v. Splendidus-like) de uno de los grupos mayoritarios de aflp no identificados se detectaron actividades enzim\u00e1ticas en los ecp as\u00ed como una destrucci\u00f3n total en la l\u00ednea celular saf-1 y adem\u00e1s mostr\u00f3 virulencia en los ensayos de infecci\u00f3n v\u00eda intra valvar en almeja adulta (fina y japonesa). La cepa no result\u00f3 virulenta en larvas de almeja japonesa. en el an\u00e1lisis realizado de los ecp se observ\u00f3 actividad citot\u00f3xica en casi todas las cepas, sin embargo las cepas tipo de las tres nuevas especies y las 4 cepas de vibrio sp. Pertenecientes a los grupos de aflp no identificados no resultaron virulentas en los ensayos realizados in vivo en larvas de almeja japonesa, ni en inoculaciones por ba\u00f1o en almeja adulta. el presente trabajo ha confirmado la importancia de los m\u00e9todos moleculares en la identificaci\u00f3n de especies de vibrio. Los datos obtenidos por aflp se\u00f1alan la existencia de numerosas especies dentro de este g\u00e9nero a\u00fan no descritas. El estudio taxon\u00f3mico se centr\u00f3 principalmente en tres l\u00edneas filogen\u00e9ticas y propone que futuros estudios sobre las cepas descritas en esta memoria llevar\u00e1n a la descripci\u00f3n de nuevas especies bacterianas dentro del g\u00e9nero.<\/p>\n

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Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00abIdentificaci\u00f3n de bacterias del g\u00e9nero vibrio asociadas al cultivo de la almeja. caracterizaci\u00f3n y patog\u00e9nesis.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n
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  • T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Identificaci\u00f3n de bacterias del g\u00e9nero vibrio asociadas al cultivo de la almeja. caracterizaci\u00f3n y patog\u00e9nesis. <\/li>\n
  • Autor:<\/strong>\u00a0 Mar\u00eda Roxana Beaz Hidalgo <\/li>\n
  • Universidad:<\/strong>\u00a0 Santiago de compostela<\/li>\n
  • Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 24\/10\/2008<\/li>\n<\/ul>\n

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    Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n
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    • Director de la tesis<\/strong>\n
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      • Jes\u00fas Angel L\u00f3pez Romalde<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n
      • Tribunal<\/strong>\n
          \n
        • Presidente del tribunal: alicia Estevez toranzo <\/li>\n
        • ilse Cleenwerck (vocal)<\/li>\n
        • Mar\u00eda Jos\u00e9 Figueras salvat (vocal)<\/li>\n
        • Ana Do vale (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n

           <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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