{"id":68288,"date":"2018-03-09T22:56:45","date_gmt":"2018-03-09T22:56:45","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estructura-y-fragmentacion-del-adn-de-espermatozoides-humanos-relacion-con-infertilidad-masculina\/"},"modified":"2018-03-09T22:56:45","modified_gmt":"2018-03-09T22:56:45","slug":"estructura-y-fragmentacion-del-adn-de-espermatozoides-humanos-relacion-con-infertilidad-masculina","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/esterilidad-y-fecundidad\/estructura-y-fragmentacion-del-adn-de-espermatozoides-humanos-relacion-con-infertilidad-masculina\/","title":{"rendered":"Estructura y fragmentaci\u00f3n del adn de espermatozoides humanos. relaci\u00f3n con infertilidad masculina"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Lourdes Muriel R\u00edos <\/strong><\/h2>\n<p>En esta tesis doctoral se presenta una nueva t\u00e9cnica, el test de la dispersi\u00f3n de la cromatina en espermatozoides (scd), como una t\u00e9cnica novedosa para determinar la fragmentaci\u00f3n del adn es espermatozoides. El principio de esta t\u00e9cnica se basa en que los espermatozoides con adn fragmentado no forman un halo de descondensaci\u00f3n del adn,  caracter\u00edstico de espermatozoides con el adn intacto. Los halos corresponden a bucles de adn descompactados, anclados a una estructura nuclear residual. Estos n\u00facleos desproteinizados se denominan #nucleoides#. para realizar esta t\u00e9cnica los espermatozoides intactos se incluyen en una matriz de agarosa sobre un portaobjetos, se tratan con una soluci\u00f3n \u00e1cida para desnaturalizar las roturas de adn, y posteriormente se lisan para eliminar membranas y prote\u00ednas. La matriz de agarosa permite trabajar con espermatozoides sin fijar sobre un portaobjetos en unas condiciones similares a una suspensi\u00f3n. La eliminaci\u00f3n de prote\u00ednas nucleares genera nucleoides con un core central y un halo de bucles de adn disperso. Utilizando tinciones fluorescentes, vemos que los espermatozoides con el adn fragmentado no producen halos de dispersi\u00f3n del adn o \u00e9stos son de tama\u00f1o muy peque\u00f1o, mientras que aquellos espermatozoides con el adn intacto forman halos de dispersi\u00f3n del adn. Estos resultados se confirmaron mediante el dbd-fish (dna breakage detection-fluorescence in situ hybridization).  por lo tanto, con esta t\u00e9cnica podemos detectar y cuantificar el porcentaje de espermatozoides con adn fragmentado presentes en una muestra seminal de forma precisa determinando el tama\u00f1o del halo. Esta t\u00e9cnica se denomina scd (sperm chromatin dispersion test), y se caracteriza por ser sencilla, precisa, altamente reproducible y econ\u00f3mica para determinar la fragmentaci\u00f3n del adn de espermatozoides. Los nucleoides pueden ser te\u00f1idos para microscop\u00eda de campo claro, o utilizar fluorescencia.  posteriormente la t\u00e9cnica inicial se mejor\u00f3 para la mejor visualizaci\u00f3n de la preparaci\u00f3n utilizando un microscopio convencional de campo claro y la identificaci\u00f3n segura de c\u00e9lulas esperm\u00e1ticas. Esto se consigui\u00f3 al suavizar los tratamientos logrando mantener la presencia de la cola de los espermatozoides y poder as\u00ed discriminar con facilidad otros tipos celulares. El resultado de este trabajo llev\u00f3 a la elaboraci\u00f3n de un kit comercial, halosperm\u00c2\u00ae (halotech dna sl, Madrid).  una vez demostrada la fiabilidad de la t\u00e9cnica, se procedi\u00f3 a comprobar la relevancia cl\u00ednica de la fragmentaci\u00f3n del adn de los espermatozoides en los procesos de reproducci\u00f3n asistida y comprobar su implicaci\u00f3n en el desarrollo y calidad embrionarios. Se comprob\u00f3 que los niveles de fragmentaci\u00f3n del adn de espermatozoides, analizados mediante el test scd, se correlacionan negativamente con la tasa de fecundaci\u00f3n y la calidad embrionaria en ciclos de fiv\/icsi. adem\u00e1s, la determinaci\u00f3n de la fragmentaci\u00f3n del adn podr\u00eda ser de especial inter\u00e9s en caso de pacientes con una tasa baja de gestaci\u00f3n y baja calidad embrionaria, ya que el da\u00f1o en el adn podr\u00eda ser un factor causal en estos casos. tambi\u00e9n  se realiz\u00f3 un estudio sobre la estructura de los lugares sensibles al \u00e1lcali en el adn de espermatozoides empleando sistemas enzim\u00e1ticos con marcaje in situ, y las diferencias existentes en el da\u00f1o basal de los espermatozoides en comparaci\u00f3n con c\u00e9lulas som\u00e1ticas. La t\u00e9cnica dbd-fish demuestra que el adn desproteinizado de los espermatozoides humanos posee una extrema sensibilidad a la desnaturalizaci\u00f3n  alcalina, en comparaci\u00f3n con el adn de los leucocitos. Esto se debe a la presencia de una alta densidad de lugares l\u00e1biles alcalinos constitutivos. la digesti\u00f3n con nucleasa mung bean revel\u00f3 una mayor densidad de segmentos de cadena sencilla en el adn de los espermatozoides humanos, en relaci\u00f3n con el de leucocitos. Posiblemente son \u00e1reas de desnaturalizaci\u00f3n parcial, que podr\u00edan corresponder a los lugares l\u00e1biles alcalinos constitutivos.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estructura y fragmentaci\u00f3n del adn de espermatozoides humanos. relaci\u00f3n con infertilidad masculina<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estructura y fragmentaci\u00f3n del adn de espermatozoides humanos. relaci\u00f3n con infertilidad masculina <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Lourdes Muriel R\u00edos <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 A coru\u00f1a<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 28\/11\/2008<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jos\u00e9 Luis Fernandez Garcia<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Jaime Gos\u00e1lvez berenguer <\/li>\n<li>Francisco Blanco Garc\u00eda (vocal)<\/li>\n<li>Alberto Pacheco castro (vocal)<\/li>\n<li>marcos Meseguer escriva (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Lourdes Muriel R\u00edos En esta tesis doctoral se presenta una nueva t\u00e9cnica, el test de la dispersi\u00f3n 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