{"id":68526,"date":"2008-05-12T00:00:00","date_gmt":"2008-05-12T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/bases-para-la-elaboracion-de-bancos-de-germoplasma-de-peces-aplicacion-a-la-trucha-leonesa\/"},"modified":"2008-05-12T00:00:00","modified_gmt":"2008-05-12T00:00:00","slug":"bases-para-la-elaboracion-de-bancos-de-germoplasma-de-peces-aplicacion-a-la-trucha-leonesa","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/piscicultura\/bases-para-la-elaboracion-de-bancos-de-germoplasma-de-peces-aplicacion-a-la-trucha-leonesa\/","title":{"rendered":"Bases para la elaboraci\u00f3n de bancos de germoplasma de peces: aplicaci\u00f3n a la trucha leonesa"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Sonia Mart\u00ednez P\u00e1ramo <\/strong><\/h2>\n<p>Durante las \u00faltimas d\u00e9cadas, las consecuencias de las cat\u00e1strofes naturales unidas a los efectos negativos de la actividad humana se han visto reflejadas en el deterioro de los h\u00e1bitats naturales as\u00ed como en la reducci\u00f3n de la variabilidad de las especies que habitan en ellos. Los cursos fluviales son uno de los h\u00e1bitats m\u00e1s susceptibles, debido principalmente a que desde los comienzos de la civilizaci\u00f3n, los r\u00edos han sido el foco de asentamiento de las poblaciones humanas. En la provincia de le\u00f3n, la degradaci\u00f3n del medio fluvial, la pesca exhaustiva y los brotes epid\u00e9micos han diezmado algunas poblaciones de peces, siendo la especie m\u00e1s emblem\u00e1tica y m\u00e1s amenazada la trucha com\u00fan (salmo trutta l.). Por ello, se han desarrollado durante a\u00f1os programas de cr\u00eda en cautividad y repoblaci\u00f3n, que han permitido contrarrestar en gran medida estos efectos.  Sin embargo, la cr\u00eda intensiva de trucha com\u00fan presenta m\u00e1s dificultades que el cultivo de otras especies, debido en parte a que es muy susceptible de padecer enfermedades. La creaci\u00f3n de stocks h\u00edbridos a partir de machos aut\u00f3ctonos y hembras de procedencia centroeuropea mejor\u00f3 la productividad en cautividad. Sin embargo, este tipo de cruzamientos provoca introgresi\u00f3n g\u00e9nica de las poblaciones for\u00e1neas en el genoma de las poblaciones nativas, provocando la desaparici\u00f3n de caracteres seleccionados, favorables en un determinado h\u00e1bitat y reduciendo la variabilidad g\u00e9nica de las poblaciones salvajes. La repoblaci\u00f3n con stocks obtenidos a partir de las poblaciones nativas, requerir\u00eda crear un stock para cada poblaci\u00f3n gen\u00e9ticamente diferenciada, lo que conlleva un gran coste y un riesgo de deriva g\u00e9nica a lo largo de las generaciones. En la cuenca del duero, que es la que nos ocupa, existen diferentes poblaciones que muestran caracter\u00edsticas diferenciales y que se encuentran perfectamente caracterizadas. En este contexto, la creaci\u00f3n de un banco de germoplasma, donde almacenar gametos y embriones, ser\u00eda enormemente \u00fatil en programas de conservaci\u00f3n, ya que permitir\u00eda la preservaci\u00f3n del material gen\u00e9tico que define una poblaci\u00f3n, su posterior empleo para la fecundaci\u00f3n y finalmente la reintroducci\u00f3n de las distintas variedades en sus lugares de origen.  la criopreservaci\u00f3n es el procedimiento m\u00e1s utilizado para preservar los gametos y embriones que constituyen un banco de recursos gen\u00e9ticos (grb), y la puesta a punto de un grb para cualquier especie requiere el dominio de esta t\u00e9cnica. Por ello nos proponemos comprobar si la criopreservaci\u00f3n seminal garantiza la preservaci\u00f3n de la variabilidad gen\u00e9tica de las poblaciones de trucha amenazadas y analizar si el uso de prote\u00ednas anticongelaci\u00f3n mejora los resultados obtenidos en la congelaci\u00f3n de embriones de peces. aunque la criopreservaci\u00f3n de semen de peces se ha llevado a cabo en m\u00e1s de 200 especies, la mayor parte de ellas de agua dulce, los estudios realizados en trucha com\u00fan son muy escasos. Por otra parte, datos recientes sugieren que la congelaci\u00f3n del semen promueve fragmentaci\u00f3n de la cromatina e indican que podr\u00eda afectar al perfil gen\u00e9tico de la descendencia.  El protocolo utilizado en este trabajo, result\u00f3 de adaptar uno descrito por nuestro equipo para trucha arco iris, donde se utiliza una soluci\u00f3n crioprotectora que contiene yema de huevo como estabilizador de membrana y dmso como crioprotector principal. Para evaluar la calidad de la muestra antes y despu\u00e9s de la criopreservaci\u00f3n se realizaron estudios a nivel de estabilidad de la membrana plasm\u00e1tica, integridad del adn y capacidad fecundante de los espermatozoides. Ni el porcentaje de c\u00e9lulas viables (entendiendo como viables aquellas c\u00e9lulas que mantuvieron la membrana plasm\u00e1tica intacta), ni el valor medio de fragmentaci\u00f3n del adn sufri\u00f3 alteraciones significativas tras la criopreservaci\u00f3n, aunque s\u00ed se redujo el porcentaje de c\u00e9lulas con menos del 5% de la cromatina fragmentada. Sin embargo, el porcentaje de huevos fecundados disminuy\u00f3 de forma notable, debido probablemente a la suma de peque\u00f1os da\u00f1os causados en las c\u00e9lulas a diferentes niveles durante el proceso. Aunque los da\u00f1os a nivel del adn no fueron significativos tras la descongelaci\u00f3n, se produjo una disminuci\u00f3n en el n\u00famero de espermatozoides que conservaban su genoma en estado intacto, por lo que no asegura que no haya consecuencias en la descendencia. Adem\u00e1s, la selecci\u00f3n de los espermatozoides m\u00e1s resistentes durante el proceso de criopreservaci\u00f3n, tambi\u00e9n podr\u00eda conducir a una selecci\u00f3n de determinados caracteres, provocando una variaci\u00f3n en el patr\u00f3n gen\u00e9tico de la siguiente generaci\u00f3n. Por ello, se realiz\u00f3 el an\u00e1lisis de 9 microsat\u00e9lites en la descendencia, que demostr\u00f3 que los patrones gen\u00e9ticos de las progenies obtenidas a partir de semen fresco y congelado eran id\u00e9nticos. Este hecho implica que la criopreservaci\u00f3n de semen de trucha com\u00fan es una herramienta v\u00e1lida para preservar su potencial gen\u00e9tico, y as\u00ed poder utilizar estas muestras en posteriores programas de repoblaci\u00f3n.  en cuanto a la criopreservaci\u00f3n de embriones y ovocitos de tele\u00f3steos, hasta el momento nunca se ha alcanzado con \u00e9xito este objetivo debido a su gran tama\u00f1o y su particular estructura. Teniendo en cuenta este factor, as\u00ed como el hecho de que los embriones de salm\u00f3nidos tienen un tama\u00f1o particularmente grande y un desarrollo lento, y que existe un escas\u00edsimo conocimiento sobre sus caracter\u00edsticas criobiol\u00f3gicas, parece m\u00e1s adecuado utilizar una especie modelo que ha sido bien estudiada, es f\u00e1cil de mantener en laboratorio y presenta embriones con caracter\u00edsticas, a priori, m\u00e1s favorables para la criopreservaci\u00f3n. Por eso, en los estudios realizados en el presente trabajo se utiliz\u00f3 el pez cebra como modelo, con el fin de desarrollar mejoras en la congelaci\u00f3n de embriones que puedan ser en un futuro aplicadas a la trucha com\u00fan.  los mayores \u00e9xitos alcanzados en criopreservaci\u00f3n de embriones de tele\u00f3steos, se obtuvieron cuando embriones de la especie pleuronectes americanus  mostraron indicios de desarrollo tras la descongelaci\u00f3n. Este hecho fue atribuido a que estos peces del \u00e1rtico expresan unas prote\u00ednas anticongelaci\u00f3n (afps) que act\u00faan como crioprotectores naturales. Por eso, se crey\u00f3 oportuno incorporar estas afps a los protocolos convencionales de criopreservaci\u00f3n, ya que la incorporaci\u00f3n o expresi\u00f3n de estas prote\u00ednas podr\u00eda incrementar la resistencia a la criopreservaci\u00f3n en animales que no las producen naturalmente. En estudios previos, el empleo de la microinyecci\u00f3n para introducir las afps en embriones de rodaballo y de dorada, demostr\u00f3 que el da\u00f1o mec\u00e1nico que se produce durante la manipulaci\u00f3n resulta incompatible con la vitrificaci\u00f3n. En el presente estudio se han incubado embriones de pez cebra en varios estadios embrionarios (2-8 c\u00e9lulas, 128 c\u00e9lulas y bl\u00e1stula avanzada) en un medio que contiene afps. El an\u00e1lisis de microscop\u00eda confocal demostr\u00f3 que existe una estrecha ventana temporal en el desarrollo embrionario (durante el estadio de 128 c\u00e9lulas), en la cual los blast\u00f3meros de la l\u00ednea marginal, que dar\u00e1n lugar a la l\u00ednea sincitial y a \u00f3rganos derivados del aparato digestivo anterior (faringe, p\u00e1ncreas e h\u00edgado), captan esas prote\u00ednas del espacio perivitelino, manteni\u00e9ndose localizadas en esos puntos, al menos hasta la eclosi\u00f3n. Este hecho result\u00f3 ser un gran avance teniendo en cuenta que la l\u00ednea sincitial es considerada la barrera m\u00e1s impermeable de la estructura embrionaria y m\u00e1s susceptible de sufrir da\u00f1os durante el proceso de vitrificaci\u00f3n\/descongelaci\u00f3n. El efecto crioprotector de estas prote\u00ednas, qued\u00f3 demostrado desde el momento en que los embriones de pez cebra incubados con afps, resistieron mucho mejor las bajas temperaturas que los embriones control, duplicando el porcentaje de eclosi\u00f3n tras 45 minutos a -10 \u00c2\u00bac. Tras la vitrificaci\u00f3n tambi\u00e9n se observ\u00f3 el efecto beneficioso de las afps, ya que disminuy\u00f3 el porcentaje de embriones que colapsan durante la descongelaci\u00f3n, debido probablemente a que la presencia de estas prote\u00ednas en la l\u00ednea sincitial confiere mayor resistencia a esta envuelta, protegiendo el saco vitelino y el compartimento celular. Sin embargo, adem\u00e1s de la morfolog\u00eda embrionaria se consider\u00f3 necesario evaluar los da\u00f1os producidos a nivel celular, ya que los embriones son incapaces de continuar el desarrollo. Con este fin, se desarroll\u00f3 un protocolo de evaluaci\u00f3n del compartimento celular para cada embri\u00f3n independiente, con el fin de obtener datos del estado del compartimento embrionario propiamente dicho. Los resultados mostraron que, tras la criopreservaci\u00f3n, s\u00f3lo el 50% de las c\u00e9lulas se mantiene viable independientemente de la incubaci\u00f3n con afps, consider\u00e1ndose que este porcentaje de c\u00e9lulas viables es incompatible con el desarrollo embrionario. Sin embargo, las c\u00e9lulas procedentes de embriones incubados con afps mostraron mejor funcionalidad celular, ya que son capaces de sobrevivir en cultivo durante m\u00e1s tiempo que las c\u00e9lulas de embriones control. Los avances producidos demuestran que las afps ejercen un efecto crioprotector, pero ha de conseguirse una distribuci\u00f3n m\u00e1s amplia de las mismas a lo largo del embri\u00f3n para obtener mejoras significativas en los resultados. Los progresos obtenidos hasta el momento no son suficientes como para emprender estudios espec\u00edficos en trucha com\u00fan. teniendo en cuenta las dificultades que plantea la criopreservaci\u00f3n de embriones, se plante\u00f3 la posibilidad que incorporar las afps a los protocolos tradicionales de congelaci\u00f3n de blast\u00f3meros como posible soluci\u00f3n a la preservaci\u00f3n del material gen\u00e9tico de ambos progenitores. Los resultados obtenidos en pez cebra, tambi\u00e9n mostraron una notable mejor\u00eda, ya que el porcentaje de blast\u00f3meros viables se duplica al a\u00f1adir afps a la soluci\u00f3n crioprotectora. Este hecho probablemente fue debido a que adem\u00e1s de inhibir el crecimiento de los cristales de hielo durante la congelaci\u00f3n\/descongelaci\u00f3n, las afps act\u00faan como agentes estabilizadores de membrana reduciendo los da\u00f1os producidos por las bajas temperaturas.  atendiendo a que el prop\u00f3sito de la presente tesis doctoral es establecer unas bases para la creaci\u00f3n de un banco de germoplasma para las poblaciones de trucha com\u00fan de la provincia de le\u00f3n, de los resultados obtenidos se puede concluir que: el protocolo descrito para criopreservaci\u00f3n de semen es un m\u00e9todo apropiado para preservar el potencial gen\u00e9tico de los machos de esta especie, y por lo tanto es apto para congelar muestras destinadas a formar parte de un grb. Las t\u00e9cnicas de androg\u00e9nesis permitir\u00edan obtener una descendencia cuyo material gen\u00e9tico fuese \u00fanicamente de origen paterno, evitando as\u00ed la introgresi\u00f3n g\u00e9nica en aquellos casos en que no haya disponibilidad de ovocitos de hembras pertenecientes a la poblaci\u00f3n que sea necesario repoblar. Incluso con tasas de fecundaci\u00f3n bajas se obtendr\u00eda un n\u00famero de individuos  en la primera generaci\u00f3n suficiente para recuperar la poblaci\u00f3n original, debido a la gran prolificidad de estas especies.  por otra parte, y teniendo en cuenta que la criopreservaci\u00f3n de embriones est\u00e1 aun lejos de ser alcanzada, la congelaci\u00f3n de blast\u00f3meros parece una opci\u00f3n m\u00e1s realista para preservar el material gen\u00e9tico de ambos progenitores. Los avances realizados en este trabajo mediante incorporaci\u00f3n de afps al medio de congelaci\u00f3n, podr\u00edan ser aplicados para la criopreservaci\u00f3n de blast\u00f3meros de trucha com\u00fan. Una vez estandarizado el protocolo, la recuperaci\u00f3n de la poblaci\u00f3n amenazada podr\u00eda ser llevada a cabo mediante microinyecci\u00f3n de blast\u00f3meros para creaci\u00f3n de quimeras o transferencia nuclear a ovocitos enucleados. Sin embargo, para llevar a cabo con \u00e9xito este proceso a\u00fan es necesario un largo proceso de investigaci\u00f3n.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Bases para la elaboraci\u00f3n de bancos de germoplasma de peces: aplicaci\u00f3n a la trucha leonesa<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Bases para la elaboraci\u00f3n de bancos de germoplasma de peces: aplicaci\u00f3n a la trucha leonesa <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Sonia Mart\u00ednez P\u00e1ramo <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Le\u00f3n<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 05\/12\/2008<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Paz Herraez Ortega<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Luis Anel rodr\u00edguez <\/li>\n<li>elsa Cabrita (vocal)<\/li>\n<li>olvido Chereguini fern\u00e1ndez-maquieira (vocal)<\/li>\n<li>Jos\u00e9 benito Peleteiro alonso (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Sonia Mart\u00ednez P\u00e1ramo Durante las \u00faltimas d\u00e9cadas, las consecuencias de las cat\u00e1strofes naturales unidas a los efectos 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