{"id":89280,"date":"2018-03-10T00:14:24","date_gmt":"2018-03-10T00:14:24","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/purificacion-y-caracterizacion-de-la-fad-amp-liasa-ciclante-o-fmn-ciclasa-de-higado-de-rata\/"},"modified":"2018-03-10T00:14:24","modified_gmt":"2018-03-10T00:14:24","slug":"purificacion-y-caracterizacion-de-la-fad-amp-liasa-ciclante-o-fmn-ciclasa-de-higado-de-rata","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/quimica\/purificacion-y-caracterizacion-de-la-fad-amp-liasa-ciclante-o-fmn-ciclasa-de-higado-de-rata\/","title":{"rendered":"Purificacion y caracterizacion de la fad-amp liasa (ciclante) o fmn ciclasa de higado de rata"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Alicia Cabezas Martin <\/strong><\/h2>\n<p>Recientemente se public\u00f3 la primera descripci\u00f3n de una fad-amp liasa o fmn ciclasa, una preparaci\u00f3n parcialmente purificada a partir de higado de rata (fraiz fj,pinto rm, costas mj, avalos m, canales j, cabezas a, cameselle jc, biochem. J. 330,881-888,1998). El principal objetivo de esta tesis doctoral era purificar esta fmn ciclasa hasta un grado de homogeneidad aparente y emplear la preparacion de alta pureza para confirmar y ampliar la caracterizaci\u00f3n de la enzima parcialmente purificada. Los pasos de purificacion fueron: obtenci\u00f3n de un sobrenadante de 100000 g a partir de homogeneizados de higado de rata en medio isot\u00f3nico, precipitaci\u00f3n fraccionada con sulfato am\u00f3nico, cromatografias de filtraci\u00f3n en gel, intercambio ionico, afinidad por verde reactivo 19-agarosa y afinidad por adp-agarosa. La adsorci\u00f3n a adp-agarosa se consigui\u00f3 en presencia de mn2+ (cation activador de la enzima), condici\u00f3n en que la fmn ciclasa permanecia adherida incluso a alta fuerza i\u00f3nica, recuperandose con baja fuerza i\u00f3nica sin mn2+. Los resultados de la purificaci\u00f3n completa fueron: actividad especifica, 2,2 u\/mg,purificaci\u00f3n de 240 veces y rendimiento del 15%. Por electroforesis en condiciones desnaturalizantes revelada con plata, solo se observ\u00f3 una banda proteica de 59 kda. La correspondencia de la proteina con la actividad fmn ciclasa se puso de manifiesto por electroforesis desnaturalizante seguida de renaturalizaci\u00f3n, ultracentrifugaci\u00f3n en gradiente seguida de analisis por electroforesis desnaturalizante, y electroforesis no desnaturalizante con revelado de la actividad fmn ciclasa por fluorescencia. La masa molecular nativa de la fmn ciclasa result\u00f3 ser 100 kda \u00f3 140 kda al medirla por ultracentrifugaci\u00f3n en gradiente o por cromatografia de filtracion en gel, respectivamente. los estudios de especificidad de sustrato y reaccion indicaron que la enzima tiene actividad liasa(ciclante) sobre los siguientes sustratos: fad(mejor sust<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Purificacion y caracterizacion de la fad-amp liasa (ciclante) o fmn ciclasa de higado de rata<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Purificacion y caracterizacion de la fad-amp liasa (ciclante) o fmn ciclasa de higado de rata <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Alicia Cabezas Martin <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Extremadura<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 13\/03\/2001<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jos\u00e9 Carlos Cameselle Vi\u00f1a<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Antonio Sillero repullo <\/li>\n<li>cipriano Hurtado manzano (vocal)<\/li>\n<li>claudi Cuchillo foix (vocal)<\/li>\n<li> Meireles da silva goncalves ribeiro joao nuno (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Alicia Cabezas Martin Recientemente se public\u00f3 la primera descripci\u00f3n de una fad-amp liasa o fmn ciclasa, una 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