{"id":90477,"date":"2008-11-12T00:00:00","date_gmt":"2008-11-12T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/nuevos-inhibidores-de-las-fosfatasas-de-tipo-pp1-de-levadura-y-mama%c2%adfero\/"},"modified":"2008-11-12T00:00:00","modified_gmt":"2008-11-12T00:00:00","slug":"nuevos-inhibidores-de-las-fosfatasas-de-tipo-pp1-de-levadura-y-mama%c2%adfero","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/genetica-bioquimica\/nuevos-inhibidores-de-las-fosfatasas-de-tipo-pp1-de-levadura-y-mama%c2%adfero\/","title":{"rendered":"Nuevos inhibidores de las fosfatasas de tipo pp1 de levadura y mam\u00edfero"},"content":{"rendered":"

Tesis doctoral de Leda Pedelini <\/strong><\/h2>\n

La fosforilaci\u00f3n reversible de prote\u00ednas es un proceso en el que est\u00e1n involucradas quinasas y fosfatasas constituyendo uno de los mecanismos post-traduccionales m\u00e1s importantes en la regulaci\u00f3n de v\u00edas intracelulares de se\u00f1alizaci\u00f3n. A pesar de que la regulaci\u00f3n de quinasas ha sido objeto de estudio durante las \u00faltimas d\u00e9cadas, el estudio de las fosfatasas es muy reciente. \tla fosfatasa de prote\u00ednas de tipo 1 (pp1) es una ser\/thr fosfatasa, de expresi\u00f3n ubicua, que regula una gran variedad de procesos celulares. La subunidad catal\u00edtica de pp1 (pp1c) est\u00e1 altamente conservada en la escala evolutiva, desde hongos hasta mam\u00edferos. En la levadura sacharomyces cerevisiae s\u00f3lo hay una pp1c, llamada glc7, la cual es esencial para la viabilidad celular. De modo similar a su ort\u00f3logo en mam\u00edferos, glc7 participa en la regulaci\u00f3n de muchos procesos fisiol\u00f3gicos tales como el metabolismo de gluc\u00f3geno, la represi\u00f3n por glucosa, la homeostasis de iones, la progresi\u00f3n del ciclo celular, etc. Esta versatilidad funcional de pp1c se debe a la existencia de subunidades reguladoras que pueden llevar a pp1c hacia diferentes compartimentos celulares y\/o sustratos y conferirle especificidad de sustrato o modular la actividad enzim\u00e1tica. \tla actividad de pp1c es esencial pero debe estar altamente controlada ya que su sobreexpresi\u00f3n o hiperactivaci\u00f3n puede ser delet\u00e9rea para la c\u00e9lula. Por lo tanto, un gran n\u00famero de inhibidores fisiol\u00f3gicos de pp1c han sido identificados en eucariotas superiores. En nuestro laboratorio se identific\u00f3 la primera subunidad inhibidora de glc7 en levadura, que llamamos ypi1 (yeast phosphatase inhibitor 1). Esta prote\u00edna contiene el motivo consenso de uni\u00f3n a pp1c y es esencial, lo que sugiere un papel relevante en la fisiolog\u00eda de la levadura. Por otro lado, la sobreexpresi\u00f3n de ypi1 provoca fenotipos consistentes con un papel inhibidor sobre glc7. Ypi1 interacciona f\u00edsicamente (metodo de co-inmunoprecipitaci\u00f3n por afinidad) con sds22. Esta es una prote\u00edna esencial de 40 kda que es capaz de interaccionar con glc7 y llevarla a sustratos involucrados en mitosis. Sds22 es aparentemente una prote\u00edna nuclear, a pesar de no presentar secuencia de localizaci\u00f3n nuclear (nls). ypi1 y sds22 se originaron antes de la divergencia de las cuatro supertaxa que constituyen la corona eucari\u00f3tica y constituyen las prote\u00ednas reguladoras m\u00e1s antiguas de pp1. El hecho de que ypi1 y sds22 se hayan conservado a lo largo de la evoluci\u00f3n sugiere que estas prote\u00ednas cumplen una funci\u00f3n esencial en uno o varios procesos celulares. a lo largo de esta tesis demostramos que ypi1 y sds22 forman un complejo heterotrim\u00e9rico, espec\u00edfico, con glc7, que se ha conservado a lo largo de la escala evolutiva y que, tanto ypi1 como sds22, pueden inhibir la actividad de la fosfatasa glc7 in vitro. \tprofundizando en el estudio de las regiones involucradas en la interacci\u00f3n entre ypi1, sds22 y glc7, encontramos que el domino c-terminal de ypi1 es responsable de la interacci\u00f3n con sds22, mientras que glc7 se une al dominio n-terminal de ypi1, que contiene el motivo de uni\u00f3n a pp1, (r\/k)(v\/i)x(f\/w). Tambi\u00e9n comprobamos que la uni\u00f3n de sds22 a ypi1 puede ser independiente de la presencia de glc7 en el complejo y que la porci\u00f3n n-terminal de sds22 es innecesaria para la interacci\u00f3n, tanto con glc7, como con ypi1. encontramos que, al igual que sds22, ypi1 es una prote\u00edna mayoritariamente nuclear. Comprobamos que la ausencia de ambas subunidades reguladoras altera la localizaci\u00f3n nuclear de glc7 y lleva a un bloqueo del ciclo celular en metafase. Las funciones de ypi1 y sds22 ser\u00edan necesarias para regular negativamente la actividad catal\u00edtica de la fosfatasa para una correcta progresi\u00f3n del ciclo celular. Conociendo que las actividades opuestas de la quinasa ipl1\/aurora b y la fosfatasa glc7\/pp1 son necesarias para una correcta segregaci\u00f3n cromos\u00f3mica, comprobamos que la sobreexpresi\u00f3n de cualquiera de estas dos prote\u00ednas rescata el fenotipo termosensible de un mutante ipl1, lo cual sugerir\u00eda que estas dos prote\u00ednas estar\u00edan restaurando el balance quinasa\/fosfatasa dificultando el acceso de glc7 a sus sustratos. \ttambi\u00e9n hemos demostrado que ypi1 es una fosfoprote\u00edna in vivo, que puede defosforilarse, in vitro, en los residuos s99a-s101a-s103a por ck1 y en el residuo s133, por mck1. Adem\u00e1s, la mutaci\u00f3n de los residuos fosforilables por ck afecta la capacidad de uni\u00f3n a glc7 y a sds22. \totro aspecto importante de esta tesis ha sido la caracterizaci\u00f3n de los ort\u00f3logos de ypi1 y sds22 en mam\u00edferos, inhibidor 3 (i3) y hsds22, respectivamente. Comprobamos que el i3 y hsds22 forman un complejo con pp1 e inhiben su actividad in vitro. Al igual que ypi1, el i3 es una fosfoprote\u00edna, in vivo, que se acumula, mayoritariamente, en el n\u00facleo de las c\u00e9lulas de mam\u00edfero. Sin embargo, el i3 solo complementa la funci\u00f3n de ypi1 al co-expresar hsds22, lo cual revela el requerimiento del producto de ambos genes para cumplir la funci\u00f3n de ypi1 en levaduras. Estos datos, observados en conjunto, sugieren que las funciones claves del complejo heterotrim\u00e9rico i3-hsds22-pp1 est\u00e1n conservadas.<\/p>\n

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Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00abNuevos inhibidores de las fosfatasas de tipo pp1 de levadura y mam\u00edfero<\/strong>\u00ab<\/h3>\n
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  • T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Nuevos inhibidores de las fosfatasas de tipo pp1 de levadura y mam\u00edfero <\/li>\n
  • Autor:<\/strong>\u00a0 Leda Pedelini <\/li>\n
  • Universidad:<\/strong>\u00a0 Universitat de val\u00e9ncia (estudi general)<\/li>\n
  • Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 11\/12\/2008<\/li>\n<\/ul>\n

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    Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n
      \n
    • Director de la tesis<\/strong>\n
        \n
      • Pascual Sanz Bigorra<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n
      • Tribunal<\/strong>\n
          \n
        • Presidente del tribunal: mathieu Bollen <\/li>\n
        • Rafael Pulido murillo (vocal)<\/li>\n
        • lynne Yenush (vocal)<\/li>\n
        • enrique Herrero perpi\u00f1an (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n

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