{"id":90614,"date":"2008-12-12T00:00:00","date_gmt":"2008-12-12T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/desarrollo-de-metodos-rapidos-para-el-control-de-bacillus-cereus-en-alimentos\/"},"modified":"2008-12-12T00:00:00","modified_gmt":"2008-12-12T00:00:00","slug":"desarrollo-de-metodos-rapidos-para-el-control-de-bacillus-cereus-en-alimentos","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bacteriologia\/desarrollo-de-metodos-rapidos-para-el-control-de-bacillus-cereus-en-alimentos\/","title":{"rendered":"Desarrollo de metodos rapidos para el control de bacillus cereus en alimentos"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Juan  Francisco Martinez Blanch <\/strong><\/h2>\n<p>Bacillus cereus es un bacilo gram positivo esporulado contaminante habitual de alimentos tanto frescos como procesados. La detecci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n de este pat\u00f3geno de alimentos se realiza habitualmente por t\u00e9cnicas culturales. Dichas t\u00e9cnicas consumen mucho tiempo y en ocasiones llevan a identificaciones err\u00f3neas. Como alternativa, las t\u00e9cnicas moleculares basadas en la pcr tienen como ventaja una mayor rapidez y seguridad en la identificaci\u00f3n del microorganismo e incluso permiten su cuantificaci\u00f3n mediante pcr a tiempo real (q-pcr). a partir de una colecci\u00f3n de cepas de referencia y aislados de alimentos, identificadas previamente (fenot\u00edpicamente, iso 7932 y api-50ch\/b y genot\u00edpica, isr-pcr y rapd), se determin\u00f3 la presencia de genes relacionados con factores de virulencia mediante pcr convencional. El gen pc-plc se detect\u00f3 en un mayor porcentaje en las cepas del \u00abgrupo b. Cereus\u00bb, y dado que se encuentra en una \u00fanica copia por genoma, fue seleccionado como gen diana. Se dise\u00f1aron 5 oligonucle\u00f3tidos para el desarrollo de procedimientos de q-pcr en modo sybr green y taqman. Se optimizaron los par\u00e1metros de la reacci\u00f3n de cuantificaci\u00f3n, y se evalu\u00f3 la especificidad para \u00abgrupo b. Cereus\u00bb, resultando m\u00e1s adecuado el procedimiento de sybr green q-pcr. A continuaci\u00f3n se ensay\u00f3 la capacidad para la detecci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n en alimentos contaminados artificialmente: huevo l\u00edquido y leche en polvo infantil. Como resultado el sistema desarrollado ha demostrado su capacidad para la cuantificaci\u00f3n de b. Cereus entre 105 y 100 ufc\/ml a partir de la matriz ensayada, que corresponde al mismo nivel que el m\u00e9todo de referencia por recuento en placa. dado que b. Cereus puede estar presente en alimentos tanto en forma vegetativa como esporulada, para su detecci\u00f3n por pcr se abord\u00f3, asimismo el desarrollo de un protocolo para asegurar la liberaci\u00f3n del dna a partir de esporas. Se parti\u00f3 de suspensiones calibradas de esporas que fueron sometidas a diferentes tratamientos: a) t\u00e9rmicos y b) adici\u00f3n de germinadores en diferentes combinaciones. Tras los tratamientos, se realiz\u00f3 la extracci\u00f3n de dna con dneasy tissue kit (qiagen) se cuantific\u00f3 y se evalu\u00f3 el rendimiento espectrofluorim\u00e9tricamente (picogreen, invitrogen), mediante pcr convencional y sybr-green q-pcr. El tratamiento de germinaci\u00f3n con 0,5 mm l-alanina-inosina result\u00f3 el m\u00e1s eficiente en suspensiones concentradas de esporas. Sin embargo, cuando se ensay\u00f3 en alimentos en alimentos inoculados (104-100 esporas\/ml), la extracci\u00f3n con dneasy tissue kit, sin necesidad de tratamientos previos, result\u00f3 satisfactorio. por \u00faltimo, se realiz\u00f3 una aproximaci\u00f3n cuantitativa para la detecci\u00f3n de formas viables de b. Cereus. Para ello se desarroll\u00f3 un procedimiento de pcr a tiempo real con transcripci\u00f3n inversa (rt-q-pcr) utilizando como diana el rna mensajero del gen pc-plc, como indicador del estado de viabilidad celular. El nivel de sensibilidad obtenido por rt-q-pcr es de 30 c\u00e9lulas\/reacci\u00f3n a partir de suspensiones celulares, y de 847 c\u00e9lulas\/reacci\u00f3n en presencia de huevo l\u00edquido. los sistemas de q-pcr y rt-q-pcr desarrollados en este estudio han mostrado ser eficientes para detectar la presencia de miembros del \u00abgrupo b. Cereus\u00bb en alimentos, al menos al mismo nivel que el m\u00e9todo de referencia, permitiendo adem\u00e1s la cuantificaci\u00f3n incluso de formas viables.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Desarrollo de metodos rapidos para el control de bacillus cereus en alimentos<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Desarrollo de metodos rapidos para el control de bacillus cereus en alimentos <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Juan  Francisco Martinez Blanch <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Universitat de val\u00e9ncia (estudi general)<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 12\/12\/2008<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Rosa Aznar Novella<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: javier Hern\u00e1ndez haba <\/li>\n<li>buenaventura Guamis lopez (vocal)<\/li>\n<li>david Rodriguez lazaro (vocal)<\/li>\n<li>Antonio Galvez del postigo ruiz (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Juan Francisco Martinez Blanch Bacillus cereus es un bacilo gram positivo esporulado contaminante habitual de alimentos tanto 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