{"id":91202,"date":"2018-03-11T10:09:53","date_gmt":"2018-03-11T10:09:53","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-bioqua%c2%admico-genetico-y-biotecnologico-de-las-rutas-metabolicas-responsables-de-la-degradacion-de-tiramina-y-de-acido-4-oh-fenilacetico-en-p-putida-u\/"},"modified":"2018-03-11T10:09:53","modified_gmt":"2018-03-11T10:09:53","slug":"estudio-bioqua%c2%admico-genetico-y-biotecnologico-de-las-rutas-metabolicas-responsables-de-la-degradacion-de-tiramina-y-de-acido-4-oh-fenilacetico-en-p-putida-u","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica-molecular\/estudio-bioqua%c2%admico-genetico-y-biotecnologico-de-las-rutas-metabolicas-responsables-de-la-degradacion-de-tiramina-y-de-acido-4-oh-fenilacetico-en-p-putida-u\/","title":{"rendered":"Estudio bioqu\u00edmico, gen\u00e9tico y biotecnol\u00f3gico de las rutas metab\u00f3licas responsables de la degradaci\u00f3n de tiramina y de \u00e1cido 4-oh-fenilac\u00e9tico en p. putida u"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Mario Arcos Rodr\u00edguez <\/strong><\/h2>\n<p>El objeto de esta tesis doctoral ha sido la identificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n de los genes responsables de la degradaci\u00f3n de tiramina y de \u00e1cido 4-oh-fenilac\u00e9tico, as\u00ed como de las prote\u00ednas codificadas en ellos. La tiramina es una importante amina biog\u00e9nica que cuando se acumula en el organismo puede desencadenar importantes efectos t\u00f3xicos. En resumen, las conclusiones m\u00e1s importantes de este trabajo se muestran a continuaci\u00f3n.  1.- El metabolismo aer\u00f3bico de la tiramina en p. Putida u tiene lugar mediante una ruta espec\u00edfica e independiente de la descrita para phetnh2.. 2.- La tiramina es degradada en p. Putida u mediante una serie de pasos metab\u00f3licos que conducen a su transformaci\u00f3n en 4-oh-phac, y, posteriormente, en 3,4dioh-phac. Este intermediario dihidroxilado sufrir\u00e1 la apertura del anillo arom\u00e1tico permitiendo su posterior transformaci\u00f3n en intermediarios generales. p. Putida3.- Se han identificado y caracterizado los genes que codifican las funciones necesarias para la degradaci\u00f3n de tiramina y de 4-oh-phac en  putida u. Estos genes (22) est\u00e1n incluidos en un segmento de dna de 25 kb y agrupados en dos clusters catab\u00f3licos (tyn y hpa) consecutivos. 4.- El cluster tyn es el responsable de la degradaci\u00f3n de tiramina a 4-oh-phac y est\u00e1 constituido por 8 genes que se extienden a lo largo de un fragmento de dna de 12 kb. Entre las prote\u00ednas codificadas por esta agrupaci\u00f3n gen\u00e9tica se encuentran: una tiramina oxidasa dependiente de fad (tynab); una 4-oh-fenilacetaldeh\u00eddo deshidrogenasa dependiente de nad+ (tync); una aminooxidasa (tynd) que participa en el proceso de desaminaci\u00f3n de la tiramina cuando la bacteria se cultiva a 37 \u00c2\u00bac y una prote\u00edna reguladora (tynr) que act\u00faa como activador de la expresi\u00f3n de las prote\u00ednas tynab y tync. Adem\u00e1s, en este cluster tyn se han identificado otros orfs que pudieran estar implicados en la degradaci\u00f3n de tiramina pero cuya participaci\u00f3n no parece ser imprescindible para que se lleve a cabo dicho proceso. Estos son los orf1 y orf3 que codifican sendas prote\u00ednas transportadoras y el orf2 que codifica una prote\u00edna cuya funci\u00f3n no ha sido asignada hasta el momento, pero que pudiera actuar acoplada a la reacci\u00f3n de oxidaci\u00f3n del 4-oh-fenilacetaldeh\u00eddo ejerciendo una funci\u00f3n de transferencia de electrones. 5.- El cluster hpa es el responsable de la degradaci\u00f3n del 4-oh-phac hasta intermediarios del metabolismo general (\u00e1cido pir\u00favico y semialdeh\u00eddo succ\u00ednico), y est\u00e1 constituido por 14 genes que se hallan en un fragmento de dna de 13 kb. Estos genes codifican las siguientes prote\u00ednas catab\u00f3licas: una 4-oh-phac monooxigenasa (hpabc); una dioxigenasa responsable de la apertura del anillo arom\u00e1tico del \u00e1cido homoprotocat\u00e9quico (hpad); una deshidrogenasa (hpae); una isomerasa (hpaf); una descarboxilasa (hpag1g2); una hidratasa (hpah) y una aldolasa (hpai). En el cluster hpa los genes reguladores est\u00e1n constituidos por dos copias del gen hpar (que codifica una prote\u00edna que act\u00faa como represor de los genes catab\u00f3licos hpag1g2edfhi), el gen hpaa que codifica el activador transcripcional del oper\u00f3n hpabc y un gen regulador, tetr, de funci\u00f3n desconocida. En p. Putida u existe adem\u00e1s, un transportador espec\u00edfico, codificado por un gen (hpax) integrante del cluster hpa, responsable del transporte del 4-oh-phac al interior de la c\u00e9lula, que mejora sustancialmente la eficiencia del transporte de este compuesto frente a la obtenida mediante fen\u00f3menos de difusi\u00f3n pasiva. 7.- Las rutas catab\u00f3licas tyn y hpa responsables de la degradaci\u00f3n de tiramina y 4-oh-phac en p. Putida u tambi\u00e9n son capaces de reconocer la dopamina y llevar a cabo su degradaci\u00f3n a trav\u00e9s del 3,4dioh-phac hasta \u00e1cido pir\u00favico y semialdeh\u00eddo succ\u00ednico. En cambio, este sistema enzim\u00e1tico no es capaz de degradar otras aminas tales como phetnh2, octopamina, histamina o triptamina. 8.- Se ha logrado clonar y expresar conjuntamente en un pl\u00e1smido (pk18::mob), los clusters tyn y hpa, dotando de este modo a las cepas transformadas con esta construcci\u00f3n de la capacidad necesaria para metabolizar tanto la tiramina como el 4-oh-phac. 9.- Se ha conseguido establecer, mediante la clonaci\u00f3n de una tirosina descarboxilasa de lactococcus lactis ipla 655, una nueva ruta catab\u00f3lica para l-tirosina en p. Putida u que cuenta con el 3,4dioh-phac como metabolito intermediario y que supone una alternativa a la existente en este microorganismo.  10- los resultados obtenidos nos permiten definir al 3,4dioh-phac como una mol\u00e9cula central en la que convergen las rutas perif\u00e9ricas implicadas en el catabolismo de diferentes compuestos, integrando una unidad catab\u00f3lica compleja (catabol\u00f3n). Estas rutas perif\u00e9ricas pueden ser tanto propias de la especie en consideraci\u00f3n, como es el caso de las rutas de degradaci\u00f3n de tiramina, 4-oh-phac y dopamina en p. Putida u, como aquellas que son adquiridas heter\u00f3logamente, como lo es el caso de la nueva ruta de degradaci\u00f3n de tirosina en este mismo organismo.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio bioqu\u00edmico, gen\u00e9tico y biotecnol\u00f3gico de las rutas metab\u00f3licas responsables de la degradaci\u00f3n de tiramina y de \u00e1cido 4-oh-fenilac\u00e9tico en p. putida u<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio bioqu\u00edmico, gen\u00e9tico y biotecnol\u00f3gico de las rutas metab\u00f3licas responsables de la degradaci\u00f3n de tiramina y de \u00e1cido 4-oh-fenilac\u00e9tico en p. putida u <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Mario Arcos Rodr\u00edguez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Le\u00f3n<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 16\/01\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jos\u00e9 Mar\u00eda Luengo Rodr\u00edguez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: angel Reglero chillon <\/li>\n<li>pablo Hueso p\u00e9rez (vocal)<\/li>\n<li>Juli\u00e1n Carlos Rivas gonzalo (vocal)<\/li>\n<li>baltasar Mi\u00f1ambres rodr\u00edguez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Mario Arcos Rodr\u00edguez El objeto de esta tesis doctoral ha sido la identificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n de los 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