{"id":91493,"date":"2009-02-02T00:00:00","date_gmt":"2009-02-02T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/avances-en-la-identificacion-y-la-caracterizacion-in-vitro-y-molecular-de-celulas-precursoras-en-tumores-neuroblasticos\/"},"modified":"2009-02-02T00:00:00","modified_gmt":"2009-02-02T00:00:00","slug":"avances-en-la-identificacion-y-la-caracterizacion-in-vitro-y-molecular-de-celulas-precursoras-en-tumores-neuroblasticos","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/barcelona\/avances-en-la-identificacion-y-la-caracterizacion-in-vitro-y-molecular-de-celulas-precursoras-en-tumores-neuroblasticos\/","title":{"rendered":"Avances en la identificaci\u00f3n y la caracterizaci\u00f3n in vitro y molecular de c\u00e9lulas precursoras en tumores neurobl\u00e1sticos"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Sandra Acosta Verdugo <\/strong><\/h2>\n<p>Los tumores neurobl\u00e1sticos son los tumores s\u00f3lidos m\u00e1s frecuentes de la infancia y derivan de las c\u00e9lulas de la cresta neural (ccn). Tanto, in vitro como in vivo, se han podido identificar una subpoblaci\u00f3n celular neurobl\u00e1stica y otra glial. Adem\u00e1s in vitro se han identificado c\u00e9lulas con caracter\u00edsticas intermedias entre ambos subtipos, de manera que se han propuesto como posibles c\u00e9lulas iniciadoras de tumor (tic) (ross y spengler, 2007). El objetivo de este trabajo fue investigar la existencia de una subpoblaci\u00f3n de c\u00e9lulas precursoras en tumores neurobl\u00e1sticos mediante la identificaci\u00f3n de c\u00e9lulas bipotenciales y su posterior caracterizaci\u00f3n. en primer lugar, las l\u00edneas celulares de los diferentes subtipos (neurobl\u00e1stico (n), glial (s) e intermedio (i)) se caracterizaron morfol\u00f3gica, inmunofenot\u00edpica y molecularmente, seg\u00fan marcadores caracter\u00edsticos de las c\u00e9lulas de la cresta neural y de los diferentes subtipos celulares. Los resultados obtenidos indicaron que todas l\u00edneas celulares expresaban las prote\u00ednas de la cresta neural analizadas, aunque con menor intensidad en el subtipo s. La expresi\u00f3n del gangliosido de membrana gd2 y de la calciclina (s100a6) permitieron discriminar fenot\u00edpica y molecularmente entre los fenotipos neurobl\u00e1stico y glial, respectivamente. La inducci\u00f3n de la diferenciaci\u00f3n neuronal y glial, con \u00e1cido all-trans retinoico (atra) y bromodesoxiuridina (brdu) mostr\u00f3 que los subtipos n e i manten\u00edan la capacidad de diferenciar tanto en el linaje neuronal como glial, mientras que las l\u00edneas de subtipo s parec\u00edan comprometidas en la diferenciaci\u00f3n del linaje glial. para estudiar la presencia de c\u00e9lulas con caracter\u00edsticas bipotenciales en los tumores neurobl\u00e1sticos, se analiz\u00f3 inmunofenot\u00edpicamente la expresi\u00f3n de gd2 y calciclina en criosecciones de estos tumores al diagn\u00f3stico, post-tratamiento y de met\u00e1stasis. En todas las muestras analizadas, se observ\u00f3 como exist\u00eda una subpoblaci\u00f3n neurobl\u00e1stica mayoritaria gd2+\/calciclina- y otra gd2+\/calciclina+, que presentaba mayor preValencia en las regiones perivasculares y en los neuroblastomas de pron\u00f3stico favorable. Se identificaron regiones estromales mayoritariamente gd2-\/calciclina+, y otras gd2+\/calciclina+, en ocasiones conteniendo vasos con tinci\u00f3n concomitante de ambos marcadores, gd2 y calciclina, sugiriendo un posible origen tumoral de algunas regiones estromales y vasos. Sin embargo, estos neuroblastos gd2+\/calcicliina+ no mostraron relaci\u00f3n con erbb3 y sox10, dos marcadores de linaje glial. Durante la diferenciaci\u00f3n con atra en las l\u00edneas celulares neurobl\u00e1sticas aparecen neuroblastos con expresi\u00f3n concomitante de gd2 y calciclina, que posteriormente adquieren morfolog\u00eda s-like, sugiriendo que los neuroblastos gd2+\/calciclina+ son neuroblastos en un estadio inicial de la diferenciaci\u00f3n glial. las diferentes subpoblaciones identificadas seg\u00fan el marcaje de gd2 y calciclina fueron separadas por citometr\u00eda de flujo y se analiz\u00f3 la amplificaci\u00f3n del oncog\u00e9n nmyc, una de las anomal\u00edas g\u00e9nicas identificadas m\u00e1s frecuentemente en neuroblastoma. Se observ\u00f3 c\u00f3mo todas las subpoblaciones (gd2+\/calciclina-; gd2+\/calciclina+; gd2-\/calciclina+) pose\u00edan la amplificaci\u00f3n del oncog\u00e9n nmyc, indicando que las diferentes subpoblaciones tumorales provienen de una c\u00e9lula originaria com\u00fan. para obtener una buena representaci\u00f3n celular en los cultivos primarios derivados de tumores neurobl\u00e1sticos se optimiz\u00f3 el protocolo de cultivo utilizando colagenasa iv para la disgregaci\u00f3n celular y, como medio de cultivo, rpmi 1640 suplementado con el 10% de suero bovino fetal. Se observ\u00f3 que los tumores m\u00e1s indiferenciados y de pron\u00f3stico desfavorable estaban enriquecidos en c\u00e9lulas neurobl\u00e1sticas. Se observ\u00f3 que la subpoblaci\u00f3n de neurosferas derivada del cultivo primario conten\u00eda una gran variabilidad seg\u00fan la expresi\u00f3n de los marcadores gd2 y calciclina. Adem\u00e1s, a partir del protocolo de cultivo optimizado en este trabajo, se obtuvieren 7 l\u00edneas celulares continuas compuestas mayoritariamente por neuroblastos. en conclusi\u00f3n, en este trabajo se han caracterizado los diferentes subtipos de l\u00edneas celulares de neuroblastoma encontr\u00e1ndose que todos ellos representan un estado indiferenciado aunque no equivalente. Se ha identificado una subpoblaci\u00f3n neurobl\u00e1stica bipotencial en los neuroblastomas, prevalente en los tumores de pron\u00f3stico m\u00e1s favorable y asociado a la diferenciaci\u00f3n estromal. Adem\u00e1s, estas c\u00e9lulas comparten una c\u00e9lula originaria com\u00fan con las regiones estromales y las neurobl\u00e1sticas. En \u00faltima instancia, se ha optimizado el protocolo de cultivo primario derivado de tumores neurobl\u00e1sticos.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Avances en la identificaci\u00f3n y la caracterizaci\u00f3n in vitro y molecular de c\u00e9lulas precursoras en tumores neurobl\u00e1sticos<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Avances en la identificaci\u00f3n y la caracterizaci\u00f3n in vitro y molecular de c\u00e9lulas precursoras en tumores neurobl\u00e1sticos <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Sandra Acosta Verdugo <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Barcelona<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 02\/02\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jaume Mora Graupera<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: enrique De \u00e1lava casado <\/li>\n<li>samuel Navarro fos (vocal)<\/li>\n<li>  (vocal)<\/li>\n<li>  (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Sandra Acosta Verdugo Los tumores neurobl\u00e1sticos son los tumores s\u00f3lidos m\u00e1s frecuentes de la infancia y derivan 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