{"id":91769,"date":"2018-03-11T10:10:35","date_gmt":"2018-03-11T10:10:35","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/bases-moleculares-de-la-regulacion-transcripcional-de-la-ruta-de-degradacion-del-acido-3-hidroxifenilpropionico-en-escherichia-coli\/"},"modified":"2018-03-11T10:10:35","modified_gmt":"2018-03-11T10:10:35","slug":"bases-moleculares-de-la-regulacion-transcripcional-de-la-ruta-de-degradacion-del-acido-3-hidroxifenilpropionico-en-escherichia-coli","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/bases-moleculares-de-la-regulacion-transcripcional-de-la-ruta-de-degradacion-del-acido-3-hidroxifenilpropionico-en-escherichia-coli\/","title":{"rendered":"Bases moleculares de la regulaci\u00f3n transcripcional de la ruta de degradaci\u00f3n del \u00e1cido 3 &#8211; hidroxifenilpropi\u00f3nico en escherichia coli."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Isabel Mar\u00eda Manso Cobos <\/strong><\/h2>\n<p>En este trabajo se ha caracterizado el regulador implicado en la ruta de degradaci\u00f3n del \u00e1cido 3-hidroxifenilpropi\u00f3nico (3hpp) de escherichia coli k-12. Al comienzo de este trabajo se llev\u00f3 a cabo la purificaci\u00f3n de la prote\u00edna mhpr fusionada a una c ola de seis histidinas mediante cromatograf\u00eda de afinidad obteni\u00e9ndose prote\u00edna absolutamente pura y muy concentrada (7 mg\/ml). Se ha comprobado su actividad tanto in vivo como in vitro en presencia y ausencia del inductor 3hpp. Hemos obtenido un mod elo estructural bas\u00e1ndonos en su identidad con un posible regulador transcripcional recientemente cristalizado. Los resultados obtenidos mediante ultracentrifugaci\u00f3n anal\u00edtica sugieren que la prote\u00edna podr\u00eda ser un d\u00edmero y un tetr\u00e1mero en ausencia y  presencia de dna, respectivamente. Mediante ensayos de retardo en gel y experimentos de transcrici\u00f3n in vitro hemos demostrado la actividad de la prote\u00edna mhpr purificada. Mediante ensayos de fluorescencia hemos estudiado la interacci\u00f3n de la prote\u00ed na mhpr con sus diferentes ligandos. Adem\u00e1s, mediante dicroismo circular hemos determinado la estructura secundaria, termoestabilidad y aspectos relacionados con la interacci\u00f3n prote\u00edna-ligando. Para modificar la actividad de la prote\u00edna mhpr y obten er informaci\u00f3n de los residuos clave implicados en el mecanismo de acci\u00f3n, se introdujeron mutaciones en la secuencia del gen mhpr mediante una t\u00e9cnica de mutag\u00e9nesis al azar. Aplicando un sistema de selecci\u00f3n se han detectado cepas productoras de pr ote\u00ednas mhpr mutantes con su actividad alterada y nos hemos centrado en aquellas que producen prote\u00ednas m\u00e1s activas que la prote\u00edna nativa. Estas prote\u00ednas mutantes han sido caracterizadas por las mismas t\u00e9cnicas empleadas  en el estudio de la prote\u00ed na nativa. por otro lado se ha estudiado la regulaci\u00f3n global de la ruta de degradaci\u00f3n del \u00e1cido 3hpp. Mediante ensayos de transcripci\u00f3n in vitro se ha demostrado que la activaci\u00f3n del promotor pr del cluster mhp depende de la presencia de crp. La u ni\u00f3n de crp al promotor pr se ha confirmado mediante footprinting con permanganato pot\u00e1sico, c\u00f3mprobandose adem\u00e1s que la presencia de crp es absolutamente necesaria para la formaci\u00f3n de la burbuja de iniciaci\u00f3n. Tambi\u00e9n se ha comprobado in vitro el e fecto sin\u00e9rgico de crp sobre la transcripci\u00f3n mediada por el promotor pa. adem\u00e1s, se ha estudiado la prote\u00edna transportadora de 3hpp (mhpt). Se ha demostrado que la expresi\u00f3n del gen transportador mhpt del cluster mhp tiene lugar a partir del promoto<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Bases moleculares de la regulaci\u00f3n transcripcional de la ruta de degradaci\u00f3n del \u00e1cido 3 &#8211; hidroxifenilpropi\u00f3nico en escherichia coli.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Bases moleculares de la regulaci\u00f3n transcripcional de la ruta de degradaci\u00f3n del \u00e1cido 3 &#8211; hidroxifenilpropi\u00f3nico en escherichia coli. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Isabel Mar\u00eda Manso Cobos <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Complutense de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 20\/02\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Beatriz Gal\u00e1n Sicilia<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: julian Perera gonzalez <\/li>\n<li>Fernando Rojo de castro (vocal)<\/li>\n<li>Jes\u00fas Miguel Sanz morales (vocal)<\/li>\n<li>eduardo Santero santurino (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Isabel Mar\u00eda Manso Cobos En este trabajo se ha caracterizado el regulador implicado en la ruta de 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