{"id":92073,"date":"2009-06-03T00:00:00","date_gmt":"2009-06-03T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/deteccion-y-cuantificacion-de-escherichia-coli-o157h7-listeria-monocytogenes-salmonella-spp-y-staphylococcus-aureus-en-alimentos-vegetales-mediante-pcr-a-tiempo-real\/"},"modified":"2009-06-03T00:00:00","modified_gmt":"2009-06-03T00:00:00","slug":"deteccion-y-cuantificacion-de-escherichia-coli-o157h7-listeria-monocytogenes-salmonella-spp-y-staphylococcus-aureus-en-alimentos-vegetales-mediante-pcr-a-tiempo-real","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/microbiologia\/deteccion-y-cuantificacion-de-escherichia-coli-o157h7-listeria-monocytogenes-salmonella-spp-y-staphylococcus-aureus-en-alimentos-vegetales-mediante-pcr-a-tiempo-real\/","title":{"rendered":"Detecci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n de escherichia coli o157:h7, listeria monocytogenes, salmonella spp. y staphylococcus aureus en alimentos vegetales mediante pcr a tiempo real"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Patricia Elizaqu\u00edvel B\u00e1rcenas <\/strong><\/h2>\n<p>La detecci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n de microorganismos pat\u00f3genos en alimentos es uno de los grandes retos a los que se enfrenta la industria alimentaria actualmente. Para ello, la aplicaci\u00f3n de controles microbiol\u00f3gicos a lo largo de toda la cadena de procesado es imprescindible para minimizar riesgos y garantizar la calidad y seguridad de los productos. Los m\u00e9todos tradicionales para la detecci\u00f3n de pat\u00f3genos en alimentos se basan en el aislamiento e identificaci\u00f3n de colonias en medios selectivos tras uno o varios pasos de enriquecimiento lo que alarga el proceso y, en ocasiones, el resultado no es concluyente. Como alternativa destacan los m\u00e9todos inmunol\u00f3gicos y los de pcr. Entre los primeros, el vidas\u00c2\u00ae es uno de los m\u00e1s utilizados por las empresas de alimentos por su facilidad de ensayo. Por otra parte, las t\u00e9cnicas de pcr, constituyen una buena alternativa por su rapidez, sensibilidad y precisi\u00f3n. La pcr a tiempo real (rti-pcr), adem\u00e1s, ofrece la posibilidad de cuantificar los microorganismos presentes en la muestra automatizando el proceso, lo que permite procesar un n\u00famero elevado de muestras, reduciendo los problemas de contaminaciones posteriores. en este trabajo se ha aplicado la rti-pcr, para la detecci\u00f3n de e. Coli o157:h7, l. Monocytogenes, salmonella spp. Y sta. Aureus, evalu\u00e1ndose asimismo su utilidad como prueba diagn\u00f3stica en el control microbiol\u00f3gico de alimentos. La comparaci\u00f3n de cuatro m\u00e9todos comerciales de extracci\u00f3n de dna, realizada en base a la sensibilidad en la detecci\u00f3n por pcr, demostr\u00f3 que el m\u00e9todo dneasy tissue kit es el m\u00e1s eficiente para la extracci\u00f3n de dna de los cuatro pat\u00f3genos, en las tres matrices vegetales ensayadas. La aplicaci\u00f3n directa de la rti-pcr en muestras de alimentos de contaminaci\u00f3n natural permiti\u00f3 la cuantificaci\u00f3n de los pat\u00f3genos presentes en el 67 % de las muestras que hab\u00edan resultado positivas por pcr convencional tras el enriquecimiento correspondiente, revelando que salmonella y e. Coli o157:h7 se encuentran generalmente en niveles de 1000 ufc\/g, l. Monocytogenes de 100 ufc\/g y sta. Aureus de 10 ufc\/g. Las muestras restantes (33%) presentaron niveles inferiores a 10 ufc\/g. La comparaci\u00f3n de la rti-pcr directa y el procedimiento mini-vidas para la detecci\u00f3n de e. Coli o157:h7, l. Monocytogenes y salmonella determin\u00f3 que ambas t\u00e9cnicas presentan una especificidad similar pero la rti-pcr se comporta mejor en cuanto a \u00absensibilidad\u00bb y \u00abseguridad\u00bb a\u00fan asumiendo que su aplicaci\u00f3n directa, sin enriquecimiento, estar\u00e1 ofreciendo un resultado sesgado con posibles \u00abfalsos negativos\u00bb. En base a estos resultados, se propone la utilizaci\u00f3n de la rti-pcr como t\u00e9cnica para rastrear la presencia de pat\u00f3genos en el an\u00e1lisis rutinario de alimentos ya que ha demostrado ser una t\u00e9cnica r\u00e1pida y sensible que permite completar el an\u00e1lisis en unas 5-6 horas, en lugar de las 24-72 horas que requiere el mini-vidas. S\u00f3lo las muestras negativas se analizar\u00edan por pcr, tras enriquecimiento, para asegurar la ausencia del pat\u00f3geno. adem\u00e1s, se dise\u00f1\u00f3 un nuevo sistema de cebadores y sonda taqman para salmonella spp. Comprob\u00e1ndose su especificidad y sensibilidad en la detecci\u00f3n en alimentos por rti-pcr. Combinando este sistema con los ensayados para e. Coli o157:h7 y sta. Aureus, se ha puesto a punto una reacci\u00f3n de rti-pcr m\u00faltiple para la detecci\u00f3n simult\u00e1nea y cuantitativa de los tres pat\u00f3genos. La aplicaci\u00f3n de la rti-pcr m\u00faltiple, tras un paso enriquecimiento de tan s\u00f3lo 6 horas permite la detecci\u00f3n de hasta 1 c\u00e9lula de cada uno de los pat\u00f3genos en 25 g. Por lo tanto, queda demostrada su validez como t\u00e9cnica anal\u00edtica cuando la legislaci\u00f3n exige \u00abausencia\u00bb del pat\u00f3geno en 25 g, como es el caso de salmonella y e. Coli o157:h7 o de sta. Aureus en algunos alimentos.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Detecci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n de escherichia coli o157:h7, listeria monocytogenes, salmonella spp. y staphylococcus aureus en alimentos vegetales mediante pcr a tiempo real<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Detecci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n de escherichia coli o157:h7, listeria monocytogenes, salmonella spp. y staphylococcus aureus en alimentos vegetales mediante pcr a tiempo real <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Patricia Elizaqu\u00edvel B\u00e1rcenas <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Universitat de val\u00e9ncia (estudi general)<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 06\/03\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Rosa Aznar Novella<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: javier Hern\u00e1ndez haba <\/li>\n<li>david Rodriguez lazaro (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda  Jos\u00e9 Ocio zapata (vocal)<\/li>\n<li>teresa Aymerich calvet (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Patricia Elizaqu\u00edvel B\u00e1rcenas La detecci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n de microorganismos pat\u00f3genos en alimentos es uno de los grandes 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