{"id":92501,"date":"2018-03-11T10:11:28","date_gmt":"2018-03-11T10:11:28","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/caracterizacion-de-diferentes-sitios-de-oxidacion-de-sustratos-en-la-peroxidasa-versatil-de-pleurotus-eryngii\/"},"modified":"2018-03-11T10:11:28","modified_gmt":"2018-03-11T10:11:28","slug":"caracterizacion-de-diferentes-sitios-de-oxidacion-de-sustratos-en-la-peroxidasa-versatil-de-pleurotus-eryngii","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/caracterizacion-de-diferentes-sitios-de-oxidacion-de-sustratos-en-la-peroxidasa-versatil-de-pleurotus-eryngii\/","title":{"rendered":"Caracterizaci\u00f3n de diferentes sitios de oxidaci\u00f3n de sustratos en la peroxidasa vers\u00e1til de pleurotus eryngii"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Mar\u00eda Morales Esteban <\/strong><\/h2>\n<p>La peroxidasa vers\u00e1til (vp) se caracteriza porque combina propiedades catal\u00edticas de los otros dos tipos de peroxidasas ligninol\u00edticas, la lignina peroxidasa (lip) y la manganeso peroxidasa (mnp). En este trabajo se describen los sitios de uni\u00f3n a su stratos, as\u00ed como los mecanismos de acci\u00f3n de la vp de pleurotus eryngii. Para ello, utilizando como base la estructura de la isoenzima vpl (variante al\u00e9lica vpl2), se dise\u00f1aron una serie de variantes modificadas obtenidas por mutag\u00e9nesis dirigida, s eguida de su expresi\u00f3n en escherichia coli y activaci\u00f3n in vitro. Las variantes estudiadas correspondieron a los distintos sitios de oxidaci\u00f3n de sustratos: i) el hipot\u00e9tico sitio de oxidaci\u00f3n del mn2 ; ii) el tript\u00f3fano catal\u00edtico, sustituy\u00e9ndolo po r otros residuos tambi\u00e9n capaces de formar radicales; iii) el entorno del tript\u00f3fano catal\u00edtico; y iv) el canal principal de acceso al hemo, como posible sitio de oxidaci\u00f3n de fenoles, entre otros. el estudio del sitio de oxidaci\u00f3n del mn2  se realiz \u00f3 mediante la caracterizaci\u00f3n de variantes mutadas en los residuos hom\u00f3logos a los implicados en la oxidaci\u00f3n de este sustrato por la mnp. Los resultados cin\u00e9ticos evidenciaron que el sitio de uni\u00f3n al mn2  de la vp est\u00e1 constituido por los residuos \u00e1cidos glu36, glu40 y asp175, junto con el propionato interno del hemo. Adem\u00e1s se realizaorn estudios cristalogr\u00e1ficos en los que se demostr\u00f3 que los residuos glu36 y glu40 del sitio de uni\u00f3n al mn2  de la vp presentan cierta movilidad, permitiendo o  no el acceso al hemo. la oxidaci\u00f3n de los compuestos arom\u00e1ticos de alto potencial r\u00e9dox tiene lugar a trav\u00e9s del radical del trp164, formado gracias a una ruta de transporte electr\u00f3nico de largo recorrido desde el hemo. utilizando resonancia paramag n\u00e9tica electr\u00f3nica (epr) de baja temperatura fue posible detectar por primera vez en una peroxidasa ligninol\u00edtica dicho radical de la prote\u00edna en las dos formas intermedias del ciclo catal\u00edtico (compuestos i y ii). Se realizaron variantes en las que se sustituy\u00f3 el trp164 por otros residuos susceptibles de formar radicales (his y tyr). Se comprob\u00f3 que el \u00fanico de estos residuos eficaz en la oxidaci\u00f3n de los sustratos es el trp164. Sin embargo, por epr se comprob\u00f3 que la variante w164y forma un r adical tirosilo, tanto en su compuesto i como en el ii, siendo el primero de ellos capaz de oxidar el alcohol veratr\u00edlico. Sin embargo, esta variante no presenta actividad catal\u00edtica en estado estacionario ni se autorreduce. Este efecto no se debe a<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Caracterizaci\u00f3n de diferentes sitios de oxidaci\u00f3n de sustratos en la peroxidasa vers\u00e1til de pleurotus eryngii<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Caracterizaci\u00f3n de diferentes sitios de oxidaci\u00f3n de sustratos en la peroxidasa vers\u00e1til de pleurotus eryngii <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Mar\u00eda Morales Esteban <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Complutense de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 27\/03\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Francisco Javier Ruiz Due\u00f1as<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: jos\u00e9 Mart\u00ednez peinado <\/li>\n<li>Jos\u00e9 neptuno Rodriguez lopez (vocal)<\/li>\n<li>Miguel Alcalde galeote (vocal)<\/li>\n<li>ignacio Fita rodriguez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Mar\u00eda Morales Esteban La peroxidasa vers\u00e1til (vp) se caracteriza porque combina propiedades catal\u00edticas de los otros dos [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center 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