{"id":92746,"date":"2009-03-04T00:00:00","date_gmt":"2009-03-04T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/identificacion-de-potenciales-biomarcadores-para-el-cancer-colorrectal-mediante-tecnicas-proteomicas\/"},"modified":"2009-03-04T00:00:00","modified_gmt":"2009-03-04T00:00:00","slug":"identificacion-de-potenciales-biomarcadores-para-el-cancer-colorrectal-mediante-tecnicas-proteomicas","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/oncologia-clinica\/identificacion-de-potenciales-biomarcadores-para-el-cancer-colorrectal-mediante-tecnicas-proteomicas\/","title":{"rendered":"Identificaci\u00f3n de potenciales biomarcadores para el c\u00e1ncer colorrectal mediante t\u00e9cnicas prote\u00f3micas"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Paula \u00e1lvarez Chaver <\/strong><\/h2>\n<p>El c\u00e1ncer colorrectal (ccr) es una de las neoplasias m\u00e1s frecuentes en europa, situ\u00e1ndose en el segundo puesto tanto en incidencia como en mortalidad. Por ello, resulta crucial la b\u00fasqueda de nuevos marcadores tumorales que, adem\u00e1s de contribuir a mejorar tanto el diagn\u00f3stico como el pron\u00f3stico de esta enfermedad, permitan realizar un seguimiento adecuado de la patolog\u00eda. Adem\u00e1s, es necesario encontrar terapias alternativas a las empleadas actualmente para tratar el ccr de forma m\u00e1s adecuada. En el \u00e1mbito de la investigaci\u00f3n biom\u00e9dica una de las \u00e1reas m\u00e1s prometedoras para abordar esta b\u00fasqueda es la prote\u00f3mica, por lo que en esta tesis doctoral se han empleado t\u00e9cnicas prote\u00f3micas para detectar prote\u00ednas con utilidad cl\u00ednica para el ccr. se ha llevado a cabo un estudio prote\u00f3mico de expresi\u00f3n diferencial con el objetivo de identificar y cuantificar prote\u00ednas con un nivel de expresi\u00f3n alterado como consecuencia del estado patol\u00f3gico. En primer lugar se emple\u00f3 una estrategia habitual en prote\u00f3mica, que consiste en el uso de un m\u00e9todo de prefraccionamiento de la muestra previo a la separaci\u00f3n electrofor\u00e9tica. Esta estrategia permite enriquecer la muestra en un grupo de prote\u00ednas de inter\u00e9s, o simplemente la divide en varias fracciones en funci\u00f3n de una determinada caracter\u00edstica proteica. As\u00ed se mejora la resoluci\u00f3n de los mapas y se consigue detectar mayor n\u00famero de prote\u00ednas, incluyendo las denominadas prote\u00ednas de baja abundancia que tienen especial importancia en el descubrimiento de nuevos marcadores tumorales y dianas terap\u00e9uticas. A continuaci\u00f3n, se realizaron y compararon mapas bidimensionales de prote\u00ednas de mucosa sana y tumoral de pacientes con ccr. Por \u00faltimo, se emplearon criterios estad\u00edsticos y biol\u00f3gicos para seleccionar entre las prote\u00ednas con expresi\u00f3n alterada aquellas con potencial valor en cl\u00ednica, realizando un estudio prote\u00f3mico m\u00e1s detallado de las mismas. el protocolo de fraccionamiento de la muestra que hemos empleado en este trabajo se basa en el uso del detergente triton x-114, obteni\u00e9ndose dos fracciones proteicas: una fracci\u00f3n enriquecida en prote\u00ednas asociadas a membrana y otra enriquecida en prote\u00ednas solubles. La inmunodetecci\u00f3n de una prote\u00edna espec\u00edfica de membrana (caveolina-1) permiti\u00f3 comprobar que el fraccionamiento hab\u00eda sido eficaz. Por otro lado, comprobamos que todas las prote\u00ednas identificadas en la fracci\u00f3n soluble hab\u00edan sido descritas previamente como prote\u00ednas solubles que se localizan en distintos compartimentos celulares, como el citosol o el n\u00facleo, mientras que la mayor\u00eda de las prote\u00ednas identificadas en la fracci\u00f3n de membrana hab\u00edan sido descritas como prote\u00ednas integrales de membrana o como prote\u00ednas asociadas a membrana.  una vez realizado el an\u00e1lisis de los mapas proteicos y la identificaci\u00f3n de las prote\u00ednas cuya expresi\u00f3n variaba en los tumores hemos comprobado que, por un lado, el proceso tumoral afecta a prote\u00ednas, tanto solubles como de membrana, implicadas en la transducci\u00f3n de se\u00f1ales, la apoptosis, la proliferaci\u00f3n celular, la angiog\u00e9nesis y la met\u00e1stasis. Por ello, estas prote\u00ednas pueden ser consideradas potenciales marcadores tumorales para el c\u00e1ncer colorrectal. Por otro lado, hemos corroborado que la metodolog\u00eda empleada en este trabajo es adecuada como herramienta para abordar la b\u00fasqueda de biomarcadores, ya que algunas de las prote\u00ednas cuya expresi\u00f3n se encontr\u00f3 alterada en los tumores colorrectales hab\u00edan sido propuestas previamente como candidatas a marcadores tumorales para esta patolog\u00eda. Es el caso de la mortalina, de las prote\u00ednas antioxidantes super\u00f3xido dismutasa 1 (sod1) y glutati\u00f3n s-transferasa p1-1 (gstp1-1), del factor de crecimiento endotelial derivado de plaquetas (pd-ecgf) y de las prote\u00ednas de uni\u00f3n al calcio s100a6 y s100a11. A\u00fan m\u00e1s interesante ha sido encontrar prote\u00ednas con un nivel de expresi\u00f3n alterado en tumores, que no se hab\u00edan relacionado previamente con el ccr, como la 3-hidroxi-isobutirato deshidrogenasa, la piridoxal quinasa, la chaperona a espec\u00edfica de tubulina o la prote\u00edna de uni\u00f3n a retinoblastoma 4, entre otras. en la fracci\u00f3n soluble se detectaron 91 prote\u00ednas alteradas, de las cuales 49 presentaban un incremento de expresi\u00f3n en los tumores y 42 un descenso. Debido al elevado n\u00famero de prote\u00ednas cuyos niveles variaban, \u00fanicamente se analizaron mediante espectrometr\u00eda de masas un conjunto de 18 prote\u00ednas seleccionadas mediante estad\u00edstica multivariante (17 con un incremento de expresi\u00f3n en los tumores y solamente una con descenso). Se identific\u00f3 pr\u00e1cticamente el 90% de ellas, encontr\u00e1ndose prote\u00ednas con actividad enzim\u00e1tica (pd-ecgf\/fosforilasa de timidina, piridoxal quinasa, nucle\u00f3sido difosfato quinasa a\/factor inhibidor de met\u00e1stasis nm23-h1, enolasa 1, entre otras), prote\u00ednas antioxidantes (peroxiredoxinas 2 y 3, prote\u00edna dj-1), prote\u00ednas implicadas en rutas de se\u00f1alizaci\u00f3n celular (14-3-3 zeta), prote\u00ednas del metabolismo de la cromatina (prote\u00edna de uni\u00f3n a retinoblastoma 4) y del plegamiento de la tubulina (chaperona a espec\u00edfica de tubulina), y prote\u00ednas de uni\u00f3n a calcio (calgizarina o s100a11).  la prote\u00edna de uni\u00f3n a retinoblastoma 4, la prote\u00edna dj-1, la prote\u00edna 14-3-3 zeta y la nucle\u00f3sido difosfato quinasa a fueron seleccionadas, en funci\u00f3n de los resultados obtenidos mediante estad\u00edstica multivariante y de su implicaci\u00f3n documentada en el c\u00e1ncer, como las mejores candidatas para comprobar su alteraci\u00f3n y comenzar un estudio dirigido a evaluar su utilidad como biomarcadores para el ccr. La prote\u00edna de uni\u00f3n a retinoblastoma 4 participa en el metabolismo de la cromatina, mientras que dj-1 es una prote\u00edna con actividad antioxidante y oncog\u00e9nica. La prote\u00edna 14-3-3 zeta modula la interacci\u00f3n entre distintos intermediarios de se\u00f1alizaci\u00f3n intracelular y presenta un importante papel oncog\u00e9nico, y la nucle\u00f3sido difosfato quinasa a est\u00e1 relacionada con la met\u00e1stasis. En todos los casos, utilizando t\u00e9cnicas de inmunodetecci\u00f3n, se corrobor\u00f3 la alteraci\u00f3n en los niveles de expresi\u00f3n observada en el estudio de electroforesis bidimensional, comprob\u00e1ndose adem\u00e1s que, en la mayor\u00eda de los casos, la variaci\u00f3n observada mediante ambas t\u00e9cnicas era muy similar.  en la fracci\u00f3n de membrana se detectaron 41 prote\u00ednas alteradas en relaci\u00f3n con la patolog\u00eda, 30 con un descenso en su expresi\u00f3n en los tumores y 11 con un incremento, de las cuales se identificaron el 56% mediante espectrometr\u00eda de masas. Estas prote\u00ednas se agruparon en prote\u00ednas del citoesqueleto (vimentina, citoqueratinas 10 y 18\/19, desmina, alfa-actina y beta-actina), chaperonas (prote\u00edna de 78 kda regulada por glucosa, prote\u00edna de estr\u00e9s de 70 kda o mortalina, prohibitina, prote\u00edna de choque t\u00e9rmico de 27 kda), prote\u00ednas de uni\u00f3n a calcio (calciclina o s100a6), prote\u00ednas antioxidantes (super\u00f3xido dismutasa [cu-zn], glutati\u00f3n s-transferasa p1-1), prote\u00ednas de generaci\u00f3n de energ\u00eda (cadena beta de la atp sintasa mitocondrial) y prote\u00ednas de transporte (cadena beta de la hemoglobina, prote\u00edna intestinal de uni\u00f3n a \u00e1cidos grasos, apolipoprote\u00edna a-i), entre otras. empleando pruebas estad\u00edsticas multivariantes fue posible seleccionar dos prote\u00ednas (prohibitina y vimentina), cuyo patr\u00f3n de expresi\u00f3n permit\u00eda diferenciar el estado patol\u00f3gico del sano, constituyendo un panel de potenciales biomarcadores. La vimentina es una prote\u00edna del citoesqueleto que ha sido recientemente relacionada con la se\u00f1alizaci\u00f3n, la adhesi\u00f3n y la migraci\u00f3n celular, mientras que a la prohibitina se le han adjudicado funciones relacionadas con el crecimiento celular, el envejecimiento y la carcinog\u00e9nesis. Por ello, se procedi\u00f3 a comprobar la alteraci\u00f3n de estas prote\u00ednas mediante western blot en una y dos dimensiones. La vimentina present\u00f3 un descenso de expresi\u00f3n en los mapas bidimensionales de los tumores y, mediante western blot, se detectaron diversas isoformas de masa molecular (mr) y punto isoel\u00e9trico (pi), todas ellas con una expresi\u00f3n disminu\u00edda o ausente en los tumores. Con la misma metodolog\u00eda se confirm\u00f3 el incremento de expresi\u00f3n de la prohibitina detectado en los mapas bidimensionales de los tumores, observ\u00e1ndose igualmente distintas isoformas de mr y pi.  por \u00faltimo, hemos comprobado que algunas de las prote\u00ednas seleccionadas pueden detectarse en el suero de pacientes con ccr. Es el caso de las prote\u00ednas dj-1, nucle\u00f3sido difosfato quinasa a y prohibitina, observ\u00e1ndose una relaci\u00f3n entre sus niveles s\u00e9ricos y la met\u00e1stasis a distancia que podr\u00eda ser \u00fatil en cl\u00ednica para el seguimiento del ccr. a modo de conclusi\u00f3n, los resultados obtenidos en esta tesis doctoral han demostrado la utilidad y efectividad de la metodolog\u00eda empleada para llevar a cabo un estudio prote\u00f3mico dirigido a la b\u00fasqueda de nuevos marcadores tumorales y dianas terap\u00e9uticas para el ccr. Entre las prote\u00ednas cuya expresi\u00f3n se encontr\u00f3 alterada consideramos que, por su marcado incremento de expresi\u00f3n en los tumores, por su relevancia en el an\u00e1lisis estad\u00edstico multivariante y por la relaci\u00f3n de sus niveles s\u00e9ricos con la met\u00e1stasis tumoral, la nucle\u00f3sido difosfato quinasa a es la mejor candidata para ser evaluada como marcador tumoral para esta patolog\u00eda.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Identificaci\u00f3n de potenciales biomarcadores para el c\u00e1ncer colorrectal mediante t\u00e9cnicas prote\u00f3micas<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Identificaci\u00f3n de potenciales biomarcadores para el c\u00e1ncer colorrectal mediante t\u00e9cnicas prote\u00f3micas <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Paula \u00e1lvarez Chaver <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Vigo<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 03\/04\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Mar\u00eda Paez De La Cadena<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: mercedes Butr\u00f3n vila <\/li>\n<li>cristina Ruiz romero (vocal)<\/li>\n<li>Francisco Blanco Garc\u00eda (vocal)<\/li>\n<li>carmen S\u00e1nchez bernal (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Paula \u00e1lvarez Chaver El c\u00e1ncer colorrectal (ccr) es una de las neoplasias m\u00e1s frecuentes en europa, situ\u00e1ndose 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