{"id":93306,"date":"2018-03-11T10:12:39","date_gmt":"2018-03-11T10:12:39","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-de-la-expresion-del-gen-cd200r-en-celulas-epiteliales-de-intestino-regulacion-transcripcional-por-anoikis\/"},"modified":"2018-03-11T10:12:39","modified_gmt":"2018-03-11T10:12:39","slug":"estudio-de-la-expresion-del-gen-cd200r-en-celulas-epiteliales-de-intestino-regulacion-transcripcional-por-anoikis","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/ciencias-de-la-vida\/estudio-de-la-expresion-del-gen-cd200r-en-celulas-epiteliales-de-intestino-regulacion-transcripcional-por-anoikis\/","title":{"rendered":"Estudio de la expresi\u00f3n del gen cd200r en c\u00e9lulas epiteliales de intestino: regulaci\u00f3n transcripcional por anoikis"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> M\u00aa Olga Fernandez Navarro <\/strong><\/h2>\n<p>La prote\u00edna cd200r es receptor para la prote\u00edna cd200, y es expresada por timocitos, c\u00e9lulas dendr\u00edticas foliculares, endotelio vascular, c\u00e9lulas b recirculantes, c\u00e9lulas t activadas y neuronas tanto del sistema nervioso central como perif\u00e9rico. Muchos estudios sugieren que la se\u00f1alizaci\u00f3n producida por la interacci\u00f3n cd200-cd200r disminuye la actividad de las c\u00e9lulas mieloides. Se ha comprobado que la interacci\u00f3n de cd200r con cd200 provoca una se\u00f1al inmunosupresora que inhibe la actividad de los macr\u00f3fagos, induce de c\u00e9lulas t reguladoras, cambia el perfil de citoquinas desde th1 a th2 e inhibe de la inmunidad espec\u00edfica de tumor de las c\u00e9lulas t.  al comienzo de este trabajo se sab\u00eda que la expresi\u00f3n del gen cd200r1 s\u00f3lo hab\u00eda sido descrita en c\u00e9lulas de la l\u00ednea mieloide; no obstante, nuestro grupo de investigaci\u00f3n hab\u00eda caracterizado el gen cd200r humano y comprobado que se expresaba tambi\u00e9n en c\u00e9lulas epiteliales de intestino y  asociada a su diferenciaci\u00f3n celular sobre la matriz de prote\u00ednas extracelulares matrigel. El objetivo del presente trabajo consisti\u00f3 en conocer los mecanismos de regulaci\u00f3n de la expresi\u00f3n del gen cd200r1 en c\u00e9lulas epiteliales de intestino. los objetivos del trabajo de investigaci\u00f3n fueron los siguientes: 1.\tDeterminar la expresi\u00f3n del gen a lo largo del eje longitudinal durante la maduraci\u00f3n posparto del epitelio intestinal as\u00ed como su localizaci\u00f3n celular.  2.\tIdentificar el\/los componente\/s del matrigel como inductores de la expresi\u00f3n del gen cd200r1. 3.\tAlternativamente, identificar procesos celulares asociados a la fisiolog\u00eda de la c\u00e9lula epitelial como posibles reguladores de la expresi\u00f3n de cd200r1. 4.\tIdentificar el promotor de cd200r1 para realizar estudios de regulaci\u00f3n transcripcional. 5.\tEstudiar del papel regulador de la anoikis en la expresi\u00f3n del gen cd200r1. 6.\tComprobar la inducci\u00f3n en la expresi\u00f3n del gen cd200r1 en c\u00e9lulas epiteliales aisladas de intestino de rata. 7.\tAnalizar la expresi\u00f3n de los genes cd200 y cd200r en biopsias de enfermos de colitis ulcerosa y de crohn.  los resultados previos de nuestro grupo hab\u00edan determinado que el gen cd200r1 era expresado por los enterocitos y que su expresi\u00f3n disminu\u00eda cuando las c\u00e9lulas eran diferenciadas sobre la matriz extracelular matrigel. Para conocer la localizaci\u00f3n del receptor se realiz\u00f3 un estudio para detectar la prote\u00edna cd200r tanto a nivel celular como tisular. As\u00ed, mientras a nivel celular, la expresi\u00f3n de dicha prote\u00edna fue tan baja que no revel\u00f3 ning\u00fan dato significativo pues aparec\u00eda en distintas zonas de la c\u00e9lula, a nivel tisular se observ\u00f3 un patr\u00f3n diferencial de la expresi\u00f3n a lo largo del eje longitudinal intestinal y seg\u00fan el tiempo de desarrollo. Cd200r se expresa en todo el eje intestinal desde el nacimiento hasta el destete, momento en el cual queda restringido al colon.  en paralelo, se procedi\u00f3 a analizar si alg\u00fan componente de la matriz extracelular empleada (matrigel) pudiera regular la expresi\u00f3n de cd200r1. No se obtuvieron resultados concluyentes, ni en cada componente por separado ni mezclando todos los componentes. puesto que ning\u00fan componente de la matriz era responsable claro de la disminuci\u00f3n en la expresi\u00f3n de cd200r1, el estudio continu\u00f3 analizando qu\u00e9 posibles procesos biol\u00f3gicos asociados a la fisiolog\u00eda de las c\u00e9lulas epiteliales de intestino pod\u00edan intervenir en la regulaci\u00f3n de la expresi\u00f3n de cd200r1. Nos planteamos cuatro procesos biol\u00f3gicos: diferenciaci\u00f3n inducida por confluencia celular, inflamaci\u00f3n, estr\u00e9s oxidativo y anoikis (apoptosis por p\u00e9rdida de anclaje). El an\u00e1lisis del primero de ellos aport\u00f3 resultados aparentemente contradictorios, pues en este caso la expresi\u00f3n de cd200r1 aumentaba mientras que en la diferenciaci\u00f3n sobre la matriz extracelular, matrigel, disminu\u00eda. Otros procesos, como el est\u00edmulo proinflamatorio con lps y el estr\u00e9s oxidativo que causa da\u00f1o celular, mostraron variaciones en la expresi\u00f3n de cd200r1, si bien no fue posible relacionarlas con suficiente fiabilidad y reproducibilidad, al no encontrar correlaci\u00f3n entre las concentraciones utilizadas y los resultados obtenidos. Paralelamente, se identific\u00f3 y clon\u00f3 el promotor de cd200r en el vector de expresi\u00f3n p-dsred-express-1.  el siguiente objetivo se centr\u00f3 en estudiar si la apoptosis o anoikis pod\u00edan regular la expresi\u00f3n de cd200r1. Para generar apoptosis se procedi\u00f3 a la utilizaci\u00f3n de dos m\u00e9todos: la adici\u00f3n de butirato al medio de cultivo y la suspensi\u00f3n celular. Se comprob\u00f3 que la anoikis era la causa del incremento en la expresi\u00f3n de cd200r1 y que esta expresi\u00f3n era controlada por la ruta apopt\u00f3tica dependiente de caspasas.  para confirmar que la regulaci\u00f3n de la expresi\u00f3n del gen cd200r1 se deb\u00eda a la anoikis, se analiz\u00f3 el control por contacto con la cadena beta1 de la integrinas sobre las c\u00e9lulas en suspensi\u00f3n y se utiliz\u00f3 un inhibidor de la pi3k, un enzima clave en la se\u00f1alizaci\u00f3n intracelular desde las integrinas. Los resultados mostraron que, efectivamente, cd200r1 est\u00e1 regulado por la anoikis a trav\u00e9s de esta ruta. La inserci\u00f3n del promotor de cd200r1 en el vector de expresi\u00f3n permiti\u00f3 transfectar c\u00e9lulas que posteriormente fueron sometidas a anoikis. El an\u00e1lisis de dichas c\u00e9lulas confirm\u00f3 que la regulaci\u00f3n de este gen es de tipo transcripcional ya que las c\u00e9lulas en suspensi\u00f3n emit\u00edan fluorescencia. el estudio continu\u00f3 analizando si este proceso tambi\u00e9n ocurr\u00eda en c\u00e9lulas epiteliales de rata. Para ello, se extrajeron enterocitos de intestino de rata que fueron sometidos a anoikis. Los experimentos revelaron que, igual que en las l\u00edneas celulares, fisiol\u00f3gicamente la anoikis regula la expresi\u00f3n de cd200r. para completar el estudio, se procedi\u00f3 a comprobar si cd200r se expresaba asociado a la apoptosis de otros tipos celulares, concretamente c\u00e9lulas mcf-7 y mg-63. Los experimentos demostraron que dichos tipos celulares tambi\u00e9n expresaban cd200r, aunque posiblemente controladas por apoptosis independiente de caspasas. la memoria de tesis doctoral concluye con el an\u00e1lisis de cd200 y de las isoformas de cd200r1 en biopsias de enfermos de crohn y de colitis ulcerosa. Hemos comprobado que existen diferencias en el patr\u00f3n de expresi\u00f3n de cd200r entre ambas enfermedades seg\u00fan la isoforma analizada.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio de la expresi\u00f3n del gen cd200r en c\u00e9lulas epiteliales de intestino: regulaci\u00f3n transcripcional por anoikis<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio de la expresi\u00f3n del gen cd200r en c\u00e9lulas epiteliales de intestino: regulaci\u00f3n transcripcional por anoikis <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 M\u00aa Olga Fernandez Navarro <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Granada<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 15\/05\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Antonio Su\u00e1rez Garc\u00eda<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: angel Gil hernandez <\/li>\n<li>Mar\u00eda  isabel Torres lopez (vocal)<\/li>\n<li>mario Delgado mora (vocal)<\/li>\n<li>Jos\u00e9 m. Vieites fern\u00e1ndez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de M\u00aa Olga Fernandez Navarro La prote\u00edna cd200r es receptor para la prote\u00edna cd200, y es expresada por [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[35,2931,37365,1737],"tags":[3791,44017,63187,22433,63008,192751],"class_list":["post-93306","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-ciencias-de-la-vida","category-enfermedades-de-la-nutricion","category-genetica-del-desarrollo","category-inmunologia","tag-angel-gil-hernandez","tag-antonio-suarez-garcia","tag-jose-m-vieites-fernandez","tag-maria-isabel-torres-lopez","tag-mario-delgado-mora","tag-ma-olga-fernandez-navarro"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/93306","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=93306"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/93306\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=93306"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=93306"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=93306"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}