{"id":93710,"date":"2009-03-06T00:00:00","date_gmt":"2009-03-06T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/p53-a-crucial-target-of-mdm2-and-the-ups-studies-of-specificity-and-method-development-for-purification-of-endogenously-ubiquitylated-proteins\/"},"modified":"2009-03-06T00:00:00","modified_gmt":"2009-03-06T00:00:00","slug":"p53-a-crucial-target-of-mdm2-and-the-ups-studies-of-specificity-and-method-development-for-purification-of-endogenously-ubiquitylated-proteins","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica\/p53-a-crucial-target-of-mdm2-and-the-ups-studies-of-specificity-and-method-development-for-purification-of-endogenously-ubiquitylated-proteins\/","title":{"rendered":"P53, a crucial target of mdm2 and the ups: studies of specificity and method development for purification of endogenously ubiquitylated proteins"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Nils Roland Eskil Hjerpe <\/strong><\/h2>\n<p>Dentro de la c\u00e9lula, el sistema ubicuitina-proteosoma (ups) es un regulador fundamental de la estabilidad proteica. La peque\u00f1a mol\u00e9cula de 8.5 kda, denominada ubicuitina, funciona como un modificador postraduccional y su uni\u00f3n covalente a diferentes sustratos, tiene un efecto dram\u00e1tico en la vida media de \u00e9stos, dirigi\u00e9ndolos al complejo macromolecular proteol\u00edtico llamado proteasoma. La ubicuitina se une con sus sustratos a trav\u00e9s de la acci\u00f3n de tres clases de enzimas: enzimas activadoras de ubicuitina (tambi\u00e9n llamadas e1s), enzimas conjugadoras de ubicuitina (e2s) y ligasas de ubiquitina (e3s). La acci\u00f3n concertada de estas enzimas permite unir la ubicuitina a la(s) lisina(s) de la prote\u00edna diana, espec\u00edficamente reconocida por la e3. Las e3 contribuyen en la capacidad de reconocimiento espec\u00edfico de un sustrato en particular, aunque una \u00fanica e3, pude reconocer m\u00e1s de una diana. Adem\u00e1s de este papel crucial en la prote\u00f3lisis, la ubicuitina tambi\u00e9n ejecuta funciones de modulador de numerosos procesos celulares, como la transducci\u00f3n de se\u00f1ales y localizaci\u00f3n subcelular. Como consecuencia de la degradaci\u00f3n proteosomal y la de-ubicuitilaci\u00f3n, las prote\u00ednas ubicuitiladas son muy inestables. Este hecho implica dificultades t\u00e9cnicas a la hora de intentar aislar cualquier factor ubicuitilado, planteando un importante desaf\u00edo en la investigaci\u00f3n de los mecanismos que unen los sustratos ubicuitilados con sus funciones espec\u00edficas.La prote\u00edna supresora de tumores p53, es un componente cr\u00edtico, requerido para suprimir el crecimiento de c\u00e9lulas canc\u00e9rosas. Se han identificado varias ligasas de ubicuitina que reconocen y modifican p53, entre las cuales, mdm2 juega un papel transcendental. Bajo condiciones fisiol\u00f3gicas normales, p53 es controlada por degradaci\u00f3n proteosomal mediada por poli-ubicuitilaci\u00f3n dependiente de mdm2, mientras que bajo estr\u00e9s celular, p53 en su forma tetram\u00e9rica, se estabiliza y act\u00faa como un factor de transcripci\u00f3n que induce la apoptosis o un paro en el ciclo celular. En este trabajo hemos utilizado una estrategia de transferencia de se\u00f1ales para identificar y delimitar las se\u00f1ales espec\u00edficas de la prote\u00edna supresora de tumores p53, que son requeridas para su reconocimiento y su \u00f3ptima degradaci\u00f3n inducida por mdm2. La mayor\u00eda de los experimentos, han sido realizados en un contexto celular transcripcionalmente silencioso para p53, evitando as\u00ed los mecanismos de regulaci\u00f3n, tanto negativos, como positivos, que afectan la estabilidad de este supresor tumoral, debido a la acci\u00f3n de cualquiera de los numerosos reguladores dependientes de p53. Como resultado de estas investigaciones  hemos demostrado que: i) se\u00f1ales discretas son necesarias para llevar a cabo una degradaci\u00f3n \u00f3ptima inducida por mdm2, son necesarias se\u00f1ales claramente delimitadas presentes en los regiones n y c terminal de p53. Ii) mdm2 induce la degradaci\u00f3n de los mutantes de p53, con capacidad de tetramerizaci\u00f3n reducida (od) a trav\u00e9s del sistema ups. Contrario a lo que sucede con la versi\u00f3n salvaje de p53 (wt), los mutantes od son incapaces de tetramerizar eficazmente y se degradan gracias a un proceso que no requiere una poli-ubicuitilaci\u00f3n eficiente.  el mayor problema para la caracterizaci\u00f3n de p53 ubicuitilado, son las dificultades asociadas tanto al enriquecimiento como a la purificaci\u00f3n de p53 modificado. Por esta raz\u00f3n, hemos desarrollado nuevas t\u00e9cnicas para aislar factores ubicuitilados a partir de extractos celulares.  estas t\u00e9cnicas se han basado en la afinidad natural que presentan los dominios asociados a ubicuitina (uba) por esta mol\u00e9cula. Para el desarrollo de estas herramientas, hemos fusionado hasta cuatro repeticiones de dominios uba dispuestos en tandem (que han sido denominadas tubes), de los prote\u00ednas hhr23a y ubiquilin1, para mejorar la captura de prote\u00ednas poli-ubicuitiladas. Las tubes muestran importantes incrementos en afinidad para cadenas de poli-ubicuitina, de hasta casi 1000 veces en comparaci\u00f3n con dominios uba individuales. Esto se corresponde con un cambio en la constante de afinidad de \u00c2\u00b5m a nm, lo cual, se ve reflejado en la capacidad de las tubes para purificar prote\u00ednas ubicuitiladas extra\u00eddas de lisados celulares. Hay que destacar de forma importante la capacidad que presentan las tubes para proteger eficientemente los sustratos modificados, tanto de la degradaci\u00f3n proteasomal, como de la de-ubicuitilaci\u00f3n. En ultima instancia, las tubes desarrolladas se han aplicado para caracterizar la naturaleza de la ubicuitilaci\u00f3n, que ocurre en mutantes od de p53, as\u00ed como, para el aislamiento de p53 ubicuitilado end\u00f3genamente a partir de c\u00e9lulas expuestas a estr\u00e9s genot\u00f3xico.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>P53, a crucial target of mdm2 and the ups: studies of specificity and method development for purification of endogenously ubiquitylated proteins<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 P53, a crucial target of mdm2 and the ups: studies of specificity and method development for purification of endogenously ubiquitylated proteins <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Nils Roland Eskil Hjerpe <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Pa\u00eds vasco\/euskal herriko unibertsitatea<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 03\/06\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Manuel S. Rodriguez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: felix Mar\u00eda Go\u00f1i urcelay <\/li>\n<li>timothy Thomson okatsu (vocal)<\/li>\n<li>shahri Raasi (vocal)<\/li>\n<li>Jos\u00e9 Luis Rosa lopez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Nils Roland Eskil Hjerpe Dentro de la c\u00e9lula, el sistema ubicuitina-proteosoma (ups) es un regulador fundamental de [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[160,12909],"tags":[12081,49882,193433,193432,193434,13682],"class_list":["post-93710","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-bioquimica","category-pais-vasco-euskal-herriko-unibertsitatea","tag-felix-maria-goni-urcelay","tag-jose-luis-rosa-lopez","tag-manuel-s-rodriguez","tag-nils-roland-eskil-hjerpe","tag-shahri-raasi","tag-timothy-thomson-okatsu"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/93710","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=93710"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/93710\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=93710"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=93710"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=93710"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}