{"id":94178,"date":"2018-03-11T10:13:46","date_gmt":"2018-03-11T10:13:46","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/caracterizacion-de-cepas-del-hongo-candida-albicans-con-mutaciones-en-genes-que-codifican-la-sintesis-de-proteinas-que-contienen-el-dominio-cfem-rico-en-cisteina\/"},"modified":"2018-03-11T10:13:46","modified_gmt":"2018-03-11T10:13:46","slug":"caracterizacion-de-cepas-del-hongo-candida-albicans-con-mutaciones-en-genes-que-codifican-la-sintesis-de-proteinas-que-contienen-el-dominio-cfem-rico-en-cisteina","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/levaduras\/caracterizacion-de-cepas-del-hongo-candida-albicans-con-mutaciones-en-genes-que-codifican-la-sintesis-de-proteinas-que-contienen-el-dominio-cfem-rico-en-cisteina\/","title":{"rendered":"Caracterizacion de cepas del hongo candida albicans con mutaciones en genes que codifican la sintesis de proteinas que contienen el dominio cfem, rico en cisteina"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Ana Mar\u00eda Perez Sanchez <\/strong><\/h2>\n<p>Mediante el inmunorrastreo de una genoteca de expresi\u00f3n de candida albicans  con un anticuerpo policlonal que reconoce componentes proteicos y glicoproteicos espec\u00edficos de la pared celular de la forma micelial de dicho hongo, se aisl\u00f3 y clon\u00f3 un gen contenido en el contig 6-2476 del proyecto de secuenciaci\u00f3n del genoma de c. Albicans. Dicho clon conten\u00eda un marco abierto de lectura que codifica para un polip\u00e9ptido de 250 amino\u00e1cidos, con un peso molecular aparente de 25 kda.      la prote\u00edna codificada por dicho gen present\u00f3 una se\u00f1al de anclaje tipo gpi, lo que suger\u00eda, en principio,  que pudiera tratarse de una especie unida al \u00edY-glucano de la   pared celular, aunque otras evidencias apuntaron a que podr\u00eda ser una prote\u00edna de secreci\u00f3n.  En su secuencia aminoc\u00eddica mostraba ocho restos de ciste\u00edna en posiciones altamente conservadas, con una elevada probabilidad de intervenir en la formaci\u00f3n de puentes disulfuro, por lo que en un principio se pens\u00f3 que podr\u00eda tratarse de una hidrofobina, raz\u00f3n por la cual inicialmente se design\u00f3 al gen aislado como hpb1 (por hydrophobin 1). Sin embargo, para unificar criterios con otras descripciones de este gen hechas por diferentes autores, se decidi\u00f3 utilizar la denominaci\u00f3n pga10 (por putative gpi anchor 10), designaci\u00f3n que reciben una serie genes que codifican para prote\u00ednas con se\u00f1al gpi a las que no ha sido asignada una funci\u00f3n espec\u00edfica, para referirse a dicho gen en el presente trabajo.     la secuencia de amino\u00e1cidos de pga10p, el producto del gen pga10, present\u00f3 los porcentajes de homolog\u00eda\/identidad m\u00e1s elevados con dos prote\u00ednas de c. Albicans, rbt5p y wap1p\/csa1p. Todas estas especies presentan ocho ciste\u00ednas en posiciones altamente conservadas en su secuencia. Dicho dominio rico en ciste\u00edna, que es diferente al que se encuentra en la secuencia aminoac\u00eddica de  las hidrofobinas,  ha sido denominado con el acr\u00f3nimo cfem (por common in fungal extracellular membrane proteins). La b\u00fasqueda en las bases de datos revel\u00f3 la presencia de al menos otras dos prote\u00ednas en c. Albicans que contienen dicho dominio cfem.     con la finalidad de establecer el papel del gen pga10 en la biolog\u00eda de c. Albicans, se procedi\u00f3 a la construcci\u00f3n de un mutante nulo para dicho gen. El an\u00e1lisis fenot\u00edpico de dicho mutante, denominado can1, revel\u00f3 que las c\u00e9lulas tienden a flocular tras 3 h de incubaci\u00f3n en condiciones que inducen el crecimiento en forma de micelio. La cepa mutante present\u00f3 tambi\u00e9n una mayor sensibilidad al rojo congo y, en menor medida, al calcofluor white y al dodecil sulfato s\u00f3dico, agentes indicadores de la integridad estructural y funcional de la pared celular, as\u00ed como un aumento de la capacidad de adhesi\u00f3n a pl\u00e1stico y prote\u00ednas del suero y de la matriz extracelular de los tejidos animales, y de la hidrofobicidad de superficie celular respecto de la cepa parental cai4-ura3. Estas observaciones suger\u00edan que la interrupci\u00f3n del gen pga10 provoca una cascada de efectos pleiotr\u00f3picos que se manifestar\u00edan, al menos en parte, en forma de alteraciones en la bios\u00edntesis y\/o composici\u00f3n\/estructura de la pared celular, alteraciones que fueron puestas de manifiesto al  observar la superficie celular de las diferentes cepas mutantes para los genes pga10, rbt5 y wap1 mediante microscop\u00eda de fuerza at\u00f3mica. El an\u00e1lisis comparativo de extractos de la pared celular de levaduras y micelio de las cepas mutante (can1) y parental (cai4-ura3) mediante electroforesis bidimensional tambi\u00e9n puso de manifiesto la existencia de diferencias importantes en el patr\u00f3n de especies polipept\u00eddicas presentes en dicha estructura.       aunque la capacidad de formar biopel\u00edculas de la cepa  mutante can1, as\u00ed como del resto de mutantes nulos con interrupciones en genes que codifican para otras prote\u00ednas pertenecientes a la familia del dominio cfem en c. Albicans no parece estar alterada, las biopel\u00edculas formadas por dichas cepas fueron m\u00e1s delgadas y fr\u00e1giles, mostrando una escasa capacidad de adherencia al sustrato. Estos resultados indican que las prote\u00ednas que contienen el dominio cfem no participan en las etapas iniciales del proceso formaci\u00f3n de las biopel\u00edculas, aunque s\u00ed que parecen jugar un papel muy importante en el mantenimiento de la integridad estructural de las mismas. La mayor fragilidad y menor capacidad de adherencia al sustrato de las biopel\u00edculas formadas por las diferentes cepas mutantes podr\u00eda estar relacionada con la menor cantidad de matriz polim\u00e9rica extracelular presente en dichas biopel\u00edculas.      el an\u00e1lisis prote\u00f3mico de un extracto de matriz extracelular de las biopel\u00edculas formadas por la cepa parental cai4-ura3 puso de manifiesto la presencia de una especie proteica que tras su secuenciaci\u00f3n se identific\u00f3 como pga10p, lo que constituye una evidencia en apoyo de la hip\u00f3tesis de que esta especie perteneciente a la familia de prote\u00ednas que contienen el dominio cfem ser\u00eda una prote\u00edna de secreci\u00f3n que formar\u00eda parte de dicha matriz extracelular. La ausencia de la especie pga10p en la matriz de las  biopel\u00edculas formadas por la mutante nula para el gen pga10  podr\u00eda estar relacionada con la mayor fragilidad y menor capacidad de adherencia al sustrato mostrada por dichas biopel\u00edculas. Una hip\u00f3tesis semejante podr\u00eda proponerse en el caso de las biopel\u00edculas formadas por las mutantes nulas para los otros genes que codifican prote\u00ednas de la familia de polip\u00e9ptidos que contienen el dominio cfem, estudiadas en el presente trabajo y que tambi\u00e9n forman biopel\u00edculas defectuosas.     los estudios de expresi\u00f3n mediante  microscopia confocal  y citometr\u00eda de flujo en una cepa de c. Albicans transformada con una construcci\u00f3n en la que el gen que codifica para la prote\u00edna verde fluorescente (gfp) se encontraba bajo el control del promotor del gen pga10, revel\u00f3 que dicho gen se expresaba preferencialmente en las c\u00e9lulas incubadas en condiciones para inducir el crecimiento en forma de micelio. El an\u00e1lisis mediante pcr en tiempo real (rt-pcr) confirm\u00f3 estas observaciones, ya que esta t\u00e9cnica mostr\u00f3, igualmente, una mayor expresi\u00f3n de los genes pga10, rbt5 y wap1 en los filamentos miceliales respecto a las c\u00e9lulas levaduriformes. Estos resultados suger\u00edan, en principio, que las prote\u00ednas pertenecientes a la familia del dominio cfem podr\u00edan estar relacionadas con la virulencia\/patogenicidad de c. Albicans, puesto que la capacidad de crecer en forma de micelio est\u00e1 considerada como un importante factor de virulencia e invasividad en este hongo.     sin embargo, los estudios de virulencia en ratones balc\/c empleando los distintos mutantes nulos para los genes pga10, rbt5 y wap1,  utilizando en este caso la cepa caf2 como control, revel\u00f3 que la interrupci\u00f3n de estos genes no induc\u00eda cambios significativos en lo que respecta a la virulencia y patogenicidad de c. Albicans. Adem\u00e1s, se mantuvo inalterada la capacidad de invasi\u00f3n de diferentes \u00f3rganos en los animales infectados experimentalmente con las diferentes cepas y, en todos los casos,  el mutante simple para el gen pga10 resulto ser m\u00e1s invasivo que la propia cepa control, caf2. Por otro lado, la sensibilidad a diferentes antif\u00fangicos tampoco se vio alterada en las distintas cepas mutantes nulas, tanto en las incubadas en condiciones para inducir el crecimiento en forma planct\u00f3nica o en biopel\u00edculas. El patr\u00f3n de resistencia a los antif\u00fangicos de uso com\u00fan en cl\u00ednica, cuando las c\u00e9lulas se encontraban creciendo en una biopel\u00edcula fue parecido en todos los casos, excepto para los mutantes dobles y triples para los diferentes genes, en los que se apreci\u00f3 un ligero aumento en la sensibilidad a los antif\u00fangicos ensayados.       en consecuencia, aunque los resultados presentados en este trabajo representan una evidencia s\u00f3lida sobre la funci\u00f3n potencial que las prote\u00ednas pertenecientes a la familia de polip\u00e9ptidos que contienen el dominio cfem presentes en c. Albicans, tienen en la biog\u00e9nesis y\/o mantenimiento de la integridad estructural de las biopel\u00edculas formadas por este hongo, es necesario seguir profundizando en el conocimiento de esta intrigante familia de prote\u00ednas para elucidar su papel biol\u00f3gico y funcional, no solo en c. Albicans, sino tambi\u00e9n en otras especies f\u00fangicas.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Caracterizacion de cepas del hongo candida albicans con mutaciones en genes que codifican la sintesis de proteinas que contienen el dominio cfem, rico en cisteina<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Caracterizacion de cepas del hongo candida albicans con mutaciones en genes que codifican la sintesis de proteinas que contienen el dominio cfem, rico en cisteina <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Ana Mar\u00eda Perez Sanchez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Universitat de val\u00e9ncia (estudi general)<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 19\/06\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jos\u00e9 Pedro Martinez Garcia<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Carlos Monteagudo castro <\/li>\n<li>Miguel Vi\u00f1as ciordia (vocal)<\/li>\n<li>germ\u00e1n Larriba calle (vocal)<\/li>\n<li>gordon Ramage (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Ana Mar\u00eda Perez Sanchez Mediante el inmunorrastreo de una genoteca de expresi\u00f3n de candida albicans con un 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