{"id":94320,"date":"2018-03-11T10:14:01","date_gmt":"2018-03-11T10:14:01","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/papel-de-canales-de-k-del-musculo-liso-vascular-en-el-control-del-tono-y-el-remodelado-arterial\/"},"modified":"2018-03-11T10:14:01","modified_gmt":"2018-03-11T10:14:01","slug":"papel-de-canales-de-k-del-musculo-liso-vascular-en-el-control-del-tono-y-el-remodelado-arterial","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/fisiologia-cardiovascular\/papel-de-canales-de-k-del-musculo-liso-vascular-en-el-control-del-tono-y-el-remodelado-arterial\/","title":{"rendered":"Papel de canales de k+ del musculo liso vascular en el control del tono y el remodelado arterial"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Alejandro Moreno Dom\u00ednguez <\/strong><\/h2>\n<p>En este trabajo hemos empleado preparaciones de tres lechos vasculares con diferentes caracter\u00edsticas: arteria aorta (arteria de conducci\u00f3n), arteria mesent\u00e9rica (arteria de resistencia) y arteria femoral, que presenta propiedades intermedias. La aorta es una arteria el\u00e1stica cuya misi\u00f3n es distribuir la sangre a todo el sistema vascular y amortiguar los cambios de presi\u00f3n producidos por el impulso ventricular intermitente. Las grandes arterias, como la aorta y tambi\u00e9n la femoral, aunque tienen capacidad para la contracci\u00f3n y dilataci\u00f3n no est\u00e1n implicadas en la regulaci\u00f3n de la presi\u00f3n y el flujo sangu\u00edneo en condiciones fisiol\u00f3gicas normales. Sin embargo las arterias mesent\u00e9ricas son arterias de resistencia y est\u00e1n involucradas tanto en la regulaci\u00f3n de la presi\u00f3n arterial como en el aporte y distribuci\u00f3n del flujo sangu\u00edneo al intestino. vali\u00e9ndonos de vsmc de los dos tipos arteriales extremos, arterias aortas y mesent\u00e9ricas, de un modelo de ratones con hipertensi\u00f3n esencial (bph: blood pressure high) y de sus respectivos controles normotensos (bpn: blood pressure normal), hemos realizado un an\u00e1lisis global del perfil de expresi\u00f3n de los canales i\u00f3nicos presentes en estos tipos celulares para tratar de conocer el conjunto de canales caracter\u00edsticos de la hipertensi\u00f3n en ambos lechos, as\u00ed como su implicaci\u00f3n en el control del tono vascular. Este ambicioso estudio aporta datos de enorme valor para la comprensi\u00f3n de las bases moleculares de alteraciones vasculares como la hipertensi\u00f3n. Asimismo, es de esperar que la identificaci\u00f3n del perfil de expresi\u00f3n de canales i\u00f3nicos espec\u00edfico de la hipertensi\u00f3n esencial, proporcione nuevas dianas moleculares para la prevenci\u00f3n y el tratamiento farmacol\u00f3gico de la hipertensi\u00f3n esencial. nuestros resultados reflejan una mayor complejidad en el perfil de expresi\u00f3n de los canales i\u00f3nicos en las arterias mesent\u00e9ricas. \u00e9stas expresan con una abundancia media-alta un mayor abanico de canales i\u00f3nicos, entre los que encuentran los canales kv y kca. En el caso concreto de los canales kv existen diferencias muy significativas en los niveles de expresi\u00f3n, siendo muy bajo en arterias de conducci\u00f3n (en aortas), y medio-alto en arterias de resistencia (mesent\u00e9ricas) lo cual est\u00e1 de acuerdo con su contribuci\u00f3n al tono miog\u00e9nico. Asimismo, en lo que se refiere a las variaciones en sus niveles de expresi\u00f3n en condiciones de hipertensi\u00f3n, tambi\u00e9n son muy diferentes en ambos lechos vasculares: observamos una reducci\u00f3n generalizada de todos ellos en aorta y s\u00f3lo dos cambios (la reducci\u00f3n de kv4.1 y la aparici\u00f3n de novo de la subunidad accesoria kv6.3) en las arterias mesent\u00e9ricas.  modulaci\u00f3n de las corrientes kv2 por las subunidades reguladoras kv6.3. la disminuci\u00f3n de la densidad de corriente kv2 en las vsmc bph puede explicarse en base al aumento de tama\u00f1o de las c\u00e9lulas causado por la hipertrofia. Sin embargo, hay adem\u00e1s una disminuci\u00f3n en la amplitud de la corriente kv2 que no correlaciona con los niveles de expresi\u00f3n del mrna del canal kv2, puesto que no se observan diferencias entre normotensos e hipertensos en la expresi\u00f3n del canal kv2.1. Sin embargo la expresi\u00f3n de nov del kv6.3 en c\u00e9lulas bph podr\u00eda dar respuesta a este fen\u00f3meno, ya que est\u00e1 descrito que estas subunidades se asocian con canales kv2 disminuyendo su amplitud de corriente y modificando a su vez otras propiedades cin\u00e9ticas del canal. Por lo tanto, la disminuci\u00f3n de la densidad de corriente kv2 en c\u00e9lulas bph no se deber\u00eda a una disminuci\u00f3n de la expresi\u00f3n del canal, sino a la modulaci\u00f3n funcional negativa de la prote\u00edna del canal por su asociaci\u00f3n con subunidades kv6.3. dise\u00f1amos el estudio comparativo (corrientes kv2.1 frente a kv2.1\/kv6.3) en c\u00e9lulas hek transfectadas. Observamos una disminuci\u00f3n de la amplitud de corriente en heterotretr\u00e1meros kv2.1\/kv6.3 que ha sido previamente descrita. En lo que respecta a los cambios cin\u00e9ticos, observamos un enlentecimiento de la activaci\u00f3n. Nuestros datos indican que todas las diferencias entre las corrientes nativas kv2 de las preparaciones bpn y bph se pueden explicar con facilidad, asumiendo que mientras que en las vsmc de ratones bpn estas corrientes est\u00e1n producidas por homomult\u00edmeros kv2.1, en las c\u00e9lulas bph est\u00e1n mediadas principalmente por heterocomplejos kv2.1\/kv6.3. Nuestra conclusi\u00f3n con respecto a los componentes moleculares de las corrientes kv2 se ve tambi\u00e9n reforzada por los datos de expresi\u00f3n de mrna y de prote\u00edna, y por el bloqueo funcional de las corrientes con el anticuerpo anti-kv6.3. nuestros hallazgos proporcionan evidencias moleculares y funcionales que apoyan las hip\u00f3tesis de que la expresi\u00f3n de novo de la subunidad accesoria kv6.3 (que conduce a la modulaci\u00f3n de las corrientes kv2) puede ser un componente activo en el desarrollo natural de la hipertensi\u00f3n. La gran diferencia en la expresi\u00f3n del gen kcng3 que se manifest\u00f3 en las vsmc de arteria mesent\u00e9rica, y que no se reprodujo en el caso de las de aorta, la detecci\u00f3n de la prote\u00edna kv6.3 en vsmc de arteria mesent\u00e9rica de bph (y no en las de bpn), y la caracterizaci\u00f3n funcional de las corrientes kv en c\u00e9lulas de arteria mesent\u00e9rica muestran cambios que concuerdan con la presencia de canales heterotetram\u00e9ricos kv2.1.\/Kv6.3. Finalmente, los experimentos de bloqueo con el anticuerpo anti-kv6.3 ponen de manifiesto un papel funcional de esta subunidad \u00fanicamente en las vsmc de animales hipertensos. modulaci\u00f3n de los canales bk por las subunidades reguladoras beta1. los canales bk juegan un papel central en la regulaci\u00f3n del tono vascular debido a su activaci\u00f3n por aumentos locales de la [ca2+]i (calcium sparks) por la liberaci\u00f3n de ca2+ desde el ret\u00edculo. Estos aumentos locales de ca2+ generan corrientes transitorias espont\u00e1neas de salida de k+ (stocs) producidas por los canales bkca que hiperpolarizan la c\u00e9lula, actuando como un sistema de retroalimentaci\u00f3n negativo que tiende a autolimitar la vasoconstricci\u00f3n e impedir el vasoespasmo. En el m\u00fasculo liso vascular estos canales se asocian con subunidades accesorias (bkbeta1) que modulan la afinidad por ca2+ de lo canales bk, propiciando el acoplamiento entre los sparks de ca2+ y las corrientes espont\u00e1neas de salida de k+. en este estudio mostramos que existe una disminuci\u00f3n en los niveles de expresi\u00f3n del mrna de las subunidades bkbeta1 y bk de las vsmc de bph  y el estudio funcional revela una disminuci\u00f3n de la amplitud de las corrientes bk y lo que es mas importante, una disminuci\u00f3n en la sensibilidad a la modulaci\u00f3n por ca2+ de las corrientes en esta preparaci\u00f3n. En el momento actual estamos dise\u00f1ando y realizando estudios m\u00e1s detallados para confirmar el papel fisiol\u00f3gico de los canales bkca en nuestro modelo, as\u00ed como su contribuci\u00f3n al desarrollo de la hipertensi\u00f3n. Sin embargo, los datos preliminares obtenidos que presentamos en este trabajo son consistentes con los datos previos existentes en la literatura, y nos permiten sugerir que la disminuci\u00f3n aparente de la sensibilidad a ca2+ de los canales bk en los animales hipertensos est\u00e1 asociada a la disminuci\u00f3n en la expresi\u00f3n de la subunidad bkbeta1 en las vsmcs de estos ratones bph y que esta modificaci\u00f3n puede contribuir a explicar la hipertensi\u00f3n moderada detectada en estos animales. remodelado de canales de k+ y sus implicaciones para la proliferaci\u00f3n del m\u00fasculo liso en un modelo animal de hiperplasia de la \u00edntima. hemos realizado un estudio exhaustivo del perfil de expresi\u00f3n de los canales i\u00f3nicos en las vsmc de arteria femoral, con el objetivo de averiguar qu\u00e9 canales se asocian con el cambio fenot\u00edpico de las vsmc en este lecho vascular. Para ello hemos usado arrays taqman de baja densidad, con lo que podemos obtener medidas simult\u00e1neas de casi un centenar de genes, consiguiendo as\u00ed una visi\u00f3n global de la expresi\u00f3n de canales i\u00f3nicos en nuestra preparaci\u00f3n. La aproximaci\u00f3n inicial ha sido la extracci\u00f3n de la informaci\u00f3n de estas bases de datos, localizando genes con una expresi\u00f3n diferencial significativa en las condiciones experimentales utilizadas (vsmc contr\u00e1ctiles frente a sint\u00e9ticas). Esta caracterizaci\u00f3n se ha realizado mediante un an\u00e1lisis cluster, que nos proporciona un punto de vista m\u00e1s global para poder entender mejor el proceso de desdiferenciaci\u00f3n. Se aporta un nivel adicional de filtrado de los datos utilizando dos modelos distintos de fenotipo proliferativo, los modelos in vivo e in vitro. La comparaci\u00f3n de estos dos conjuntos de datos puede ayudar a identificar los cambios conservados en la expresi\u00f3n de genes requeridos para la proliferaci\u00f3n de las c\u00e9lulas.  expresi\u00f3n de los canales i\u00f3nicos en los modelos de proliferaci\u00f3n in vivo e in vitro. las conclusiones de los sucesivos niveles de an\u00e1lisis de la expresi\u00f3n de los canales i\u00f3nicos en estas preparaciones proporcionan una informaci\u00f3n muy interesante, que podemos concretar en los siguientes aspectos: \u00c2\u00bf\tse han caracterizado los cambios en el perfil de expresi\u00f3n de canales i\u00f3nicos asociados con el fenotipo sint\u00e9tico en dos modelos de estudio. Los datos obtenidos muestran una relativa buena correlaci\u00f3n entre los cambios observados en las dos situaciones. Considerando el modelo de proliferaci\u00f3n in vivo, encontramos cambios en 34 genes de canales, 27 de los cuales mostraron la misma variaci\u00f3n en vsmc en cultivo. Cuando realizamos el an\u00e1lisis estad\u00edstico con la correcci\u00f3n fdr  que toma en consideraci\u00f3n la variabilidad inherente al estudio de un gran n\u00famero de datos en medidas repetidas, el n\u00famero de genes que se modifican con la proliferaci\u00f3n de forma estad\u00edsticamente significativa se reduce de 34 a 22 en la lesi\u00f3n endoluminal. De estos 22 genes que cambian en la lesi\u00f3n endoluminal, 18 mostraron el mismo cambio en las c\u00e9lulas en cultivo. Las comparaciones entre los dos modelos proliferativos y los an\u00e1lisis estad\u00edsticos realizados con las herramientas de la expresi\u00f3n diferencial de genes del programa gepas, nos proporcionaron un nivel adicional de confianza a nuestros resultados, ya que se reduce el n\u00famero de genes de canales que muestran cambios significativos con la proliferaci\u00f3n a 16 de los 90 genes de canales incluidos en el estudio.  solo para algunos de los canales destacados por nuestro estudio se ha descrito previamente un papel en la proliferaci\u00f3n de las vsmc en otras preparaciones. El hallazgo de genes conservados en distintas preparaciones es importante y puede reflejar asociaciones obligatorias de algunos genes de canales i\u00f3nicos con remodelado vascular, pudiendo tener una repercusi\u00f3n cl\u00ednica importante ya que representar\u00edan una diana terap\u00e9utica espec\u00edfica para las patolog\u00edas vasculares asociadas a la proliferaci\u00f3n del m\u00fasculo liso vascular. contribuci\u00f3n funcional de los canales kv1.3 y su papel en la proliferaci\u00f3n de las vsmc. se ha estudiado la expresi\u00f3n funcional y su contribuci\u00f3n a la proliferaci\u00f3n de las vsmc, de los genes cuya expresi\u00f3n aumenta tras el cambio fenot\u00edpico (kv1.3 y kvbeta2). El estudio funcional se ha enfocado principalmente a los canales kv1.3, ya que las subunidades kvbeta2 pueden actuar como prote\u00ednas chaperonas que promueven y\/o estabilizan la expresi\u00f3n en la superficie celular de los canales de k+  y siendo el  kv1.3 la subunidad kv1 mas abundante en las vsmc en cultivo, parece plausible considerar que el aumento de la expresi\u00f3n de las subunidades kv1.3 y kvbeta2 esta relacionada con el hecho de que forman heteromult\u00edmeros. nuestros datos demuestran un aumento de la expresi\u00f3n de ambas prote\u00ednas (kv1.3 y kvbeta2) en las lesiones proliferativas  y tambi\u00e9n una mayor contribuci\u00f3n de las corrientes kv1.3 a las corrientes totales de salida en las vsmc en cultivo. El aspecto m\u00e1s relevante es que adem\u00e1s hemos establecido una conexi\u00f3n entre la expresi\u00f3n funcional de los canales kv1.3 y el fenotipo sint\u00e9tico, ya que la inhibici\u00f3n de las corrientes kv1.3 usando bloqueantes selectivos para el canal se traduce un una disminuci\u00f3n significativa de la migraci\u00f3n y proliferaci\u00f3n de las vsmc de arteria femoral en cultivo. est\u00e1 ampliamente documentado que el bloqueo selectivo de los canales kv1.3 inhibe la migraci\u00f3n y la proliferaci\u00f3n de los linfocitos t efectores activados. De hecho, estos bloqueantes se han utilizado con \u00e9xito para el tratamiento en modelos experimentales de esclerosis m\u00faltiple. Asimismo, tambi\u00e9n se ha descrito la participaci\u00f3n del canal kv1.3 en los procesos de proliferaci\u00f3n de otros tipos celulares. Con esta perspectiva, nuestros datos proporcionan evidencias de un papel similar de los canales kv1.3 en el cambio fenot\u00edpico de las vsmc, lo que sugiere que este nuevo papel de los canales kv1.3 puede ser una funci\u00f3n conservada en distintos lechos vasculares, aportando una nueva diana terap\u00e9utica para la prevenci\u00f3n y el tratamiento de la hiperplasia de la \u00edntima.   amberg, g. C., Bonev, a. D., Rossow, c. F., Nelson, m. T., &#038; Santana, l. F. (2003). Modulation of the molecular composition of large conductance, ca(2+) activated k(+) channels in vascular smooth muscle during hypertension. J clin.Invest 112, 717-724. beeton, c., Wulff, h., Standifer, n. E., Azam, p., Mullen (2006). Kv1.3 channels are a therapeutic target for t cell-mediated autoimmune diseases. Proc natl.Acad.Sci u s.A 103, 17414-17419. brenner, r., Perez, g. J., Bonev, a. D., Eckman, d. M., Kosek, j. C., Wiler, s. W., Patterson, a. J., Nelson, m. T., &#038; Aldrich, r. W. (2000). 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Brain res mol brain res 123, 91-103.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Papel de canales de k+ del musculo liso vascular en el control del tono y el remodelado arterial<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Papel de canales de k+ del musculo liso vascular en el control del tono y el remodelado arterial <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Alejandro Moreno Dom\u00ednguez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Valladolid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 22\/06\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Ramon Lopez Lopez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Francisco javier Garcia sancho martin <\/li>\n<li>magdalena Heras fortuny (vocal)<\/li>\n<li>diego Alvarez de la rosa rodriguez (vocal)<\/li>\n<li>eva Delpon mosquera (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Alejandro Moreno Dom\u00ednguez En este trabajo hemos empleado preparaciones de tres lechos vasculares con diferentes caracter\u00edsticas: arteria 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