{"id":94349,"date":"2018-03-11T10:14:01","date_gmt":"2018-03-11T10:14:01","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/caracterizacion-de-protea%c2%adnas-con-actividad-antifungica-producidas-por-penicillium-chrysogenum\/"},"modified":"2018-03-11T10:14:01","modified_gmt":"2018-03-11T10:14:01","slug":"caracterizacion-de-protea%c2%adnas-con-actividad-antifungica-producidas-por-penicillium-chrysogenum","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/extremadura\/caracterizacion-de-protea%c2%adnas-con-actividad-antifungica-producidas-por-penicillium-chrysogenum\/","title":{"rendered":"Caracterizaci\u00f3n de prote\u00ednas con actividad antif\u00fangica producidas por penicillium chrysogenum"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Andrea Rodr\u00edguez Mart\u00edn <\/strong><\/h2>\n<p>Las condiciones ambientales en que se procesan o se almacenan diversos tipos de alimentos favorecen el desarrollo en su superficie de mohos que tienen la capacidad de adaptarse y desarrollarse en sustratos muy diversos. En productos c\u00e1rnicos madurados y quesos es frecuente el desarrollo una poblaci\u00f3n f\u00fangica superficial que puede tener efectos deseables, ya que contribuyen en gran medida a la formaci\u00f3n del sabor, aroma o textura del producto acabado. Pero el desarrollo de mohos no siempre es deseable en alimentos. Muchos mohos son alterantes, llevando al deterioro de las caracter\u00edsticas sensoriales de los alimentos. No obstante, el aspecto m\u00e1s preocupante respecto del desarrollo de una poblaci\u00f3n f\u00fangica en alimentos es su capacidad para producir micotoxinas. existen numerosos mecanismos para controlar el desarrollo microbiano en distintos tipos de alimentos, incluyendo m\u00e9todos f\u00edsicos y qu\u00edmicos. Estos tratamientos resultan eficaces para evitar el desarrollo de mohos en determinados alimentos, pero no son adecuados para otros productos como los madurados, donde la presencia de ciertos mohos es beneficiosa y adem\u00e1s la aplicaci\u00f3n de fungicidas est\u00e1 limitada. Una posible soluci\u00f3n en este tipo de alimentos ser\u00eda el empleo de prote\u00ednas antif\u00fangicas que evitaran el desarrollo de mohos indeseables y que a la vez permitieran el crecimiento de mohos beneficiosos en los productos madurados. en estudios previos se seleccionaron dos cepas no toxig\u00e9nicas de p. Chrysogenum, rp42c y as51d, procedentes de jam\u00f3n curado, por su capacidad para inhibir el desarrollo de mohos toxig\u00e9nicos frecuentes en alimentos. Adem\u00e1s, se purificaron dos prote\u00ednas con actividad antif\u00fangica, pgafp y pgchp a partir de rp42c y as51d, respectivamente. el objetivo fundamental de este trabajo ha sido la caracterizaci\u00f3n de las dos prote\u00ednas pgafp y pgchp. Esta caracterizaci\u00f3n se ha basado en: la determinaci\u00f3n de sus secuencias aminoac\u00eddicas, la obtenci\u00f3n de las secuencias de los genes que las codifican; la evaluaci\u00f3n preliminar de su toxicidad; el estudio de la influencia de diversos tratamientos sobre la estabilidad de las prote\u00ednas y el efecto sobre la actividad antif\u00fangica de compuestos com\u00fanmente encontrados en alimentos.  pese a que tanto pgafp como pgchp son prote\u00ednas con efecto antif\u00fangico, han resultado ser muy diferentes en cuanto a sus pesos moleculares, puntos isoel\u00e9ctricos y secuencias aminoac\u00eddicas. Pgafp tiene un peso molecular de 6,5 kda, un punto isoel\u00e9ctrico determinado previamente de 9,2, y no posee glicosilaciones pese a que  estudios preliminares apuntaban a que presentaba esta modificaci\u00f3n. Este hecho se confirm\u00f3 con la obtenci\u00f3n de la secuencia del gen que codifica la prote\u00edna y la consiguiente determinaci\u00f3n de la secuencia aminoac\u00eddica deducida. Pgchp sin embargo, mostr\u00f3 tener seis isoformas glicosiladas con pesos moleculares comprendidos entre 30 y 31 kda, separados por una masa de 162 da que podr\u00eda corresponder a un residuo de manosa o galactosa. Adem\u00e1s, la secuencia deducida del gen permiti\u00f3 encontrar dos posibles sitios de glicosilaci\u00f3n (asn-phe-thr y asn-asp-cys) y la presencia de cadenas gluc\u00eddicas se demostr\u00f3 mediante deglicosilaciones enzim\u00e1ticas. Pgchp adem\u00e1s present\u00f3 un punto isoel\u00e9ctrico cercano a 5, por lo que la prote\u00edna no es cati\u00f3nica. las secuencias obtenidas de los genes pgafp y pgchp que codifican pgafp y pgchp tuvieron un tama\u00f1o de 276 y 912 pb, que codifican 92 y 304 amino\u00e1cidos, respectivamente. Adem\u00e1s, estos genes presentaron varios intrones peque\u00f1os con marcadores t\u00edpicos de intrones f\u00fangicos.  la obtenci\u00f3n de las secuencias aminoac\u00eddicas permiti\u00f3 encontrar prote\u00ednas con cierta similitud en su estructura primaria. As\u00ed, pgafp present\u00f3 un 79% de homolog\u00eda con la prote\u00edna anafp de a. Niger y pgchp result\u00f3 tener cerca del 60% de similitud con la familia de hidrolasas gh-75 compuesta por quitosanasas principalmente f\u00fangicas. Tanto pgafp como pgchp presentan en su secuencia aminoac\u00eddica deducida una parte que corresponde a un p\u00e9ptido se\u00f1al necesario para que ambas prote\u00ednas sean secretadas al medio extracelular. Adem\u00e1s pgafp, al igual que anafp y otras prote\u00ednas con estructura primaria parecida, presenta una prosecuencia, que parece mantener la prote\u00edna inactiva para no causar da\u00f1o a su moho productor, hasta que este fragmento es eliminado durante su secreci\u00f3n.  la actividad antif\u00fangica de pgafp y de pgchp se inhibe por altas concentraciones (100 mm) de ciertos cationes, especialmente los divalentes ca2+ y mg2+. Al igual que lo propuesto para otras prote\u00ednas como las defensinas, el mecanismo de acci\u00f3n de pgchp y pgafp podr\u00eda basarse en la existencia de receptores espec\u00edficos en las membranas de los mohos sensibles y ausentes en los mohos resistentes. Los cationes podr\u00edan saturar estos receptores espec\u00edficos e impedir que las prote\u00ednas se unieran a ellos y ejercieran su acci\u00f3n antif\u00fangica. pgchp muestra actividad hidrol\u00edtica sobre quitos\u00e1n, lo que junto a la homolog\u00eda de su secuencia aminoac\u00eddica con otras quitosanasas f\u00fangicas confirma que pertenece a este grupo de enzimas. Esta capacidad de pgchp para degradar quitos\u00e1n puede hacer que su espectro de inhibici\u00f3n incluya a hongos con quitos\u00e1n en su pared celular, como los g\u00e9neros rhizopus y mucor, alterantes habituales en alimentos madurados. Adem\u00e1s, las quitosanasas son utilizadas en la industria para la degradaci\u00f3n de caparazones de moluscos, as\u00ed como para la obtenci\u00f3n de pol\u00edmeros de quitos\u00e1n, de alto valor como protectores frente a pat\u00f3genos en alimentos, inhibidores de micotoxinas, purificadores de agua, etc.  por otro lado, es necesario demostrar la inocuidad antes de proponer la aplicaci\u00f3n de cualquier nueva prote\u00edna en alimentos. Aunque ser\u00e1 necesario ampliar estos estudios, pgafp y pgchp no mostraron evidencias de toxicidad sobre gl\u00f3bulos rojos y larvas de artemia salina a concentraciones superiores a las que poseen actividad antif\u00fangica.  de forma general y como paso previo a la aplicaci\u00f3n de una prote\u00edna a nivel industrial, resulta de gran importancia garantizar que la actividad antif\u00fangica se mantiene en presencia de determinados compuestos que puedan estar presentes en el producto donde se vaya a aplicar. Adicionalmente el efecto de ciertos tratamientos a temperaturas o phs extremos puede condicionar tambi\u00e9n sus posibles aplicaciones. ambas prote\u00ednas pgafp y pgchp mostraron ser estables a altas temperaturas, permaneciendo activas tras ser sometidas a 100 \u00c2\u00bac 15 minutos y 80 \u00c2\u00bac 20 minutos, respectivamente. Pgafp adem\u00e1s mostr\u00f3 ser estable a valores de ph entre 1 y 12.  la actividad antif\u00fangica de pgafp y pgchp se mantuvo en presencia de altas concentraciones (100 mm) de sodio y potasio, lo que puede ser de gran inter\u00e9s en alimentos madurados, donde abunda el cloruro s\u00f3dico y puede haber otras sales de sodio y potasio. Los quelantes edta y egta no tuvieron un gran impacto en la actividad antif\u00fangica de pgchp y pgafp, mientras que el fosfato s\u00f3dico a alta concentraci\u00f3n (100 mm) s\u00ed pudo inhibir esta actividad. Los detergentes tambi\u00e9n inhibieron la actividad antif\u00fangica de pgchp, pero pgafp se mantuvo activa a concentraciones de tween 20 o de tween 80 m\u00e1s altas a las empleadas en los alimentos.  en definitiva, pgafp y pgchp han mostrado alta estabilidad, han resultado ser inocuas en los ensayos realizados y resisten componentes com\u00fanmente encontrados en alimentos. Aunque es necesario profundizar en su estudio, estas prote\u00ednas y las cepas de p. Chrysogenum que las producen muestran caracter\u00edsticas adecuadas para su utilizaci\u00f3n frente a mohos alterantes y toxig\u00e9nicos en alimentos crudos madurados.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Caracterizaci\u00f3n de prote\u00ednas con actividad antif\u00fangica producidas por penicillium chrysogenum<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Caracterizaci\u00f3n de prote\u00ednas con actividad antif\u00fangica producidas por penicillium chrysogenum <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Andrea Rodr\u00edguez Mart\u00edn <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Extremadura<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 23\/06\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Raquel Acosta Guerrero<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: pablo Hernandez cruza <\/li>\n<li>vicente Sanchis almenar (vocal)<\/li>\n<li>susan Liddell (vocal)<\/li>\n<li>agustin Ari\u00f1o moneva (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Andrea Rodr\u00edguez Mart\u00edn Las condiciones ambientales en que se procesan o se almacenan diversos tipos de alimentos 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