{"id":94370,"date":"2018-03-11T10:14:06","date_gmt":"2018-03-11T10:14:06","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/genetic-dissection-of-type-iii-secretion-system-regulation-in-pseudomonas-syringae-pv-phaseolicola\/"},"modified":"2018-03-11T10:14:06","modified_gmt":"2018-03-11T10:14:06","slug":"genetic-dissection-of-type-iii-secretion-system-regulation-in-pseudomonas-syringae-pv-phaseolicola","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/malaga\/genetic-dissection-of-type-iii-secretion-system-regulation-in-pseudomonas-syringae-pv-phaseolicola\/","title":{"rendered":"Genetic dissection of type iii secretion system regulation in pseudomonas syringae pv. phaseolicola."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Inmaculada Ortiz Martin <\/strong><\/h2>\n<p>Pseudomonas syringae es una bacteria fitopat\u00f3gena gram-negativa ampliamente extendida en la naturaleza, capaz de colonizar una gran variedad de hospedadores. P. Syringae es responsable de la inducci\u00f3n, en plantas resistentes, de una respuesta localizada de muerte celular programada, que determina el fallo de la infecci\u00f3n (hr), as\u00ed como de la patog\u00e9nesis en plantas susceptibles. En estos procesos participan diversos factores de virulencia entre los que se incluye el sistema de secreci\u00f3n tipo iii (t3ss). El an\u00e1lisis molecular de la contribuci\u00f3n de cada factor en el proceso de virulencia, as\u00ed como de las relaciones funcionales que existen entre ellos, es esencial para comprender la patog\u00e9nesis de p. Syringae. Con frecuencia, el estudio de la funci\u00f3n de un gen en un proceso tan complejo, como es el proceso de infecci\u00f3n, requiere del an\u00e1lisis gen\u00e9tico de mutantes m\u00faltiples, y el m\u00e9todo de intercambio al\u00e9lico es el m\u00e1s utilizado en bacterias para obtener dichas estirpes. En pseudomonas y en otras bacterias no ent\u00e9ricas, este m\u00e9todo resulta muy lento y laborioso, ya que, para generar mutantes m\u00faltiples, cada pl\u00e1smido suicida utilizado en la obtenci\u00f3n de un mutante sencillo por intercambio al\u00e9lico, se ha de construir empleando distintos marcadores de resistencia a antibi\u00f3ticos, con el fin de poder hacer todas las posibles doble o m\u00faltiples combinaciones de mutantes sobre el mismo fondo gen\u00e9tico. En este trabajo, hemos llevado a cabo una modificaci\u00f3n del m\u00e9todo para acelerar todo el proceso de generaci\u00f3n de mutantes m\u00faltiples, el cual implica la utilizaci\u00f3n de pl\u00e1smidos derivados del vector suicida pkas32. Para validar el m\u00e9todo generamos diferentes combinaciones de mutaciones en genes del sistema de secreci\u00f3n tipo iii en p. Syringae. Y adem\u00e1s comprobamos la estabilidad y organizaci\u00f3n gen\u00e9tica de las estirpes obtenidas cuando crecen en cultivo in vitro o en la planta. los t3sss son sistemas de secreci\u00f3n complejos y especializados que se componen de aproximadamente 20 prote\u00ednas codificadas en el locus hrp\/hrc (hypersensitive response and pathogenesis\/ hypersensitive response conserved). Los genes hrp\/hrc se organizan en operones que pueden localizarse tanto en un pl\u00e1smido como en el cromosoma bacteriano. La expresi\u00f3n del t3ss se induce en la planta en respuesta a factores medioambientales o propios del hospedador. En este proceso participan cuatro activadores transcripcionales: hrpr y hrps, que constituyen un sistema de regulaci\u00f3n de dos componentes del tipo ntrc, que activa la expresi\u00f3n de hrpl, un factor a alternativo que, junto con el factor \u00c2\u00bf54 o rpon, activa la expresi\u00f3n de los genes hrp\/hrc. Adicionalmente, la prote\u00edna hrpa, que es la unidad estructural del pilus hrp, ha sido identificada como necesaria para la expresi\u00f3n de los genes hrpr\/s. Por otra parte, se ha descrito que la expresi\u00f3n de los genes hrp\/hrc est\u00e1 regulada negativamente por la proteasa lon en medio rico, y por hrpv en condiciones de inducci\u00f3n. Hrpv se une a hrps y a hrpg. Este \u00faltimo act\u00faa como un supresor de la represi\u00f3n ejercida por hrpv sobre la expresi\u00f3n de los genes hrp\/hrc. Las funciones reguladoras de estas prote\u00ednas se han identificado en diferentes patovares usando condiciones de inducci\u00f3n in vitro y aplicando una metodolog\u00eda variada. en esta tesis, examinamos el papel que desempe\u00f1an hrpl, gaca, hrpa, lon y hrpv en la patog\u00e9nesis de p. Syringae pv phaseolicola (pph), analizando de la expresi\u00f3n in vitro e in planta mediante el uso de pcr a tiempo real, \u00edndices de competitividad y otros ensayos, en mutantes sencillos y dobles, y en estirpes que expresan ect\u00f3picamente estos reguladores. Nuestros resultados indican: (i) hrpl act\u00faa como un regulador general en la virulencia de pph, que tambi\u00e9n activa determinantes de virulencia independientes del t3ss y reprime la funci\u00f3n flagelar, (\u00c2\u00a1i) gaca modula la expresi\u00f3n de hrpl y su contribuci\u00f3n en virulencia es totalmente dependiente de hrpl, (iii) en medio rico existe una expresi\u00f3n basal de los genes hrp\/hrc independiente de hrpl cuya funci\u00f3n puede ser la de mantener el sistema preparado para ser activado r\u00e1pidamente tras el contacto con la planta, (iv) hrpa regula positivamente la expresi\u00f3n de los genes hrp\/hm y es esencial para la inducci\u00f3n de la expresi\u00f3n del oper\u00f3n hrpz, (v) lon regula negativamente la expresi\u00f3n de los genes hrp\/hrc en todas las condiciones, probablemente degradando la prote\u00edna hrpr, (vi) hrpv reprime la expresi\u00f3n del t3ss en todas las condiciones, (vii) hrpt contribuye en la regulaci\u00f3n negativa de la expresi\u00f3n de los genes hrp\/hrc, y (viii) hrpg posee un papel en la regulaci\u00f3n de la expresi\u00f3n del oper\u00f3n hrpc que es independiente de hrpv. Finalmente, discutimos la implicaci\u00f3n biol\u00f3gica de estos resultados y proponemos un modelo de regulaci\u00f3n del sistema teniendo en cuenta las distintas condiciones en las que la bacteria se encuentra.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Genetic dissection of type iii secretion system regulation in pseudomonas syringae pv. phaseolicola.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Genetic dissection of type iii secretion system regulation in pseudomonas syringae pv. phaseolicola. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Inmaculada Ortiz Martin <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 M\u00e1laga<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 23\/06\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Carmen Rosario Beuzon Lopez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: josep Casadesus pursals <\/li>\n<li>john w. Wansfield (vocal)<\/li>\n<li>Jes\u00fas Murillo Martinez (vocal)<\/li>\n<li>richard Thwaites (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Inmaculada Ortiz Martin Pseudomonas syringae es una bacteria fitopat\u00f3gena gram-negativa ampliamente extendida en la naturaleza, capaz de [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[38249,36606,7834],"tags":[194545,194544,38251,194546,9514,194547],"class_list":["post-94370","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-bacterias","category-biologia-molecular-de-microorganismos","category-malaga","tag-carmen-rosario-beuzon-lopez","tag-inmaculada-ortiz-martin","tag-jesus-murillo-Martinez","tag-john-w-wansfield","tag-josep-casadesus-pursals","tag-richard-thwaites"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/94370","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=94370"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/94370\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=94370"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=94370"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=94370"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}