{"id":94498,"date":"2018-03-11T10:14:14","date_gmt":"2018-03-11T10:14:14","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-bioqua%c2%admico-y-fisiopatologico-de-la-itih4-una-nueva-protea%c2%adna-de-fase-aguda-positiva-en-la-especie-bovina\/"},"modified":"2018-03-11T10:14:14","modified_gmt":"2018-03-11T10:14:14","slug":"estudio-bioqua%c2%admico-y-fisiopatologico-de-la-itih4-una-nueva-protea%c2%adna-de-fase-aguda-positiva-en-la-especie-bovina","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica\/estudio-bioqua%c2%admico-y-fisiopatologico-de-la-itih4-una-nueva-protea%c2%adna-de-fase-aguda-positiva-en-la-especie-bovina\/","title":{"rendered":"Estudio bioqu\u00edmico y fisiopatol\u00f3gico de la itih4, una nueva prote\u00edna de fase aguda positiva en la especie bovina"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Marta Andr\u00e9s Coduras <\/strong><\/h2>\n<p>Estado de la cuesti\u00f3n:  las prote\u00ednas de fase aguda (pfa) son prote\u00ednas plasm\u00e1ticas cuya concentraci\u00f3n se altera significativamente en enfermedades infecciosas y en los procesos inflamatorios. La medida de la concentraci\u00f3n de estas prote\u00ednas en suero o plasma se utiliza ya como m\u00e9todo para el seguimiento de la salud y del bienestar en diferentes especies, inclu\u00edda la humana. El equipo de la universidad de zaragoza es pionero en esta investigaci\u00f3n, y ha estudiado extensamente la respuesta de pfa. Resultado de este estudio, ha sido la caracterizaci\u00f3n de una nueva prote\u00edna de fase aguda, llamada itih4 (cadena pesada h4 de la familia de inhibidores inter-alfa), cuya funci\u00f3n biol\u00f3gica es todav\u00eda desconocida.  objetivos y metodolog\u00eda:  los objetivos concretos a realizar en este trabajo se describen a continuaci\u00f3n con mayor detalle:  1.- El aislamiento y la caracterizaci\u00f3n de la itih4 bovina en muestras biol\u00f3gicas (suero y leche).  2.- La obtenci\u00f3n de antisueros y anticuerpos espec\u00edficos para la itih4 bovina y para otras pfas.  3.- Determinar si la itih4 bovina es una pfa positiva. Para ello se ha estudiado la variaci\u00f3n de la concentraci\u00f3n de la prote\u00edna en suero y leche tras la inducci\u00f3n experimental de la respuesta de fase aguda. Se ha determinado su concentraci\u00f3n durante el curso de infecciones experimentales bacterianas y v\u00edricas. Adem\u00e1s de la cuantificaci\u00f3n de la itih4, se ha determinado la concentraci\u00f3n de otras pfas bien caracterizadas en la vaca como controles de la fase aguda y tambi\u00e9n se ha analizado la respuesta de la apolipoprote\u00edna a-i, una nueva pfa negativa en el cerdo.  4.- El desarrollo de m\u00e9todos de medida eficaces como la inmunodifusi\u00f3n radial y el elisa para la cuantificaci\u00f3n de la prote\u00edna itih4 en suero y leche.  5.- Medida de la concentraci\u00f3n de la itih4 en leche de vacas afectadas de mastitis.  6.- El an\u00e1lisis de la expresi\u00f3n de la itih4 y de la apolipoprote\u00edna a-i en c\u00e9lulas som\u00e1ticas de leche y tejidos bovinos (rt-pcr, microscop\u00eda confocal).  las muestras de campo se obtienen a trav\u00e9s de la colaboraci\u00f3n de nuestro grupo con el dr. Javier gallart (a.I.L.A) y el dr. Juan marco (departamento de sanidad del gobierno vasco). Se pretende adem\u00e1s analizar la respuesta de itih4 en otras patolog\u00edas bovinas, utilizando modelos experimentales, como el s\u00edndrome respiratorio bovino, en colaboraci\u00f3n con el laboratorio del dr. P. Heegaard del danish veterinary institute, copenhague (dinamarca) y en mastitis, en colaboraci\u00f3n con la dra. S. Py\u00ed\u00b6r\u00ed\u00a4la de la universidad de helsinki (finlandia).  conclusiones  de los resultados obtenidos en el presente estudio se deducen las siguientes conclusiones principales:  1.- Se ha aislado y caracterizado la prote\u00edna itih4 bovina de suero y leche. El protocolo de aislamiento de la itih4 basado en el uso de cromatograf\u00edas de afinidad ha resultado ser m\u00e1s eficaz que el basado en cromatograf\u00edas convencionales.  2.- Se han desarrollado dos procedimientos para la cuantificaci\u00f3n de la itih4 en suero y leche. El primero es un m\u00e9todo inmunoqu\u00edmico (inmunodifusi\u00f3n radial) y el segundo es inmunoenzim\u00e1tico, un elisa tipo sandwich.  3.- El m\u00e9todo elisa anterior est\u00e1 basado en el uso de anticuerpos monoclonales como anticuerpos de captura y anticuerpos policlonales marcados con peroxidasa como anticuerpos detectores. El procedimiento permite determinar la itih4 tanto en suero como en leche, en un rango de 0,027-0,85 \u00c2\u00b5g\/ml, con un coeficiente de variaci\u00f3n interno y externo de 9 y 12% respectivamente.  4.- La concentraci\u00f3n de la itih4 ha sido determinada en el suero y leche de vacas sometidas a diferentes infecciones experimentales bacterianas y v\u00edricas. En todos los casos, a los pocos d\u00edas del est\u00edmulo la concentraci\u00f3n de la prote\u00edna en suero experimenta un aumento de hasta doce veces su concentraci\u00f3n inicial en los animales m\u00e1s afectados, comport\u00e1ndose como una pfa positiva moderada, mientras que en leche hay aumentos significativos de su concentraci\u00f3n a las pocas horas del est\u00edmulo. La variaci\u00f3n de los niveles de la prote\u00edna muestra correlaci\u00f3n con la sintomatolog\u00eda cl\u00ednica de las vacas y con los aumentos en la concentraci\u00f3n de otras pfas bovinas bien caracterizadas, como hpt y saa. La apo a-i ha sido cuantificada tambi\u00e9n en estos modelos experimentales. La concentraci\u00f3n s\u00e9rica de esta prote\u00edna se redujo hasta un 20% respecto a su concentraci\u00f3n inicial, comport\u00e1ndose como una pfa negativa. En la leche, al igual que la itih4, aument\u00f3 mucho su concentraci\u00f3n pocas horas despu\u00e9s de la infecci\u00f3n.  5.- La determinaci\u00f3n mediante elisa de la concentraci\u00f3n de la itih4 en leche de vacas con mastitis en diferente grado de afectaci\u00f3n, puede servir para la detecci\u00f3n temprana de la enfermedad, complementando la informaci\u00f3n obtenida por los tests actuales.  6.- Se ha estudiado por primera vez la expresi\u00f3n de la itih4 y de la apo a-i en c\u00e9lulas som\u00e1ticas de leche y en gl\u00e1ndula mamaria. En todas las muestras analizadas, se detectaron mrnas de itih4 y apo a-i, excepto en las c\u00e9lulas som\u00e1ticas de leche de vaca sana, en las que no hubo expresi\u00f3n de itih4.   7.- Se ha realizado un estudio de la inmunolocalizaci\u00f3n de la itih4 bovina por microscop\u00eda confocal de fluorescencia en c\u00e9lulas de leche procedentes de vacas sanas y vacas afectadas de mastitis. El marcaje de la itih4 en c\u00e9lulas de leche de vacas enfermas fue m\u00e1s intenso y estuvo repartido por toda la c\u00e9lula, mientras que el marcaje de la prote\u00edna en c\u00e9lulas de leche de vacas sanas, fue menos intenso y se concentr\u00f3 mayoritariamente en el citoplasma.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio bioqu\u00edmico y fisiopatol\u00f3gico de la itih4, una nueva prote\u00edna de fase aguda positiva en la especie bovina<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio bioqu\u00edmico y fisiopatol\u00f3gico de la itih4, una nueva prote\u00edna de fase aguda positiva en la especie bovina <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Marta Andr\u00e9s Coduras <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Zaragoza<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 26\/06\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Mar\u00eda  Angeles Alava Martinez De Contrasta<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: javier Naval iraberri <\/li>\n<li>Juan Marco melero (vocal)<\/li>\n<li>matilde Pi\u00f1eiro pardo (vocal)<\/li>\n<li>anna Mar\u00eda Bassols teixido (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Marta Andr\u00e9s Coduras Estado de la cuesti\u00f3n: las prote\u00ednas de fase aguda (pfa) son prote\u00ednas plasm\u00e1ticas cuya 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