{"id":94519,"date":"2018-03-11T10:14:14","date_gmt":"2018-03-11T10:14:14","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/cuantificacion-absoluta-de-peptidos-y-fosfopeptidos-mediante-la-integracion-de-la-espectrometria-de-masas-elemental-y-molecular\/"},"modified":"2018-03-11T10:14:14","modified_gmt":"2018-03-11T10:14:14","slug":"cuantificacion-absoluta-de-peptidos-y-fosfopeptidos-mediante-la-integracion-de-la-espectrometria-de-masas-elemental-y-molecular","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/quimica-analitica\/cuantificacion-absoluta-de-peptidos-y-fosfopeptidos-mediante-la-integracion-de-la-espectrometria-de-masas-elemental-y-molecular\/","title":{"rendered":"Cuantificaci\u00f3n absoluta de p\u00e9ptidos y fosfop\u00e9ptidos mediante la integraci\u00f3n de la espectrometr\u00eda de masas elemental y molecular"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Ana Pereira Navaza <\/strong><\/h2>\n<p>La prote\u00f3mica es la ciencia que estudia el conjunto completo de prote\u00ednas, que es lo que constituye el proteoma, expresadas a partir de un genoma concreto. Se calcula que en el ser humano el n\u00famero prote\u00ednas supera el mill\u00f3n. Adem\u00e1s, est\u00e1 ampliamente reconocido que las prote\u00ednas son las que realmente desarrollan las funciones vitales y forman la mayor\u00eda de los procesos celulares. una de las principales causas de la variabilidad del proteoma, y por tanto de su complejidad, son las modificaciones post-traduccionales (ptms). La fosforilaci\u00f3n es una de las m\u00e1s importantes ptms siendo un proceso din\u00e1mico y reversible controlado estrictamente por la acci\u00f3n combinada de prote\u00ednas (enzimas) quinasas y fosfatasas, que catalizan la incorporaci\u00f3n y eliminaci\u00f3n de un grupo fosfato a las prote\u00ednas, respectivamente, en respuesta a est\u00edmulos celulares o medioambienales. actualmente, existe un gran inter\u00e9s en la mejora y desarrollo de estrategias que faciliten el estudio cualitativo y cuantitativo de las (fosfo)prote\u00ednas. En los \u00faltimos a\u00f1os, gracias al desarrollo de los m\u00e9todos de ionizaci\u00f3n suave, el esi y maldi, la espectrometr\u00eda de masas molecular se ha convertido en el m\u00e9todo m\u00e1s importante para el an\u00e1lisis y caracterizaci\u00f3n de p\u00e9ptidos y prote\u00ednas. A pesar de que la identificaci\u00f3n de las (fosfo)prote\u00ednas es importante en el conocimiento de sus funciones biol\u00f3gicas, la cuantificaci\u00f3n absoluta de las mismas es cr\u00edtica para la interpretaci\u00f3n de los procesos celulares. Sin embargo, \u00e9sta cuantificaci\u00f3n absoluta es menos frecuente y los m\u00e9todos empleados hasta el momento requieren, mayoritariamente, la s\u00edntesis qu\u00edmica de cada (fosfo)p\u00e9ptido. por otra parte, la se\u00f1al cuantitativa proporcionada por la espectrometr\u00eda de masas elemental, icpms, puede jugar un papel fundamental en la prote\u00f3mica cuantitativa. El icpms es una fuente de ionizaci\u00f3n robusta, cuya se\u00f1al es directamente proporcional al n\u00famero de \u00e1tomos del elemento presentes en la muestra, es decir, la se\u00f1al es independiente de la estructura de la mol\u00e9cula y de la matriz en la que se encuentre. As\u00ed, la determinaci\u00f3n de los hetero\u00e1tomos detectables por icp presentes de forma natural en las prote\u00ednas (como puede ser el caso del p en las fosfoprote\u00ednas) permite su cuantificaci\u00f3n absoluta a niveles traza. Por ello,  en los \u00faltimos a\u00f1os, los procedimientos de marcaje con hetero\u00e1tomos (labelling) se han convertido en herramientas muy importantes como estrategias para la cuantificaci\u00f3n absoluta de cualquier prote\u00edna con el icpms.   como consecuencia de lo expuesto, el objetivo general de la presente tesis doctoral fue: el desarrollo de metodolog\u00edas anal\u00edticas, basadas en el empleo de t\u00e9cnicas de espectrometr\u00eda de masas elemental y molecular, que permitan la determinaci\u00f3n absoluta, exacta y precisa de p\u00e9ptidos y fosfop\u00e9ptidos. as\u00ed, en el primer cap\u00edtulo se llev\u00f3 a cabo  el desarrollo de un m\u00e9todo exacto y preciso para la cuantificaci\u00f3n absoluta de fosfop\u00e9ptidos mediante caphplc acoplado a un icpms y empleando como patr\u00f3n de cuantificaci\u00f3n un est\u00e1ndar comercial de p. El desarrollo instrumental propuesto se aplic\u00f3 a la cuantificaci\u00f3n de los diferentes fosfop\u00e9ptidos tr\u00edpticos presentes en muestras de case\u00edna, que fueron identificados inequ\u00edvocamente con el an\u00e1lisis en paralelo por caphplc-esi-tofms. en el segundo cap\u00edtulo se aplic\u00f3 la estrategia desarrollada para la evaluaci\u00f3n de procesos de enriquecimiento de fosfop\u00e9ptidos con cartuchos de tio2. Los resultados obtenidos se compararon con el an\u00e1lisis en paralelo con maldi-tofms. A continuaci\u00f3n, en el tercer cap\u00edtulo se emple\u00f3 la elevada precisi\u00f3n de la metodolog\u00eda desarrollada para hacer posible la realizaci\u00f3n de los estudios cin\u00e9ticos de fosforilaci\u00f3n\/defosforilaci\u00f3n m\u00e1s detallados publicados hasta la fecha. en el cuarto cap\u00edtulo, se llev\u00f3 a cabo la optimizaci\u00f3n  de una estrategia innovadora de enriquecimiento de fosfop\u00e9ptidos con una columna multimodo y detecci\u00f3n en l\u00ednea por esims. La optimizaci\u00f3n se llev\u00f3 a cabo con p\u00e9ptidos sint\u00e9ticos y a continuaci\u00f3n se evalu\u00f3 la eficacia del enriquecimiento en un digerido tr\u00edptico de case\u00edna. Por \u00faltimo se aplic\u00f3 al estudio de mezclas de prote\u00edna no fosforilada con trazas de prote\u00edna fosforilada. finalmente, en la \u00faltima parte de la tesis se desarroll\u00f3 una estrategia espec\u00edfica y cuantitativa de marcaje directo de p\u00e9ptidos con iodo para hacerlos detectables por icpms (labelling). La metodolog\u00eda desarrollada se valid\u00f3 con la cuantificaci\u00f3n de un material de referencia del instituto nacional de patrones y tecnolog\u00eda de los eeuu (nist), constitu\u00eddo por tres p\u00e9ptidos certificados. Adem\u00e1s se evalu\u00f3 su potencial para la cuantificaci\u00f3n absoluta y exacta de prote\u00ednas mediante el an\u00e1lisis del digerido tr\u00edptico de la  \u00edY-case\u00edna.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Cuantificaci\u00f3n absoluta de p\u00e9ptidos y fosfop\u00e9ptidos mediante la integraci\u00f3n de la espectrometr\u00eda de masas elemental y molecular<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Cuantificaci\u00f3n absoluta de p\u00e9ptidos y fosfop\u00e9ptidos mediante la integraci\u00f3n de la espectrometr\u00eda de masas elemental y molecular <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Ana Pereira Navaza <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Oviedo<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 26\/06\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Alfredo Sanz Medel<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: carmen Camara rico <\/li>\n<li>Jos\u00e9 ignacio Garc\u00eda alonso (vocal)<\/li>\n<li>tamara carmen Garcia barrera (vocal)<\/li>\n<li>Juan  Jos\u00e9 Calvete chornet (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Ana Pereira Navaza La prote\u00f3mica es la ciencia que estudia el conjunto completo de prote\u00ednas, que es 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