{"id":94826,"date":"2009-03-07T00:00:00","date_gmt":"2009-03-07T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/aproximacion-proteomica-al-estudio-del-estres-nitrosativo-en-varios-modelos-experimentales-de-lesion-hepatocelular\/"},"modified":"2009-03-07T00:00:00","modified_gmt":"2009-03-07T00:00:00","slug":"aproximacion-proteomica-al-estudio-del-estres-nitrosativo-en-varios-modelos-experimentales-de-lesion-hepatocelular","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/cordoba\/aproximacion-proteomica-al-estudio-del-estres-nitrosativo-en-varios-modelos-experimentales-de-lesion-hepatocelular\/","title":{"rendered":"Aproximacion proteomica al estudio del estres nitrosativo en varios modelos experimentales de lesion hepatocelular"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Laura Mar\u00eda Lopez Sanchez <\/strong><\/h2>\n<p>La s-nitrosilaci\u00f3n es una modificaci\u00f3n postraduccional que podr\u00eda jugar un importante papel en distintas patolog\u00edas. En el h\u00edgado se ha demostrado tanto un efecto citot\u00f3xico como citoprotector para el \u00f3xido n\u00edtrico (no), y la s-nitrosilaci\u00f3n de prote\u00ednas puede estar implicada en algunos de los mecanismos responsables de este doble papel. El objetivo del presente estudio fue determinar el papel del estr\u00e9s nitrosativo intracelular e identificar mediante una aproximaci\u00f3n prote\u00f3mica las posibles prote\u00ednas s-nitrosiladas en la muerte celular inducida por el hepatot\u00f3xico dgalactosamina o por la alteraci\u00f3n de la homeostasis de s-nitrosotioles (sno) en hepatocitos humanos, y en la lesi\u00f3n hepatocelular durante colestasis experimental en ratas y su citoprotecci\u00f3n por \u00e1cido ursodesoxic\u00f3lico conjugado con taurina (tudca) o por el inhibidor de la s\u00edntesis de no, smetilisotiourea (smt). M\u00e9todos: la necrosis y apoptosis se valoraron mediante la liberaci\u00f3n de ldh y fragmentaci\u00f3n de dna, respectivamente. El no se determin\u00f3 midiendo nitrito y nitrato en el medio de cultivo de los hepatocitos o en el plasma de ratas. Los niveles celulares de nitrosotioles se determinaron mediante quimioluminiscencia, la actividad nitrosoglutati\u00f3n reductasa (gsnor) se determin\u00f3 espectrofotom\u00e9tricamente y los niveles de arnm del gen adh5 (gsnor) se determinaron mediante rt-pcr cuantitativa a tiempo real. Las prote\u00ednas nitrosiladas se marcaron utilizando el m\u00e9todo \u00abbiotin-switch\u00bb, se detectaron con un anticuerpo anti-biotina y se purificaron con estreptavidinaagarosa. se identificaron mediante digesti\u00f3n con tripsina, desionizaci\u00f3n en matriz asistida por l\u00e1ser y tiempo de vuelo (maldi-tof) o mediante ionizaci\u00f3n con electroespray y espectrometr\u00eda de masas en t\u00e1ndem (esi-ms\/ms). Resultados y conclusiones: los resultados se\u00f1alan la importancia de la homeostasis de sno en varios modelos experimentales de lesi\u00f3n hepatocelular. La elevaci\u00f3n de los niveles celulares de sno, observada en hepatocitos humanos tratados con un hepatot\u00f3xico o en condiciones de estr\u00e9s nitrosativo, se vio acompa\u00f1ada de una alteraci\u00f3n de los par\u00e1metros de muerte celular. Adem\u00e1s, se observ\u00f3 un control preciso del contenido celular de sno cuando en los hepatocitos humanos se indujeron elevados niveles de s-nitrosoprote\u00ednas. Las enzimas gsnor y tioredoxina reductasa jugaron un papel importante en este mantenimiento de la homeostasis de los s-nitrosotioles y por tanto en la defensa frente al estr\u00e9s nitrosativo en el hepatocito. Se demostr\u00f3 tambi\u00e9n como el estr\u00e9s nitrosativo juega un papel clave en un modelo de colestasis experimental. Adem\u00e1s, el beneficio terap\u00e9utico de un inhibidor de la s\u00edntesis de no demostr\u00f3 ejercer su efecto hepatoprotector a trav\u00e9s de un restablecimiento parcial de la homeostasis de sno. Finalmente, la aproximaci\u00f3n prote\u00f3mica utilizada permiti\u00f3 la identificaci\u00f3n de varias s-nitrosoprote\u00ednas, entre las que se encontraron prote\u00ednas participantes en el metabolismo, en la preservaci\u00f3n del estado redox y en la homeostasis celular. Estos resultados proporcionan nuevos objetivos para futuras investigaciones, que sin duda facilitar\u00e1n la identificaci\u00f3n de nuevas dianas terap\u00e9uticas y el desarrollo de nuevos tratamientos para distintas dolencias hep\u00e1ticas.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Aproximacion proteomica al estudio del estres nitrosativo en varios modelos experimentales de lesion hepatocelular<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Aproximacion proteomica al estudio del estres nitrosativo en varios modelos experimentales de lesion hepatocelular <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Laura Mar\u00eda Lopez Sanchez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 C\u00f3rdoba<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 03\/07\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Antonio Rodriguez Ariza<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Jos\u00e9 Antonio Barcena ruiz <\/li>\n<li>Fernando Jos\u00e9 Corrales izquierdo (vocal)<\/li>\n<li>Juan  Rafael Mu\u00f1oz casta\u00f1eda (vocal)<\/li>\n<li>Manuel Romero g\u00f3mez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Laura Mar\u00eda Lopez Sanchez La s-nitrosilaci\u00f3n es una modificaci\u00f3n postraduccional que podr\u00eda jugar un importante papel en 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