{"id":94963,"date":"2009-08-07T00:00:00","date_gmt":"2009-08-07T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/apocarotenoides-en-la-interaccion-sexual-de-phycomyces\/"},"modified":"2009-08-07T00:00:00","modified_gmt":"2009-08-07T00:00:00","slug":"apocarotenoides-en-la-interaccion-sexual-de-phycomyces","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sevilla\/apocarotenoides-en-la-interaccion-sexual-de-phycomyces\/","title":{"rendered":"Apocarotenoides en la interacci\u00f3n sexual de phycomyces"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Silvia Polaino Orts <\/strong><\/h2>\n<p>Objetivos de la tesis \tla interacci\u00f3n sexual es el principal regulador de la producci\u00f3n de carotenos en la mayor\u00eda de los mucorales y es esencial en los procesos industriales desarrollados para producirlos con blakeslea y phycomyces.  Los compuestos qu\u00edmicos que median la sexualidad de los mucorales y activan la carotenog\u00e9nesis son derivados del caroteno \u00edY.  Esta tesis pretende ampliar el conocimiento del proceso sexual de p.\u00c2\u00a0blakesleeanus, y especialmente de la ruta metab\u00f3lica de los apocarotenoides.  cap\u00edtulo 1  apocarotenoides de phycomyces   enfoque de las investigaciones \tel estudio de los apocarotenoides conlleva la extracci\u00f3n, la separaci\u00f3n y la identificaci\u00f3n simult\u00e1nea de muchos compuestos de cultivos separados, resultantes de la siembra de esporas de una sola estirpe, y de cultivos mixtos, resultantes de la siembra de una mezcla de esporas de ambos sexos. \tpara ello utilizamos las estirpes silvestres nrrl1555, de sexo (-), y nrrl1554 y a56, de sexo (+), y los mutantes blancos c5, de sexo (-), y s342, de sexo (+).  Estos mutantes del gen carb acumulan grandes cantidades de fitoeno, pero son incapaces de producir caroteno \u00edY.  Por lo tanto no pueden tener derivados del caroteno \u00edY tales como los trisporoides.  Se toman como derivados del caroteno \u00edY (apocarotenoides) y entre ellos los trisporoides, los compuestos encontrados en cultivos de estirpes silvestres que no se encuentren en los de los mutantes carb.  Se usaron tres clases de medios s\u00f3lidos: agar m\u00ednimo, agar nutritivo y agar papa; los dos primeros se combinaron adem\u00e1s con acetato.  Estos medios se inocularon con esporas de una estirpe o de dos estirpes de sexo opuesto y se incubaron cinco d\u00edas.  Los materiales de partida para los an\u00e1lisis son extractos de los medios de cultivo obtenidos por congelaci\u00f3n, descongelaci\u00f3n y presi\u00f3n de las masas de agar.  cap\u00edtulo 2  el gen trid   introducci\u00f3n \teste cap\u00edtulo contiene el aislamiento y caracterizaci\u00f3n del gen trid de la estirpe patr\u00f3n de phycomyces blakesleeanus, responsable de la deshidrogenasa del dihidrotrisporato de metilo, que cataliza el paso del dihidrotrisporato de metilo a trisporato de metilo.  El gen trid fue el primero de la ruta biosint\u00e9tica de los \u00e1cidos trisp\u00f3ricos que se aisl\u00f3 y se secuenci\u00f3.  El prof. J. W\u00ed\u00b6stemeyer y sus colaboradores, de la universidad friedrich schiller, de jena (alemania), purificaron esa deshidrogenasa de extractos crudos de micelios de mucor mucedo de la estirpe de sexo (-) cultivados en presencia de \u00e1cidos trisp\u00f3ricos. \tpara ello fraccionaron los extractos y ensayaron la actividad enzim\u00e1tica, midiendo el nadph producido por reducci\u00f3n del cofactor nadp durante la oxidaci\u00f3n del sustrato dihidrotrisporato de metilo.  Este sustrato hab\u00eda sido obtenido por metilaci\u00f3n y reducci\u00f3n qu\u00edmica de un extracto enriquecido en \u00e1cidos trisp\u00f3ricos de un cultivo mixto de blakeslea trispora.  Con las secuencias pept\u00eddicas dise\u00f1aron dos mezclas de oligonucle\u00f3tidos que usaron como cebadores para obtener por pcr un fragmento de adn gen\u00f3mico de 0,7 kb y con \u00e9ste escrutaron una genoteca parcial.  Obtuvieron as\u00ed el gen de mucor mucedo responsable de la deshidrogenasa del dihidrotrisporato de metilo, que llamaron tdh (czempinski et al., 1996).  Los mismos cebadores permitieron obtener fragmentos del mismo gen de otros cigomicetos (parasitella parasitica, absidia glauca y blakeslea trispora). \ten los albores de este trabajo establecimos una colaboraci\u00f3n con la universidad de jena.  En las semanas anteriores a mi llegada a jena, el grupo alem\u00e1n aisl\u00f3 un fragmento de 983 pb de adn del gen hom\u00f3logo de phycomyces.  Para aislar este fragmento, utilizaron dos cebadores dise\u00f1ados a la vista de las secuencias conservadas de mucor y parasitella.  cap\u00edtulo 3  expresi\u00f3n del gen trid   introducci\u00f3n \tcomo ya dispon\u00edamos de las regiones flanqueantes, no traducidas, del gen trid, una secuencia anterior de 156 pb y otra posterior de 522 pb, nos propusimos investigar el inicio y el final de su transcripci\u00f3n.  Analizamos tambi\u00e9n el efecto de la estimulaci\u00f3n sexual sobre la transcripci\u00f3n, para ello comparamos cultivos mixtos con cultivos separados.  La expresi\u00f3n del gen en la bacteria escherichia coli permiti\u00f3 la purificaci\u00f3n de la prote\u00edna correspondiente.  cap\u00edtulo 4  evoluci\u00f3n del gen trid   introducci\u00f3n \tcaracterizado el gen trid de phycomyces\u00c2\u00a0blakesleeanus, buscamos secuencias similares en mutantes con distintas respuestas sexuales y en estirpes naturales de phycomyces aisladas por nosotros o presentes en colecciones internacionales.  Para establecer una relaci\u00f3n evolutiva entre las estirpes, comparamos estas secuencias g\u00e9nicas con las hom\u00f3logas de mucor mucedo y parasitella parasitica, ya conocidas, y con las m\u00e1s parecidas a la del gen trid que se encuentran en los genomas completos de rhizopus\u00c2\u00a0oryzae y mucor\u00c2\u00a0circinelloides.  Tambi\u00e9n comparamos el gen trid y los dem\u00e1s presuntos genes que codifican para aldocetorreductasas de p. Blakesleeanus, r. Oryzae y m. Circinelloides.  conclusiones   1. Los apocarotenoides se identifican f\u00e1cilmente por un m\u00e9todo gen\u00e9tico: est\u00e1n ausentes de los cultivos separados o mixtos de mutantes carb incapaces de producir caroteno.   2. Se han establecido condiciones y m\u00e9todos apropiados para separar los apocarotenoides.  Se han identificado veinticinco apocarotenoides; el prof. A. Fern\u00e1ndez barrero y sus colaboradores de la universidad de granada han establecido las estructuras moleculares de algunos.  Tres de ellos son nuevos para la ciencia: el trispoxano y los \u00e1cidos (2e,4e)-6-hidroxi-5-metilhexa-2,4-dienoico y (2e,4e)-6-hidroxi-2-metilhexa-2,4-dienoico.   3. La detecci\u00f3n de los \u00e1cidos hidroximetilhexadienoicos implica que el caroteno \u00edY se rompe en tres fragmentos, que son las cabezas de tres series de compuestos, los trisporoides, formada por compuestos de 18 carbonos; los monociclofarnesanos, de 15 carbonos y los dos \u00e1cidos hidroximetilhexadienoicos, de 7 carbonos.  Los compuestos de 15 carbonos no derivan de los trisporoides.   4. Los cultivos separados de tres estirpes silvestres contienen poca cantidad y escasa diversidad de apocarotenoides.  Las diferencias que se observan entre ellas se deben a su sexo y a diferencias en el fondo gen\u00e9tico.   5. El acetato y la papa, que inhiben la carotenog\u00e9nesis sexual y estimulan la formaci\u00f3n de cigosporas, presentan mecanismos de acci\u00f3n diferentes.  El primero anula la producci\u00f3n de ocho apocarotenoides y el segundo de cuatro.  Adem\u00e1s, ambos inhiben considerablemente la producci\u00f3n de un \u00e1cido trisp\u00f3rico muy abundante.  Entre estos compuestos deben hallarse los responsables de las acciones fisiol\u00f3gicas.   6. Se ha aislado y caracterizado el gen para la deshidrogenasa del dihidrotrisporato de metilo, al que llamamos trid, que cataliza el paso de dihidrotrisporato de metilo a trisporato de metilo.   7. La interacci\u00f3n sexual no estimula la transcripci\u00f3n del gen trid.   8. La reciente secuenciaci\u00f3n completa de los genomas de p. Blakesleeanus, r.\u00c2\u00a0oryzae y m. Circinelloides ha permitido identificar el gen trid y las secuencias g\u00e9nicas m\u00e1s parecidas al mismo y establecer cladogramas para estas secuencias y las de genes hom\u00f3logos ya conocidos en otros cigomicetos.   9. La caracterizaci\u00f3n molecular de las estirpes silvestres de phycomyces confirma la existencia de dos especies dentro de este g\u00e9nero: p. Blakesleeanus y p. Nitens.  Estas especies son muy distantes entre s\u00ed y muy uniformes internamente.   10. Phycomyces se encuentra m\u00e1s pr\u00f3ximo a m. Circinelloides que a r. Oryzae.  La topolog\u00eda de estas relaciones apoya la conservaci\u00f3n de la familia mucor\u00e1ceas y se opone a la creaci\u00f3n de la familia ficomicet\u00e1ceas para el g\u00e9nero phycomyces.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Apocarotenoides en la interacci\u00f3n sexual de phycomyces<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Apocarotenoides en la interacci\u00f3n sexual de phycomyces <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Silvia Polaino Orts <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Sevilla<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 08\/07\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Enrique Cerd\u00e1 Olmedo<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: alejandro Fernandez barrero <\/li>\n<li>rosa Mar\u00eda Ruiz vazquez (vocal)<\/li>\n<li>Andr\u00e9s Aguilera l\u00f3pez (vocal)<\/li>\n<li>Luis Mar\u00eda Corrochano pelaez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Silvia Polaino Orts Objetivos de la tesis la interacci\u00f3n sexual es el principal regulador de la producci\u00f3n 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