{"id":95012,"date":"2009-09-07T00:00:00","date_gmt":"2009-09-07T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/el-virus-del-mosaico-del-pepino-dulce-pepmv-desarrollo-de-un-vector-viral-y-resistencia-genetica-en-tomate\/"},"modified":"2009-09-07T00:00:00","modified_gmt":"2009-09-07T00:00:00","slug":"el-virus-del-mosaico-del-pepino-dulce-pepmv-desarrollo-de-un-vector-viral-y-resistencia-genetica-en-tomate","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/virologia\/el-virus-del-mosaico-del-pepino-dulce-pepmv-desarrollo-de-un-vector-viral-y-resistencia-genetica-en-tomate\/","title":{"rendered":"El virus del mosaico del pepino dulce (pepmv): desarrollo de un vector viral y resistencia gen\u00e9tica en tomate"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Raquel Navarro Sempere <\/strong><\/h2>\n<p>El virus del mosaico del pepino dulce (pepino mosaic virus, pepmv; g\u00e9nero potexvirus) es un virus de rna de sentido positivo que causa importantes p\u00e9rdidas econ\u00f3micas en cultivos de tomate de europa y am\u00e9rica del norte. En el presente trabajo se ha llevado a cabo una b\u00fasqueda de fuentes de resistencia natural a pepmv mediante el escrutinio de germoplasma de especies afines al tomate pertenecientes al g\u00e9nero solanum. Este estudio ha puesto de manifiesto que las fuentes de resistencia a este virus son muy escasas. De todas las entradas de solanum analizadas en este trabajo, no se encontr\u00f3 ning\u00fan caso de resistencia completa a pepmv. Tan s\u00f3lo la entrada com-2 perteneciente a la especie s. Corneliomuelleri mostr\u00f3 una respuesta heterog\u00e9nea a la infecci\u00f3n por pepmv (aislado sp13). Los resultados obtenidos tras el an\u00e1lisis de la descendencia obtenida a partir de esta entrada sugieren que en la entrada com-2 existan varios genes con relativamente peque\u00f1os efectos aditivos sobre la resistencia a pepmv-sp13, es decir, que se trate de una resistencia polig\u00e9nica o cuantitativa.  por otra parte, en el presente trabajo se ha pretendido profundizar en el conocimiento de la biolog\u00eda molecular de pepmv para llevar a cabo el desarrollo de un vector viral de expresi\u00f3n derivado de este virus. Como paso previo y necesario, se ha obtenido un clon agroinfectivo de pepmv (aislado pepmv-sp13), denominado pbpepxl6. Tras agroinfiltraci\u00f3n, pbpepxl6 es capaz de reproducir la misma sintomatolog\u00eda que el virus parental tras la inoculaci\u00f3n mec\u00e1nica sobre plantas de nicotiana benthamiana. Este clon agroinfectivo constituye una herramienta molecular indispensable que ha permitido realizar un an\u00e1lisis funcional de la prote\u00edna de la c\u00e1psida (cp). As\u00ed, mediante t\u00e9cnicas de mutag\u00e9nesis dirigida sobre el clon pbpepxl6, se han obtenido mutantes que impiden la expresi\u00f3n de la cp. En uno de ellos, denominado pbpepgfpdeltacp1, se ha sustituido el orf de la cp por el orf del gen delator de la prote\u00edna verde fluorescente (gfp), de modo que los focos de infecci\u00f3n iniciados pudieron ser visualizados mediante la detecci\u00f3n de la fluorescencia generada por la gfp. Los resultados obtenidos pusieron de manifiesto que (1) la cp no es necesaria para la multiplicaci\u00f3n de pepmv pero s\u00ed para su movimiento c\u00e9lula a c\u00e9lula, (2) es posible expresar un gen for\u00e1neo (gfp) a partir del genoma de pepmv, condici\u00f3n fundamental para el desarrollo de un vector viral y (3) el n\u00famero de focos iniciales de infecci\u00f3n a que da lugar la agroinfiltraci\u00f3n de clones derivados de pepmv es peque\u00f1o. Adicionalmente, se generaron construcciones basadas en pbpepgfpdeltacp1 a las que se les introdujo diferentes tipos de mutaciones en las regiones 5prima y 3prima terminales del orf de la gfp. Los ensayos de agroinfiltraci\u00f3n llevados a cabo con estas construcciones mostraron que la alteraci\u00f3n de dichas regiones puede afectar negativamente a la eficiencia de un potencial vector viral. Para el desarrollo de un vector viral, se generaron dos construcciones derivadas de pepmv (pbpep501 y pbpep5.128) en las que el orf de la gfp fue situado bajo el control del promotor del rna subgen\u00f3mico de la cp duplicado. Los ensayos de agroinfiltraci\u00f3n llevados a cabo con ambas construcciones mostraron la capacidad de estos vectores para expresar gfp e infectar sist\u00e9micamente plantas de n. Benthamiana. Sin embargo, se observ\u00f3 que las construcciones eran inestables in planta, pues la fluorescencia deca\u00eda dr\u00e1sticamente a pocos d\u00edas post-infiltraci\u00f3n, probablemente debido a fen\u00f3menos de recombinaci\u00f3n hom\u00f3loga. Por otro lado, estos resultados permitieron delimitar una regi\u00f3n en el genoma de pepmv que contiene todos los elementos funcionales (que act\u00faan en cis) necesarios para actuar como promotora del rna subgen\u00f3mico de la cp. Esta regi\u00f3n posee un tama\u00f1o de 112 nucle\u00f3tidos: 38 nt del extremo 3primadel orf 4 seguidos de 38 nt de la regi\u00f3n utr m\u00e1s 36 nt del extremo 5prima de la cp. A continuaci\u00f3n, con el fin de evitar duplicaciones de secuencias, se ensay\u00f3 la construcci\u00f3n pbpepgfpdeltacpch2, en la cual la gfp fue situada bajo el control del supuesto promotor del rna subgen\u00f3mico de la cp del aislado pepmv-ch2. Los resultados obtenidos con esta construcci\u00f3n demostraron que a trav\u00e9s de una secuencia control heter\u00f3loga tambi\u00e9n es posible expresar un gen for\u00e1neo desde el genoma de pepmv.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>El virus del mosaico del pepino dulce (pepmv): desarrollo de un vector viral y resistencia gen\u00e9tica en tomate<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 El virus del mosaico del pepino dulce (pepmv): desarrollo de un vector viral y resistencia gen\u00e9tica en tomate <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Raquel Navarro Sempere <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Miguel hern\u00e1ndez de elche<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 09\/07\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Miguel Angel Aranda Regules<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: fernando Ponz ascaso <\/li>\n<li>amelia S\u00e1nchez pina (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda  Jos\u00e9 Diez niclos (vocal)<\/li>\n<li>nuria Alburquerque ferrando (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Raquel Navarro Sempere El virus del mosaico del pepino dulce (pepino mosaic virus, pepmv; 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