{"id":95364,"date":"2018-03-11T10:15:19","date_gmt":"2018-03-11T10:15:19","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/eventos-celulares-y-tisulares-determinantes-en-la-formacion-reformacion-de-las-adherencias-omentales-en-un-modelo-de-adhesiogenesis-experimental\/"},"modified":"2018-03-11T10:15:19","modified_gmt":"2018-03-11T10:15:19","slug":"eventos-celulares-y-tisulares-determinantes-en-la-formacion-reformacion-de-las-adherencias-omentales-en-un-modelo-de-adhesiogenesis-experimental","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/cirugia-experimental\/eventos-celulares-y-tisulares-determinantes-en-la-formacion-reformacion-de-las-adherencias-omentales-en-un-modelo-de-adhesiogenesis-experimental\/","title":{"rendered":"Eventos celulares y tisulares determinantes en la formaci\u00f3n\/ reformaci\u00f3n de las adherencias omentales en un modelo de adhesiog\u00e9nesis experimental"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Ver\u00f3nica G\u00f3mez Gil <\/strong><\/h2>\n<p>La formaci\u00f3n adherencial peritoneal es una de las principales complicaciones que surgen tras una operaci\u00f3n quir\u00fargica en la mayor\u00eda de los pacientes y que pueden generar diversos problemas cl\u00ednicos como son obstrucci\u00f3n intestinal, dolor abdominal cr\u00f3nico, infertilidad y el incremento de los tiempos quir\u00fargicos en procedimientos posteriores. \tuna vez establecidas las adherencias, la \u00fanica medida a la que se puede recurrir es la resecci\u00f3n quir\u00fargica. Sin embargo, algunos cirujanos desaconsejan la realizaci\u00f3n de la adhesiolisis debido al elevado porcentaje de pacientes en los que se produce la reformaci\u00f3n adherencial, pudiendo empeorar los s\u00edntomas.  \tcomo hip\u00f3tesis de trabajo, nos planteamos si era posible definir el momento m\u00e1s adecuado para la resecci\u00f3n de las adherencias a partir de las caracter\u00edsticas tisulares del tejido que las constituye, previniendo su reformaci\u00f3n. Para ello, dise\u00f1amos un modelo adhesiog\u00e9nico experimental en conejo blanco de nueva zelanda que consisti\u00f3 en el implante de una malla de polipropileno sobre el peritoneo parietal del animal y que induc\u00eda la formaci\u00f3n de adherencias a partir del omentum mayoritariamente.  para dar respuesta a nuestra hip\u00f3tesis, nos propusimos tres objetivos: 1)\tan\u00e1lisis del proceso de formaci\u00f3n adherencial y determinaci\u00f3n del momento de estabilizaci\u00f3n e irreversibilidad de las adherencias mediante el estudio evolutivo de la citoarquitectura del tejido adherencial (3 (n=6), 7 (n=6) y 14 d\u00edas (n=6) post-implante)  y el papel funcional de los factores de crecimiento tgf- y el vegf en dicho proceso. Como tejido control, se emplearon fragmentos de omentum procedente de animales no intervenidos (n=6). 2)\taislamiento y caracterizaci\u00f3n de la poblaci\u00f3n celular mesenquimal presente en el omentum activado por la presencia de la malla de polipropileno (n=6) y de la poblaci\u00f3n celular que compone las adherencias a los 7 d\u00edas post-implante procedente de adherencias de composici\u00f3n mayoritariamente adiposa (n=6) y de composici\u00f3n mayoritariamente fibrosa (n=6). Estudio comparativo de ambas poblaciones celulares en cuanto a su capacidad proliferativa, comportamiento en cultivo y fenotipo. 3)\tdise\u00f1o de un modelo de laparoscopia  secuencial para la evaluaci\u00f3n del proceso de formaci\u00f3n de las adherencias en el grupo control (grupo i, n=8) y la eficacia de la resecci\u00f3n adherencial en el momento elegido seg\u00fan los resultados obtenidos en el primer objetivo (3 d\u00edas post-implante) (grupo ii, n=8) en la prevenci\u00f3n de su reformaci\u00f3n. An\u00e1lisis de las caracter\u00edsticas tisulares del tejido adherencial a largo plazo (90 d\u00edas post-implante, n=6).   \tsobre las muestras procedentes de tejido omental y adherencial de cada tiempo de estudio, se realizaron an\u00e1lisis mediante microscop\u00eda electr\u00f3nica de transmisi\u00f3n; estudios histol\u00f3gicos (tinci\u00f3n con hematoxilina-eosina,  tricr\u00f3mico de masson, rojo sirio, orce\u00edna y ptah); estudios inmunohistoqu\u00edmicos para la determinaci\u00f3n de tgf-b1, lap-tgf b1, tgf-b3, vegf, betaglicano, col\u00e1geno i, col\u00e1geno iii, cd31, desmina, miosina, a-actina de m\u00fasculo liso, nanog, oct-3\/4, macr\u00f3fagos (ram-11) ylinfocitos t cd4, t cd8 y b; western blot (tgf-b1 y lap-tgf b1) y rt-pcr (tgf-b1, vegf, col\u00e1geno  i y col\u00e1geno iii). Las poblaciones celulares procedentes del primer subcultivo (obtenidas a partir del omentum y del tejido adherencial) fueron sometidas a ensayos de viabilidad celular mediante la t\u00e9cnica de exclusi\u00f3n del azul trip\u00e1n, proliferaci\u00f3n celular mediante citometr\u00eda de flujo (cell trace tm cfse cell proliferation kit), ensayos de inmunofluorescencia para la determinaci\u00f3n de c\u00e9lulas positivas para diferentes marcadores (oct-3\/4, ssea-4, podocalixina, cd9, citoqueratina basal, citoqueratina 18, e-caderina, a-actina de m\u00fasculo liso, desmina, miosina, vimentina y cd31) y western blot (podocalixina, desmina y a-actina de m\u00fasculo liso). \ten nuestro tercer objetivo, se evalu\u00f3 el porcentaje de la malla cubierta por adherencias a los 3, 7, 14 y 90 d\u00edas post-implante en ambos grupos de estudio, la capacidad de reformaci\u00f3n de las mismas (grupo ii) tras la resecci\u00f3n adherencial a los 3 d\u00edas post-implante y la superficie de la malla a los 90 d\u00edas en ambos grupos de estudio mediante t\u00e9cnicas histol\u00f3gicas y de microscop\u00eda electr\u00f3nica de barrido. \tlos resultados obtenidos mostraban que la agresi\u00f3n mec\u00e1nica producida por la presencia de un biomaterial sobre el omentum, y la reacci\u00f3n inmune\/inflamatoria de este \u00faltimo generaban una activaci\u00f3n de las c\u00e9lulas mesenquimales subyacentes para generar un tejido de reparaci\u00f3n transitorio y sensible a las se\u00f1ales ambientales que pod\u00eda culminar en la formaci\u00f3n estable de una adherencia omental. En las adherencias de 3 d\u00edas, se iniciaba discretamente el proceso de cicatrizaci\u00f3n as\u00ed como la respuesta inflamatoria (macr\u00f3fagos y linfocitos t cd8). A los 7 d\u00edas post-implante, se observaba un ambiente claramente inflamatorio (con un incremento significativo de las poblaciones linfocitarias t cd4 y b, as\u00ed como de los niveles de tgf-b1, tgf-b3, betaglicano, col\u00e1geno iii y a-actina de m\u00fasculo liso) siendo la formaci\u00f3n adherencial irreversible a partir de este momento y observ\u00e1ndose la diferenciaci\u00f3n tisular hacia dos fenotipos diferentes: adherencias de componente adiposo y adherencias de componente fibroso. Estos dos tipos de respuesta reparadora del omentum ven\u00edan determinados por el balance local de las isoformas tgf-b1 y tgf-b3 que eran dependientes, a su vez, del lugar de ubicaci\u00f3n y patr\u00f3n de distribuci\u00f3n de la respuesta inmunitaria\/inflamatoria. La predominancia de la isoforma tgf-b1 en el tejido adherencial omental se observ\u00f3 de forma conjunta a la diferenciaci\u00f3n de la c\u00e9lula mesenquimal hacia la estirpe miofibrobl\u00e1stica, dando lugar a un proceso cicatrizal. La predominancia de la isoforma tgf-b3 parec\u00eda correlacionarse con un proceso regenerativo del tejido adiposo omental. El tejido adherencial de 14 d\u00edas de madurez mostr\u00f3 la consolidaci\u00f3n de ambos fenotipos tisulares y una disminuci\u00f3n en la reactividad tisular. Se produc\u00eda, a este tiempo, una sobreexpresi\u00f3n g\u00e9nica de tgf-b1, vegf y col\u00e1geno i. La consolidaci\u00f3n a largo plazo (90 d\u00edas) del tejido adherencial y la presencia de glom\u00e9rulos omentales, macr\u00f3fagos y linfocitos t cd4 en este tejido indicaban el mantenimiento o perpetuaci\u00f3n de la respuesta inmune ante la presencia del biomaterial e independiente de la agresi\u00f3n inicial.  \tel an\u00e1lisis detallado y secuencial de los eventos celulares y tisulares del tejido adherencial omental nos permiti\u00f3 establecer que, a los 3 d\u00edas post-implante, las adherencias estaban formadas por un tejido mesenquimal no comprometido ubicado en un ambiente moderadamente inflamatorio, lo que hac\u00eda de este momento el m\u00e1s id\u00f3neo para la prevenci\u00f3n eficaz de su reformaci\u00f3n tras la resecci\u00f3n.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Eventos celulares y tisulares determinantes en la formaci\u00f3n\/ reformaci\u00f3n de las adherencias omentales en un modelo de adhesiog\u00e9nesis experimental<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Eventos celulares y tisulares determinantes en la formaci\u00f3n\/ reformaci\u00f3n de las adherencias omentales en un modelo de adhesiog\u00e9nesis experimental <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Ver\u00f3nica G\u00f3mez Gil <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Alcal\u00e1<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 17\/07\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Julia Bujan Varela<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: javier \u00e1rias d\u00edaz <\/li>\n<li>fulvia Ortolani (vocal)<\/li>\n<li>colette Lacabanne (vocal)<\/li>\n<li>Manuel Garrosa Garc\u00eda (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Ver\u00f3nica G\u00f3mez Gil La 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