{"id":96007,"date":"2018-03-11T10:16:08","date_gmt":"2018-03-11T10:16:08","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/prevalencia-de-virus-entericos-en-moluscos-cultivados-en-galicia-estudio-de-la-fiabilidad-de-microorganismos-indicadores-de-contaminacion-viral\/"},"modified":"2018-03-11T10:16:08","modified_gmt":"2018-03-11T10:16:08","slug":"prevalencia-de-virus-entericos-en-moluscos-cultivados-en-galicia-estudio-de-la-fiabilidad-de-microorganismos-indicadores-de-contaminacion-viral","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/virologia\/prevalencia-de-virus-entericos-en-moluscos-cultivados-en-galicia-estudio-de-la-fiabilidad-de-microorganismos-indicadores-de-contaminacion-viral\/","title":{"rendered":"PreValencia de virus ent\u00e9ricos en moluscos cultivados en galicia. estudio de la fiabilidad de microorganismos indicadores de contaminaci\u00f3n viral"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Mar\u00eda Luz Vilari\u00f1o Becerra <\/strong><\/h2>\n<p>En el medio acu\u00e1tico, se puede encontrar una gran variedad de especies de virus infecciosos para el ser humano, denominados virus ent\u00e9ricos que normalmente se transmiten v\u00eda fecal-oral. Tras su vertido al medio, estos virus pueden sobrevivir durante semanas o meses en la columna de agua o asociados a la materia particulada, acumul\u00e1ndose en los sedimentos. Una consecuencia de este hecho, es que los moluscos obtenidos de zonas polucionadas, pueden estar contaminados con virus ent\u00e9ricos, constituyendo un riesgo potencial para la salud del consumidor. la detecci\u00f3n de virus ent\u00e9ricos a partir de tejidos de moluscos, debido a la baja concentraci\u00f3n en que en ellos aparecen las part\u00edculas virales, implica la extracci\u00f3n y concentraci\u00f3n viral y la amplificaci\u00f3n del \u00e1cido nucleico mediante rt-pcr. Se hace as\u00ed necesario, la elecci\u00f3n de unos m\u00e9todos de extracci\u00f3n y amplificaci\u00f3n que presenten una alta especificidad y sensibilidad. La utilizaci\u00f3n de kits comerciales favorecer\u00eda la estandarizaci\u00f3n necesaria de los m\u00e9todos de detecci\u00f3n de estos virus, entre los laboratorios a nivel mundial. los resultados obtenidos con los kits de rt-pcr evaluados en este estudio mostraron diferencias en la amplificaci\u00f3n del rna de hav. La mayor sensibilidad (0,2-1 ufp\/\u00c2\u00b5l) se obtuvo con el kit superscripttm one-step rt-pcr system (lo que se corresponder\u00eda aproximadamente con 10-50 part\u00edculas f\u00edsicas por microlitro). Este l\u00edmte de sensibilidad fue entre 10 y 250 veces mayor que con el procedimiento normalmente empleado en nuestro laboratorio y con el kit ready-to-gotm rt-pcr beads y de entre unas 100 a 2500 veces con otros kits evaluados. con resepcto a los kits comerciales de extracci\u00f3n de rna, los resultados mostraron que tanto el total quick rna cells &#038; tissues (en sus dos versiones mini y maxi) (talent), como el rneasy\u00c2\u00ae plant mini kit y rneasy\u00c2\u00ae maxi kit, presentaron mejores eficacias de extracci\u00f3n que el protocolo habitual usado de rutina en el laboratorio, siendo el total quick rna cells &#038; tissues versi\u00f3n mini el m\u00e1s efectivo con un l\u00edmite de detecci\u00f3n de 0,1-1 ufp\/mg de tejido digestivo de mejill\u00f3n (equivalente a 5-50 part\u00edculas f\u00edsicas por miligramo).  la adecuada selecci\u00f3n de los cebadores es otro de los pasos m\u00e1s importantes para lograr una sensibilidad y la especificidad adecuadas, particularmente en casos en los que existe heterogeneidad entre las cepas virales. De las parejas de cebadores evaluadas para la detecci\u00f3n de hav, la pareja que mostr\u00f3 la mayor sensibilidad fue la hav240\/hav68 con un rango entre 0,02 y 1 ufp\/\u00c2\u00b5l o g de hepatop\u00e1ncreas siendo \u00e9sta un logaritmo m\u00e1s sensible que la obtenida con la pareja de cebadores havp3 y havp4. En cuanto a la detecci\u00f3n de asv, la mejor sensibilidad se encontr\u00f3 con la pareja de cebadores a1\/a2 (0,1-1 ufp\/\u00c2\u00b5l o g de hepatop\u00e1ncreas), mostr\u00e1ndo una diferencia en sensibilidad mayor de 3 logaritmos en relaci\u00f3n con la pareja av15\/av12.  en base a estos resultados se seleccionaron para el empleo en la detecci\u00f3n de virus ent\u00e9ricos en nuestro laboratorio los kits comerciales total quick rna cells &#038; tissues versi\u00f3n mini para la extracci\u00f3n de rna a partir de muestras de tejido digestivo de moluscos y el kit superscripttm one-step rt-pcr system para la retrotranscripci\u00f3n y amplificaci\u00f3n del rna viral, as\u00ed como la pareja de cebadores hav240\/hav68 para la detecci\u00f3n de hav y a1\/a2 para la detecci\u00f3n de asv.    la uni\u00f3n europea, establece una serie de controles para los moluscos destinados a consumo humano y sus \u00e1reas de producci\u00f3n que est\u00e1n basados en indicadores bacterianos de contaminaci\u00f3n fecal, espec\u00edficamente e. Coli. Seg\u00fan estos controles, los moluscos que presenten m\u00e1s de 230 e. Coli por cada 100 g de carne de molusco y l\u00edquido intervalvar, deben sufrir procesos de depuraci\u00f3n, reubicaci\u00f3n en aguas limpias o tratamientos por calor antes de ser destinados a consumo humano. Sin embargo, muchos estudios demuestran que los controles actuales no garantizan que las muestras que cumplen los criterios establecidos, est\u00e9n libres de contaminaci\u00f3n viral. Entre los indicadores alternativos propuestos, los bacteri\u00f3fagos rna f+ fueron los que acapararon una mayor atenci\u00f3n ya que comparten muchas propiedades f\u00edsicas y gen\u00f3micas con los virus ent\u00e9ricos de inter\u00e9s. para determinar la preValencia de los virus ent\u00e9ricos en moluscos, se realiz\u00f3 un estudio de la contaminaci\u00f3n viral (hav y asv) que presentaban diversas especies de moluscos bivalvos, tanto cultivados como silvestres, procedentes de la r\u00eda de vigo durante un per\u00edodo de 3 a\u00f1os mediante t\u00e9cnicas convencionales de rt-pcr y rt-pcr a tiempo real (rrt-pcr). Adem\u00e1s, en un conjunto de muestras pertenecientes al a\u00f1o 2005 se ampli\u00f3 la detecci\u00f3n a un mayor n\u00famero de especies virales. As\u00ed mismo, y con el fin de establecer la validez de los indicadores, se determinaron las cantidades de e. Coli y bacteri\u00f3fagos rna f+ presentes en las muestras. los resultados mostraron que del total de las muestras, pr\u00e1cticamente la mitad present\u00f3 contaminaci\u00f3n por alguno de los virus estudiados, detect\u00e1ndose coexistencia de ambos virus en una misma muestra. Por otro lado, se observ\u00f3 una mayor contaminaci\u00f3n en las muestras silvestres (57,6%) que en las cultivadas (54,4%). La mayor contaminaci\u00f3n de las muestras silvestres est\u00e1 probablemente relacionada con la situaci\u00f3n de los puntos de muestreo en la costa, donde la influencia de la contaminaci\u00f3n antropog\u00e9nica es mayor. Hav fue el virus que present\u00f3 una mayor preValencia, encontr\u00e1ndose en el 44,3% de las muestras estudiadas. en las muestras en las que se ampli\u00f3 el n\u00famero de especies virales analizados, pertenecientes al a\u00f1o 2005, se observ\u00f3 que el porcentaje de muestras contaminadas por, al menos uno de los virus de estudio, ascendi\u00f3 hasta el 63,4% encontr\u00e1ndose una mayor contaminaci\u00f3n, al igual que en el caso anterior, en las muestras silvestres. El virus que se  detect\u00f3 en un mayor n\u00famero de estas muestras fue el genogrupo ii de nov, que present\u00f3 un claro patr\u00f3n estacional no encontr\u00e1ndose en los meses c\u00e1lidos del a\u00f1o, seguido de ev, asv, nov gi y rv,  y no detect\u00e1ndose en ninguna de ellas ni hav ni aiv. en relaci\u00f3n con la determinaci\u00f3n de los niveles del indicador establecido por la legislaci\u00f3n, e. Coli, y con los bacteri\u00f3fagos rna f+, no se encontr\u00f3 una correlaci\u00f3n estad\u00edsticamente significativa entre los recuentos de indicadores con la presencia viral en las muestras.   por otro lado, se realiz\u00f3 un estudio para ver la potencialidad de los bacteri\u00f3fagos rna f+ como indicadores de contaminaci\u00f3n viral en muestras de moluscos durante distintos tipos de depuraci\u00f3n comercial. Los resultados de este estudio mostraron la pobre eliminaci\u00f3n viral durante los procesos de depuraci\u00f3n, encontr\u00e1ndose los mismos porcentajes de detecci\u00f3n de hav y nov antes y despu\u00e9s de la depuraci\u00f3n (7,6% y 1,5% respectivamente). Los resultados de los bacteri\u00f3fagos rna f+ demostraron, no s\u00f3lo la pobre eliminaci\u00f3n de este posible indicador viral durante el proceso depurativo (s\u00f3lo un 63,6% de los casos estudiados cumplir\u00edan los criterios propuestos), sino una ausencia de correlaci\u00f3n entre los valores de contaminaci\u00f3n detectados en funci\u00f3n de e. Coli o estos bacteri\u00f3fagos, con la presencia de virus. as\u00ed, los resultados de nuestro estudio demostraron que la depuraci\u00f3n no asegura la eliminaci\u00f3n de virus ent\u00e9ricos en moluscos contaminados y que el cumplimiento de los niveles de e. Coli establecidos por ley no garantiza la ausencia de virus en los moluscos destinados a consumo humano.   en las \u00faltimas d\u00e9cadas, en espa\u00f1a se ha incrementado el volumen de importaciones realizadas desde pa\u00edses en desarrollo. Este incremento en las importaciones de moluscos conlleva un problema sanitario asociado, ya que muchas de las \u00e1reas geogr\u00e1ficas origen de las importaciones son end\u00e9micas para enfermedades provocadas por virus ent\u00e9ricos.  Para evitar las infecciones virales transmitidas por moluscos contaminados, todas las importaciones han de pasar los mismos controles que las muestras de origen europeo, basados en el recuento de e. Coli que, como ya se ha mencionado, no garantizan la ausencia de virus.  se realiz\u00f3 un estudio de detecci\u00f3n de virus ent\u00e9ricos en muestras de moluscos importados desde estas \u00e1reas geogr\u00e1ficas. Los resultados mostraron que en m\u00e1s de la mitad de las muestras (51,6%) se encontr\u00f3 alguno de los virus analizados. El virus que mostr\u00f3 una mayor preValencia fue nov gi (32,3%), seguido de asv (22,6%), nov gii (9,7%) y hav (6,4%).   los resultados de estos estudios indican la necesidad de una metodolog\u00eda espec\u00edfica y estandarizada, as\u00ed como de estudios sistem\u00e1ticos de moluscos y sus \u00e1reas de producci\u00f3n, con el fin de evaluar la magnitud real de la contaminaci\u00f3n viral en el medio y su relaci\u00f3n con la epidemiolog\u00eda de las enfermedades ent\u00e9ricas de origen viral. Adem\u00e1s, se pone de manifiesto que el m\u00e9todo m\u00e1s apropiado para determinar la contaminaci\u00f3n v\u00edrica es por medio de la detecci\u00f3n viral directa, y que el empleo de indicadores, sea cual sea la naturaleza de los mismos, es poco fiable. por \u00faltimo, los resultados pusieron tambi\u00e9n de manifiesto la necesidad de un mejor control microbiol\u00f3gico de los moluscos destinados a consumo humano, especialmente de los importados desde \u00e1reas donde enfermedades como la gastroenteritis v\u00edrica y la hepatitis son end\u00e9micas.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>PreValencia de virus ent\u00e9ricos en moluscos cultivados en galicia. estudio de la fiabilidad de microorganismos indicadores de contaminaci\u00f3n viral<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 PreValencia de virus ent\u00e9ricos en moluscos cultivados en galicia. estudio de la fiabilidad de microorganismos indicadores de contaminaci\u00f3n viral <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Mar\u00eda Luz Vilari\u00f1o Becerra <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Santiago de compostela<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 18\/09\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jes\u00fas Angel L\u00f3pez Romalde<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: alicia Estevez toranzo <\/li>\n<li>francoise Le guyader (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda sao Jos\u00e9 Garcia alexandre (vocal)<\/li>\n<li>albert Bosch navarro (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Mar\u00eda Luz Vilari\u00f1o Becerra En el medio acu\u00e1tico, se puede encontrar una gran variedad de especies de 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