{"id":96081,"date":"2018-03-11T10:16:13","date_gmt":"2018-03-11T10:16:13","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/fusion-de-membranas-modelo-inducida-por-fosfolipasas-y-por-fluctuaciones-termicas\/"},"modified":"2018-03-11T10:16:13","modified_gmt":"2018-03-11T10:16:13","slug":"fusion-de-membranas-modelo-inducida-por-fosfolipasas-y-por-fluctuaciones-termicas","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/lipidos\/fusion-de-membranas-modelo-inducida-por-fosfolipasas-y-por-fluctuaciones-termicas\/","title":{"rendered":"Fusion de membranas modelo inducida por fosfolipasas y por fluctuaciones termicas"},"content":{"rendered":"

Tesis doctoral de Maitane Ibarguren Aizpitarte <\/strong><\/h2>\n

El objetivo principal de este trabajo, ha sido profundizar en el conocimiento del mecanismo de fusi\u00f3n de membranas. Para ello se estudi\u00f3 la fusi\u00f3n de ves\u00edculas inducida por fluctuaciones t\u00e9rmicas y por otro lado, la fusi\u00f3n inducida por la fosfolipasa c\/esfingomielinasa de pseudomonas aeruginosa. La fusi\u00f3n de membranas es un paso esencial en muchos procesos biol\u00f3gicos que se han estudiado en numerosos trabajos, pero a\u00fan no se conoce el mecanismo a nivel molecular. \tcomo paso previo, se estudi\u00f3 la incorporaci\u00f3n del colesterol en bicapas lip\u00eddicas, en forma de ves\u00edculas unilamelares. Para ello se cuantific\u00f3 la cantidad de colesterol en bicapas formadas por fosfol\u00edpido:colesterol (con 33-75 mol% de colesterol) y se compar\u00f3 con la mezcla original antes de hidratar el l\u00edpido. En la mayor\u00eda de los casos la proporci\u00f3n de colesterol presente fue menor que la esperada por lo que queda de manifiesto que un an\u00e1lisis cuantitativo de las ves\u00edculas es un requisito previo a la realizaci\u00f3n de cualquier experimento. \tla fusi\u00f3n de ves\u00edculas se indujo mediante el calentamiento gradual de la suspensi\u00f3n de ves\u00edculas entre 20-90\u00c2\u00bac. Una relaci\u00f3n equimolar es necesaria para ver agregaci\u00f3n en la mezcla dopc:chol, la cual ocurr\u00eda a 50\u00c2\u00bac. La mezcla binaria no produce fusi\u00f3n de ves\u00edculas en el rango de temperatura estudiado, aunque la adici\u00f3n de 3 mol% de dag induce fusi\u00f3n de membranas, observada mediante mezcla total de l\u00edpidos y mezcla de l\u00edpidos de la monocapa interna. La resonancia magn\u00e9tica nuclear de f\u00f3sforo 31 (31p-rmn), la difracci\u00f3n de rayos x y la criomicroscop\u00eda electr\u00f3nica (crio-tem) de la mezcla con dag, pero no en su ausencia, demostraron la existencia de una fase hexagonal invertida y tambi\u00e9n de una fase c\u00fabica. Se ha sugerido que los intermediarios de fusi\u00f3n de membranas (stalk) poseen estructuras parecidas a las fases invertidas de los l\u00edpidos. \tse utilizaron la microscop\u00eda confocal de fluorescencia y la calorimetr\u00eda diferencial de barrido para estudiar el comportamiento de la mezcla compuesta por pc:pe:sm:chol en una relaci\u00f3n equimolar, en presencia y ausencia de ceramida. En ausencia de ceramida, se observ\u00f3 en ves\u00edculas unilamerales gigantes la presencia de una fase l\u00edquida-ordenada y una fase l\u00edquida-desordenada, mientras que al a\u00f1adir ceramida se observ\u00f3 una tercera fase de tipo gel. Los propiedades de este dominio tipo gel se parecen a la mezcla binaria sm:ceramida, sugiriendo el desplazamiento del chol por la cer en las regiones l\u00edquidas-ordenadas ricas en sm:chol. As\u00ed pues, tres tipos de dominios pueden coexistir en una ves\u00edcula en presencia de cer: gel, l\u00edquido-ordenado y l\u00edquido-desordenado. Por otro lado, cuando se a\u00f1ade 10 mol% de diacilglicerol en vez de ceramida, las ves\u00edculas formadas poseen los l\u00edpidos distibu\u00eddos homog\u00e9neamente en una fase l\u00edquida-desordenada. \tla uni\u00f3n y la actividad de la fosfolipasa c\/esfingomielinasa de pseudomonas aeruginosa se monitoriz\u00f3 utilizando microscop\u00eda confocal fluorescente en ves\u00edculas unilamelares gigantes. Se marcaron con sondas fluorescentes espec\u00edficas tanto la membrana como el enzima. Se utilizaron guv compuestos de fosfatidilcolina, esfingomielina, fosfatidiletanolamina y colesterol en una relaci\u00f3n equimolar, a los cuales se le a\u00f1adi\u00f3 5-10 mol% de ceramida y\/o dag que son los productos finales del enzima. Estudios morfol\u00f3gicos de los guv en presencia del enzima indicaron que, aunque el enzima difunde r\u00e1pidamente por el campo de observaci\u00f3n, la uni\u00f3n del enzima parece ser lenta y al azar, ya que nuevas ves\u00edculas con enzima unido aparecen pasados varios minutos. Una vez detectadas las primeras uniones del enzima, les sigue una r\u00e1pida uni\u00f3n masiva y una actividad catal\u00edtica m\u00e1s alta. El enzima se une preferentemente a zonas m\u00e1s fluidas (o m\u00e1s desordenadas) y en la mayor\u00eda de los casos, la actividad catal\u00edtica produce una fluidificaci\u00f3n (m\u00e1s desorden) de las ves\u00edculas. Simult\u00e1neamente, ves\u00edculas que contienen dos dominios lip\u00eddicos separados y con forma de cacahuete (forma de 8) se convierten en esf\u00e9ricas. En una etapa posterior a la hidr\u00f3lisis de los l\u00edpidos se forman agregados lip\u00eddicos, seguramente no-lamelares, enriquecidos en enzima y finalmente la vesicular se desintegra. Este \u00faltimo proceso ocurre m\u00e1s r\u00e1pidamente en el caso de ves\u00edculas que contienen desde un principio dominios r\u00edgidos de ceramida. \tpor \u00faltimo, se estudi\u00f3 la fosfolipasa c\/esfingomielinasa plchr2 de pseudomonas aeruginosa en ves\u00edculas que conten\u00edan fosfatidilcolina, esfingomielina, fosfatidiletanolamina y colesterol en una relaci\u00f3n equimolar. La actividad enzim\u00e1tica modifica las propiedades qu\u00edmicas produciendo ceramida y diacilglicerol. Se realizaron estudios bioqu\u00edmicos de la actividad enzim\u00e1tica, y biof\u00edsicos de la agregaci\u00f3n y la fusi\u00f3n de membranas inducidas por el enzima. Los productos finales del enzima, la ceramida y el diacilglicerol, tienen un efecto opuesto en las propiedades f\u00edsicas de la membrana; el diacilglicerol inhibe la segregaci\u00f3n de fases, mientras que la ceramida induce la formaci\u00f3n de una nueva fase, la fase gel. Adem\u00e1s, tienen distinto efecto sobre el enzima: el diacilglicerol aumenta la agregaci\u00f3n y la fusi\u00f3n inducida por el enzima, mientras que la ceramida inhibe la actividad hidrol\u00edtica. La incorporaci\u00f3n en las ves\u00edculas de los dos productos finales causa un aumento en la uni\u00f3n del enzima y una disminuci\u00f3n de los tiempos de latencia en la hidr\u00f3lisis. Se ha encontrado una buena correlaci\u00f3n entre la estructura de la bicapa, uni\u00f3n del enzima a ves\u00edculas individuales y a poblaciones de ves\u00edculas, y la agregaci\u00f3n de ves\u00edculas inducida por el enzima.<\/p>\n

 <\/p>\n

Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00abFusion de membranas modelo inducida por fosfolipasas y por fluctuaciones termicas<\/strong>\u00ab<\/h3>\n
    \n
  • T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Fusion de membranas modelo inducida por fosfolipasas y por fluctuaciones termicas <\/li>\n
  • Autor:<\/strong>\u00a0 Maitane Ibarguren Aizpitarte <\/li>\n
  • Universidad:<\/strong>\u00a0 Pa\u00eds vasco\/euskal herriko unibertsitatea<\/li>\n
  • Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 22\/09\/2009<\/li>\n<\/ul>\n

     <\/p>\n

    Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n
      \n
    • Director de la tesis<\/strong>\n
        \n
      • Felix Mar\u00eda Go\u00f1i Urcelay<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n
      • Tribunal<\/strong>\n
          \n
        • Presidente del tribunal: joshua Zimmerberg <\/li>\n
        • Jes\u00fas Perez gil (vocal)<\/li>\n
        • leonid v. Chernomordik (vocal)<\/li>\n
        • j. peter Slotte (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n

           <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

          Tesis doctoral de Maitane Ibarguren Aizpitarte El objetivo principal de este trabajo, ha sido profundizar en el conocimiento del mecanismo […]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[964,12909],"tags":[12081,197412,25839,197410,197411,197409],"class_list":["post-96081","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-lipidos","category-pais-vasco-euskal-herriko-unibertsitatea","tag-felix-maria-goni-urcelay","tag-j-peter-slotte","tag-jesus-perez-gil","tag-joshua-zimmerberg","tag-leonid-v-chernomordik","tag-maitane-ibarguren-aizpitarte"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/96081","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=96081"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/96081\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=96081"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=96081"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=96081"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}