{"id":96201,"date":"2018-03-11T10:16:21","date_gmt":"2018-03-11T10:16:21","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/deteccion-y-caracterizacion-agronomica-de-viroides-de-ca%c2%adtricos-identificacion-y-caracterizacion-molecular-y-biologica-de-variantes-del-viroide-del-enanismo-de-los-ca%c2%adtricos-cdvd\/"},"modified":"2018-03-11T10:16:21","modified_gmt":"2018-03-11T10:16:21","slug":"deteccion-y-caracterizacion-agronomica-de-viroides-de-ca%c2%adtricos-identificacion-y-caracterizacion-molecular-y-biologica-de-variantes-del-viroide-del-enanismo-de-los-ca%c2%adtricos-cdvd","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/virologia\/deteccion-y-caracterizacion-agronomica-de-viroides-de-ca%c2%adtricos-identificacion-y-caracterizacion-molecular-y-biologica-de-variantes-del-viroide-del-enanismo-de-los-ca%c2%adtricos-cdvd\/","title":{"rendered":"Detecci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n agron\u00f3mica de viroides de c\u00edtricos. identificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n molecular y biol\u00f3gica de variantes del viroide del enanismo de los c\u00edtricos cdvd."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Nubia Murcia Ria\u00f1o <\/strong><\/h2>\n<p>Los c\u00edtricos son hu\u00e9spedes naturales de diferentes especies de viroides, todos pertenecientes a la familia pospiviroidae. Estudios preliminares para detectar viroides en especies y variedades comerciales dieron resultados err\u00e1ticos, excepto cuando se utilizaba la especie indicadora cidro etrog como hu\u00e9sped bioamplificador. Para evitar el uso de este hu\u00e9sped en los ensayos de detecci\u00f3n, se desarroll\u00f3 un m\u00e9todo basado en la hibridaci\u00f3n northern. El protocolo desarrollado consist\u00eda en: (i) extracci\u00f3n de \u00e1cidos nucleicos de muestras de corteza recolectadas en diferentes \u00e9pocas y\/o almacenadas en distintas condiciones; (ii) separaci\u00f3n de los rnas en 5% page o 1% agarosa y transferencia a membranas; (iii) hibridaci\u00f3n con sondas de dna marcadas con digoxigenina (dig) espec\u00edficas para cada viroide, detecci\u00f3n con un anticuerpo anti-dig conjugado con fosfatasa alcalina y revelado con un substrato quimioluminiscente (cspd). Con este m\u00e9todo se pueden detectar viroides en todas las especies de c\u00edtricos ensayadas. La t\u00e9cnica es extremadamente sensible, y acorta el tiempo necesario para la detecci\u00f3n fiable de los viroides de c\u00edtricos conocidos hasta el momento.  la aplicaci\u00f3n de esta t\u00e9cnica ha permitido realizar prospecciones en \u00e1rboles cultivados en distintas regiones citr\u00edcolas de colombia, per\u00fa y brasil. En limas tahit\u00ed de colombia se han identificado infecciones m\u00faltiples con hsvd y cdvd o con cevd, hsvd y cdvd. Las muestras procedentes del banco de germoplasma de palmira estaban libres de viroides, excepto una fuente de cidro etrog que estaba infectada con cevd y cdvd. La caracterizaci\u00f3n molecular de los aislados de hsvd, cdvd y cevd recuperados de las muestras analizadas ha mostrado que: (i) todos los aislados de hsvd carec\u00edan del motivo de expresi\u00f3n de la caquexia, por lo que se trata de variantes no patog\u00e9nicas, excepto uno que si conten\u00eda dicho dominio; (ii) los aislados de cdvd conten\u00edan variantes con alta identidad nucleot\u00eddica con la variante de referencia cvd-iiib; (iii) uno de los aislados de cevd (cevdco) procedente de un cidro etrog asintom\u00e1tico presentaba una identidad nucleot\u00eddica del 96,5% con la secuencia de referencia de la clase a (que engloba las variantes agresivas de este viroide) y del 98,9% con la secuencia de referencia v1 que induce s\u00edntomas muy agresivos en cidro etrog. Los cambios nucleot\u00eddicos entre cevdco y la variante v1 son: u186a (dominio tr), a235u (dominio v) y au313-314ga (dominio p). Dada la probada implicaci\u00f3n del dominio p en la patog\u00e9nesis del cevd, se han obtenido mutantes en las posiciones 313-314 de v1 y cevdco para poder demostrar si los cambios identificados en cevdco son efectivamente los responsables de que los cidros infectados con dicho aislado de cevd no manifiesten s\u00edntomas.  el an\u00e1lisis de clones de lima tahit\u00ed  procedentes de per\u00fa y brasil que manifiestan el s\u00edndrome del \u00abquebra-galho\u00bb (expresi\u00f3n que en portugu\u00e9s significa rama quebradiza), caracterizado por el agrietado de la corteza, enanismo y porte abierto de la copa, pero con caracter\u00edsticas productivas deseables, ha mostrado que se encontraban infectados con cevd, hsvd y cdvd (clones de per\u00fa) o con cevd y cdvd (clones de brasil). Los resultados de un estudio realizado en condiciones de campo para determinar si estos viroides son los responsables del s\u00edndrome del \u00abquebra-galho\u00bb han mostrado que el cevd induce agrietado de la corteza en lima tahit\u00ed despu\u00e9s de dos a\u00f1os de efectuada la inoculaci\u00f3n, pero se requiere un mayor desarrollo de los \u00e1rboles, para confirmar que este viroide es efectivamente responsable todos los s\u00edntomas caracter\u00edsticos del s\u00edndrome del \u00abquebra-galho\u00bb. el viroide del enanismo de los c\u00edtricos (cdvd) se encuentra muy difundido en diferentes regiones citr\u00edcolas pero sus efectos pasan inadvertidos debido a que no produce s\u00edntomas espec\u00edficos a pesar de haberse probado que causa una reducci\u00f3n del tama\u00f1o del \u00e1rbol. Se ha realizado un estudio exhaustivo dirigido a identificar y caracterizar distintas variantes de este viroide a partir de 33 aislados. El an\u00e1lisis sscp ha mostrado que cada aislado conten\u00eda poblaciones de variantes de secuencia y con la informaci\u00f3n obtenida se identific\u00f3 y secuenci\u00f3 la variante m\u00e1s frecuente, y por tanto la m\u00e1s representativa de cada aislado. El an\u00e1lisis filogen\u00e9tico ha permitido establecer su relaci\u00f3n con las variantes de referencia (cvd-iiia, cvd-iiib y cvd-iiic). Se seleccionaron cinco secuencias representativas de cada uno de los cinco grupos mayoritarios del \u00e1rbol filogen\u00e9tico para su caracterizaci\u00f3n biol\u00f3gica en cidro etrog. Con los datos de crecimiento y la expresi\u00f3n de s\u00edntomas se ha establecido que dos variantes se comportaron como razas agresivas, dos como moderadas y una como muy suave. Los cambios encontrados en estas variantes fueron relacionados con la modulaci\u00f3n de los s\u00edntomas. para analizar el efecto de los viroides en el comportamiento del cultivo en campo, se realiz\u00f3 el seguimiento y toma de datos de una parcela establecida con \u00e1rboles de naranjo dulce washington navel injertado en citrange carrizo e inoculados con doce fuentes de viroides. El an\u00e1lisis estad\u00edstico de los par\u00e1metros estudiados (altura del \u00e1rbol, grosor del tallo, tama\u00f1o de la copa y cantidad y calidad de la cosecha) tomados durante cuatro campa\u00f1as sucesivas mostraron que exist\u00edan pocas diferencias estad\u00edsticas entre los distintos tratamientos.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Detecci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n agron\u00f3mica de viroides de c\u00edtricos. identificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n molecular y biol\u00f3gica de variantes del viroide del enanismo de los c\u00edtricos cdvd.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Detecci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n agron\u00f3mica de viroides de c\u00edtricos. identificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n molecular y biol\u00f3gica de variantes del viroide del enanismo de los c\u00edtricos cdvd. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Nubia Murcia Ria\u00f1o <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Polit\u00e9cnica de Valencia<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 25\/09\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Nuria Duran Vila<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: ricardo Flores pedauye <\/li>\n<li>carmen Fagoaga garcia (vocal)<\/li>\n<li>Luis Rubio migu\u00e9lez (vocal)<\/li>\n<li>pedro Moreno g\u00f3mez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Nubia Murcia Ria\u00f1o Los c\u00edtricos son hu\u00e9spedes naturales de diferentes especies de viroides, todos pertenecientes a la 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